不同免疫增强剂对肉鸡禽流感免疫效果的影响试验

试验选用盐酸左旋咪唑,黄芪多糖粉剂,黄芪多糖注射液作为免疫增强剂,并设空白对照组,观察其对肉鸡禽流感免疫效果和生产性能的影响。结果表明,黄芪多糖粉剂,黄芪多糖注射液和盐酸左旋咪唑对肉鸡禽流感均有较好的免疫增强作用,黄芪多糖粉剂和黄芪多糖注射液在促进肉鸡禽流感抗体效价方面作用相似,与盐酸左旋咪唑作用效果差异不显著;在提高增重和E玫瑰花环形成率方面黄芪多糖粉剂和黄芪多糖注射液效果相当,且均优于盐酸左旋咪唑。     

长链CpG寡脱氧核苷酸DNA重组质粒对禽流感灭活疫苗免疫应答的影响

为明确导入长链CpG寡脱氧核苷酸3个DNA重组质粒对禽流感H5亚型灭活疫苗的免疫应答的影响,将21日龄试验雏鸡随机分为6组,即健康对照组(A组)、疫苗对照组(B组)、空载体对照组(C组)、pUC26免疫促进组(D组)、pUC30免疫促进组(E组)及pUC44免疫促进组(F组),对6组雏鸡在首免后1～8周(WPI)检测其HI抗体水平并在1、4及8 WPI测定脾脏、法氏囊及胸腺免疫器官指数.研究结果表明:在2WPI,D(P<0.01)、F(P<0.01)及E组(P<0.05)HI抗体水平极显著或显著高于C组;在3WPI,F组HI抗体水平分别显著高于B(P<0.05)、C(P<0.05)及E组(P<0.05);在5WPI,F(P<0.01)和D(P<0.05)组HI抗体水平极显著或显著高于C组;在6 WPI,F组HI抗体水平显著高于C组(P<0.05);在8 WPI,F组HI抗体水平极显著高于B(P<0.01)或C组(P<0.01).在4WPI,A组胸腺指数极显著或显著高于C(P<0.05)及D组(P<0.01),E组胸腺指数显著高于D组(P<0.05);在8WPI,E组脾脏指数显著高于A组(P<0.05).     

细菌CpG DNA对鸡接种禽流感病毒H9亚型灭活苗的免疫增强作用

为了探讨细菌核酸对 H9亚型禽流感病毒灭活疫苗的免疫增强作用 ,将 1 5日龄蛋用公鸡 1 2 0只随机分为 4组 ,即空白组、抗原组、细菌核酸佐剂组及白油佐剂组 ,每组 30只。于 2 8日龄时 ,细菌核酸佐剂组以灭活 H 9亚型禽流感病毒作为抗原 ,大肠杆菌牦牛株核酸作为佐剂 ,免疫接种于试验鸡 ,用 XTT法检测 T、B淋巴细胞增殖反应 ,并用血凝与血凝抑制法检测血清抗体水平。结果显示 ,在细菌核酸佐剂组 ,鸡的血凝抑制抗体水平和 T、B淋巴细胞增殖反应均显著高于抗原单独免疫组 (P<0 .0 5 ) ,而免疫组均显著高于空白组 (P<0 .0 5 ) ;细菌核酸佐剂组的抗体滴度峰值略高于白油佐剂组 (P>0 .0 5 ) ,但 T、B淋巴细胞增殖指数峰值显著高于白油佐剂组 (P<0 .0 1 )。结论认为 ,大肠杆菌牦牛株核酸可显著增强免疫鸡对禽流感病毒 H9亚型灭活疫苗的免疫反应 ,其免疫增强效果略高于常规油佐剂     

重组SEA增强H5亚型禽流感灭活疫苗对肉鸡的免疫效果研究

为评价重组葡萄球菌肠毒素A(rSEA)对H5亚型禽流感病毒(AIV)灭活疫苗免疫效果的影响,本研究以原核表达的rSEA为免疫增强剂,制备成含有rSEA高(167 μg/0.5 mL)、低(16.7 μg/0.5 mL)两种剂量的AIV油乳剂灭活苗,分别免疫7d龄肉鸡,通过检测免疫鸡AIV HI抗体滴度及外周血CD4+/CD8+值评价其免疫效果.HI 抗体检测结果显示,免疫后2周高剂量组HI抗体平均滴度为5.6 log2,低剂量组为4.2 log2,而无rSEA疫苗对照组为2.9 log2(p＜0.01);同时在免疫后前4周,rSEA免疫组的HI抗体平均滴度及峰值与对照组相比均差异显著(p＜0.05).T淋巴细胞亚群检测结果显示,肉鸡免疫高剂量rSEA的灭活苗后,其外周血CD4+百分含量及CD4+/CD8+值均显著高于对照组(p＜0.05).上述结果表明,rSEA作为AIV灭活苗免疫增强剂,能够快速诱导较高的HI抗体滴度,同时也可增强细胞免疫反应,有效缩短免疫空白期,使肉鸡短时间内产生较强的免疫应答反应.     

免疫增强剂对不同肉鸡禽流感疫苗免疫效果探讨

试验将筛选获得的免疫增强剂与现有商品化禽流感疫苗混合后免疫10～15日龄的白羽肉鸡、黄羽肉鸡或麻鸡,在免疫后的第2、3、4周采血用于检测血凝抑制抗体效价,统计饲料用量,并在各品种鸡达到出栏日龄时,检测出栏重、料肉比和死淘率.结果显示,3种肉鸡免疫含免疫增强剂伴侣的H5亚型禽流感疫苗,抗体产生比常规疫苗提前1周达到7 log2,平均HI抗体效价显著高于常规疫苗;不同疫苗免疫鸡与对照鸡在出栏重和料肉比方面无显著差异,在饲养期间无死淘情况.综合上述结果提示,免疫增强剂能显著提高禽流感疫苗在肉鸡的免疫效力,同时对生产性能无明显影响.     

细菌CpG—DNA对犬免疫增强效果的研究

以犬瘟热病毒为模式病毒，将CpG-DNA与铝胶、蜂胶2种对照佐剂分别与犬瘟热病毒灭活疫苗配合，给犬接种疫苗前后用微量中和试验抽查血清中和抗体效价，根据抗体效价高低判断佐剂的免疫增强效果。结果表明，3种佐剂疫苗均能诱导产生特异性抗体，但组间抗体效价有显著差异（P＜0．01），CpG-DNA的免疫增强作用明显高于其它2种佐剂，CpG-DNA所诱导的抗体效价较蜂胶佐剂高5倍，较铝胶佐剂高7倍。     

H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对商品蛋鸡的免疫保护效果

将密码子及表达载体优化的H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5以50μg和10μg剂量单次或加强免疫5周龄海兰褐蛋鸡。单次免疫后3周及加强免疫后2周,用100LD50高致病力禽流感病毒A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[Gs/GD/1/96(H5N1)]鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况,并分别于攻毒后3、5、7d采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、AGP抗体的动态变化。结果表明,pCAGGoptiHA5以10μg加强免疫后,可以诱导商品蛋鸡产生较高水平的HI抗体,并可保护免疫蛋鸡不发生高致病性禽流感病毒攻击后的死亡。     

H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对高致病力禽流感病毒攻击的免疫保护

对H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5的免疫效果进