野牛草成熟胚植株再生及其影响因素研究

以野牛草Buchloe dactyloides成熟胚为外植体,对外植体灭菌方式及影响成熟胚再生的因素进行了研究.结果表明:70%酒精处理60 s,75% NaClO溶液(原溶液含有效氯为7%～10%)处理30 min,污染率最低为0.59%.6-BA 0.1 mg/L,2,4-D浓度增至3 mg/L时,愈伤组织诱导率达最高,为80.27%,但愈伤组织结构疏松、呈水渍状.附加5 mg/L硝酸银(AgNO3)或硫代硫酸银(STS)时,愈伤组织诱导率略有降低,愈伤组织结构紧密且表面有颗粒状突起,当AgNO3或 STS浓度为10 mg/L以上时,均不利于愈伤组织的诱导.愈伤组织继代培养过程中,3/4倍MS大量元素用量、聚乙烯吡咯烷酮(PVP) 200 mg/L、维生素C(Vc )200 mg/L及水解酪蛋白(CH) 1 000 mg/L可减轻愈伤组织褐化程度.不同诱导培养基所获得的愈伤组织与其植株再生能力有关,以不加任何植物生长调节剂的MS培养基(MS0)为分化培养基,仅在附加STS的诱导培养基中所得的愈伤组织能够形成再生植株,再生率为10%.     

白羊草成熟胚组织培养及植株再生体系的建立

以白羊草(Bothriochloa ischaemum(L.)Keng)成熟胚为外植体,研究不同激素及其不同配比对愈伤组织诱导发生与生长状态及其绿苗分化能力的影响。从而建立了白羊草植株再生体系,为开展生物技术育种提供参考。结果表明:在愈伤组织诱导培养基中添加2.0 mg/L 2,4-D诱导频率为86.7%,MSB和MS培养基对愈伤组织诱导效果相近;在其继代培养基中添加1.0 mg/L 2,4-D愈伤组织增殖快,且保持胚胎发生能力;适宜的分化培养基为6-BA 0.1 mg/L+NAA 0.05 mg/L,分化率达61.3%;愈伤组织在不添加任何生长调节剂的培养基上即可生根。     

红三叶组织培养及再生植株

本文采用ＭＳ，Ｂ５和ＰＣ一Ｌ２作为基本培养基，在不同激素组合条件下对红三叶（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍｐｒａｔｅｎｓｅ）子叶及下胚轴进行组织培养。在ＭＳ，Ｂ５和ＰＣ一Ｌ２附加２ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ和０．５ｍｇ／ＬＢＡ的培养基上，子叶及下胚轴愈伤组织诱导率均在８９％以上。愈伤组织继代在Ｂ５无机盐十三倍ＭＳ有机成分＋３％蔗糖＋０．５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ＋０．５ｍｇ／Ｌ６ＢＡ０．２ｍｇ／ＬＮＡＡ，＋１０ｍｇ／ＬＶｃ的培养基上生长良好。愈伤组织在Ｂ５附加０．１ｍｇ／Ｌ６ＢＡ＋０．２ｍｇ／ＬＩＢＡ的培养基上再生植株。下胚轴在ＭＳ附加２ｍｇ／Ｌ６ＢＡ＋１ｍｇ／ＬＮＡＡ的培养基上直接分化形成丛生苗，转入无激素ＮＳ培养基上再生根。实验表明ＶＥ，Ｖｃ，ＰＶＰ和活性碳对愈伤组织褐化有抑制作用，１０ｍｇ／ＬＶｃ抗褐化作用最好。     

蒙农杂种冰草成熟胚愈伤组织的诱导及植株再生

以蒙农杂种冰草成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织的诱导进行植株再生,结果表明:在附加甘露醇(0.2mol/L)和2,4-D(2.0mg/L)的MS培养基中,冰草成熟胚可诱导产生愈伤组织,诱导率为87.6%,但质量较差;将其在降低2,4-D浓度和添加6-BA的继代培养基中继代改造,可明显改善愈伤组织质量,增加胚性愈伤;将筛选改良的愈伤组织置于分化培养基MS+ZT(3.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)中,分化率为82%;分化小苗在1/2MS培养基上可生根并得到完整植株.本研究还建立了一套有效的以成熟胚为外植体的蒙农杂种冰草组织培养再生体系.     

大赖草的组织培养及植株再生的研究

大刺草在成熟胚在含有２ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ的ＭＳ培养上形成颗粒状愈伤组织，减少培养基中的２，４－Ｄ浓度，愈伤组织分化出绿色的芽点。生根培养基为不含任何激素的ＭＳ培养基，有分化能力的愈伤组织可以在保持培养基（ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ＋０．５ｍｇ／ＬＢＡＰ）上长期保存，利用这一培养程序可以快速，大量地繁殖大赖草，文章还对外源激素在植物组织培养中的作用进行了讨论。     

野生结缕草成熟胚愈伤组织诱导及再生体系的研究

以野生结缕草(Zoysia japonica)的成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生。试验结果表明,不同的预处理方法对愈伤组织的诱导有较大的影响,经研钵研磨去除种子颖壳,30%NaOH浸泡1min,流水冲洗30 min处理的成熟胚在MS+2,4-D(3 mg/L)+6-BA(0.1 mg/L)为最佳,愈伤组织诱导率达82.67%。将愈伤组织在2,4-D(2 mg/L)和6-BA(0.2~0.5 mg/L)的继代培养基中继代1~2次,可明显改善愈伤组织状态,增加胚性愈伤数。筛选继代后的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+KT(1 mg/L)+NAA(0.1 mg/L)中,分化率达86%。分化后的簇状植株移栽成活率达100%。     

草麻黄的组织培养及植株再生

将草麻黄幼草节间幼茎部分作外植体,培养在附加ＫＴ０．０５４ｍｇ／ｌ＋２,４－Ｄ１．１１ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基中,可成功诱导出愈伤组织,愈伤组织分化出芽;同样的外本培养在附加ＢＡ３ｍｇ／ｌ＋ＩＡＡ０．２ｍｇ／ｌ的ＭＳ培养基中,诱导出大量不定芽;不同途径得到的芽转移到ＭＳ附加６－ＢＡ０．０５６ｍｇ／ｌ＋１．１１ｍｇ／ｌ２,４＋１１．１１ｍｇ／ｌ２,４－Ｄ的培养基后,可分化出不定根,从而形成完整植株。     

松南结缕草成熟胚愈伤组织的诱导和再生

松南结缕草成熟种子经灭菌和打破休眠后,接种于含有不同浓度2,4-D的MS和N6培养基上进行愈伤组织诱导。结果表明,结缕草种子的休眠主要在于破除种壳。2,4-D浓度在2~5 mg/L对愈伤组织诱导率无明显影响。基本培养基MS和N6诱导效果相近,初生愈伤组织为白色、半透明,质地松软、水浸状。继代培养基中添加一定浓度的甘露醇、麦芽糖和ABA以及延长继代时间有助于愈伤组织的胚性化。基本培养基MS更适于结缕草初生愈伤组织致密胚性化。胚性愈伤组织在MS添加0.1 mg/L 2,4-D培养基上即可分化出大量具有根和茎叶的再生植株。     

皇竹草组织培养再生植株研究

以皇竹草腋芽或顶芽作外植体，接种在脱分化培养基上培养，可获得胚性愈伤组织。将愈伤组织转接在再分化培养基上即可产生胚状体再生植株，获得的再生植株经多次切割后其基部又能产生不定芽形成再生植株，由此可获得大量的皇竹草再生植株建立起皇竹草快繁体系，为牧草生产提供优质种苗。     

高羊茅成熟胚离体培养及高频植株再生

以高羊茅Festuca arundinacea成熟种子为外植体,采用均匀设计研究了不同生长调节剂、基因型和培养基对愈伤组织诱导的影响.结果表明:2,4-D对高羊茅成熟种子萌芽及愈伤组织诱导的影响极大;基因型对愈伤组织诱导有一定影响;培养基对愈伤组织诱导无任何影响;愈伤组织在不添加任何生长调节剂的培养基上即可进行分化.高羊茅最佳愈伤组织诱导培养基组合为N6 18 mg/L 2,4-D,外植体为"王朝"成熟种子的愈伤组织诱导率可达95.6%,且植株分化率达100%.     

日本结缕草植株再生体系的研究

以日本结缕草的成熟胚为外植体,对其组织培养体系进行了优化.试验结果表明,1)培养基中添加脯氨酸能提高愈伤组织诱导率,而添加BA能降低愈伤组织的诱导率,低浓度的NAA(0.1～0.2 mg/L)能促进愈伤组织的形成,愈伤组织诱导的最佳培养基为ND 2,4-D 3.0 mg/L NAA 0.2 mg/L L-Pro 500 mg/L,愈伤组织诱导率达57.3%;2)愈伤组织继代的最佳培养基为MSD 2,4-D 1.0 mg/L;3)愈伤组织分化的最佳培养基为MSD NAA 0.3 mg/L KT 0.5 mg/L BA 0.05 mg/L,分化率达36.7%.     

两个高羊茅品种成熟种子再生体系的建立

以2个高羊茅品种(“Plantation”和“沪坪1号”)的成熟种子为外植体,在MS培养基上分别添加不同浓度的2种植物生长调节剂,探索其愈伤组织的诱导、继代和分化的最佳激素配比及其相互间的影响,以建立简便高效的再生体系。结果表明,完整高羊茅种子最佳的愈伤诱导培养基为MS+2,4-D 3 mg/L,诱导率为71%;而把成熟种子进行纵切后得到的半粒种子的较优的愈伤诱导培养基为MS+2,4-D 2.5 mg/L,诱导率占半粒种子外植体的60%,占完整种子(2个半粒种子)外植体的90%以上;在最优诱导培养基上产生的愈伤组织的最佳继代培养基为MS+2,4-D 3 mg/L,其胚性愈伤诱导率为70%,而添加6-BA则抑制2,4-D对胚性愈伤组织的诱导;不同品种的最优的分化培养基不同——“Plantation”的最优分化培养基为MS+2,4-D 1 mg/L+6-BA 1 mg/L,而“沪坪1号”的最佳组合是MS+2,4-D 2 mg/L+6-BA 1 mg/L,分化率分别达到50%和56%。生根培养基采用已报道的组合1/2MS+NAA 0.5 mg/L,生根率达100%。     

小麦成熟胚离体培养及植株再生技术优化

本实验利用冬小麦品种周麦27成熟胚进行了愈伤组织诱导和植株再生技术的优化,以提高小麦成熟胚离体再生频率,为以成熟胚进行遗传转化奠定基础。探讨了外植体不同接种方法、Dicamba浓度和细胞分裂素种类、转分化时间和愈伤组织干燥处理等因素对小麦成熟胚愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明, 1)小麦成熟胚十字形切割法接种愈伤组织分化率较高,达到66.7%,分别是刮胚法和整胚接种的2.1和4.3倍;2)附加2,4-D 和Dicamba均可以高频率诱导成熟胚愈伤组织的形成,但Dicamba诱导形成的愈伤组织分化率高于2,4-D的达4倍之多,在Dicamba浓度为2.0~4.0 mg/L时愈伤组织诱导和分化效果较好;3)愈伤组织在附加2.0 mg/L 6-BA的分化培养基上分化率最高为45.8%,其次为在不含激素或含KT 2.0 mg/L时分化率分别达到38.5%和37.0%,而在附加TDZ和ZT时分化率较低;4)成熟胚外植体在诱导培养2~3周后进行分化培养,绿苗分化率最高;5)愈伤组织分化前干燥处理6 h愈伤组织分化率略有提高,但与未干燥处理的相比差异不显著,而干燥12 h后分化率却明显降低。     

小花碱茅组织培养植株再生体系的建立

以小花碱茅成熟种子为外植体,研究了脱颖处理和不同激素配比对愈伤组织诱导和分化的影响,成功建立了其组织培养植株再生体系。结果表明,种子脱颖处理显著提高了种子发芽率,降低了污染率;诱导愈伤组织的最佳培养基为添加5.0 mg/L 2,4-D的MS培养基,诱导率可达55.2%,2周可见白色愈伤组织;最佳芽分化培养基为添加1.0 mg/L 6-BA和0.5 mg/L NAA的MS培养基,分化率可达31.7%,同时伴随根毛的发生,生根率达81.7%,诱导时间为2周;分化后的再生苗移植于1/2MS培养基上,100%生根,炼苗移栽后可全部成活。从小花碱茅种子诱导愈伤组织到植株再生共需16周左右。小花碱茅组织培养植株再生体系的建立为进一步探究小花碱茅耐盐碱分子机制奠定了基础。     

早开堇菜组织培养及植株再生体系的建立

以野生早开堇菜为材料,研究了不同外植体类型(子叶节、叶片、叶柄)和不同激素配比对其不定芽诱导、愈伤组织诱导和分化的影响,成功建立了早开堇菜组织培养植株再生体系。结果表明,1) 诱导子叶节和叶柄不定芽诱导的最适培养基为 MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,叶片不适合作为直接诱导不定芽的外植体。2) 3种外植体均能诱导愈伤组织,子叶节愈伤组织诱导的时间最短,其次为叶柄,叶片最晚。子叶节和叶柄愈伤组织诱导的最适培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D,诱导率分别为98.3%和96.7%;叶片愈伤组织诱导的最适培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D+0.05 mg/L NAA,诱导率可达88.3%。3) 最适愈伤组织分化培养基为:MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,分化率为100%。4)不定芽增殖的最佳培养基为:MS+1.5 mg/L 6-BA+0.075 mg/L NAA,增殖率为4.68。 5)再生苗移植到添加1.0 mg/L 6-BA的1/2 MS培养基上,生根率92.3%。6)组培苗移栽到珍珠岩∶河沙∶腐殖质(1∶2∶2)的混合基质时,100%成活,且植株长势好。     

影响冰草成熟胚组织培养再生体系频率的因素

对影响冰草成熟胚组培再生体系频率的2个因素——基因型和脱落酸(ABA)进行了研究,以期为当前冰草的基因转化提供最佳的再生体系。研究表明,在相同的培养条件下,4个基因型(品种)冰草成熟胚愈伤组织诱导能力和分化能力有明显的差异,4个基因型中以蒙古冰草成熟胚在愈伤组织诱导、分化等方面表现最佳,愈伤组织诱导率和分化率分别达到95％和72%,是遗传转化的良好受体材料;继代培养基中附加0.3mg/L脱落酸(ABA)可以明显改善冰草成熟胚愈伤组织状态,增加胚性愈伤组织率,从而提高分化率。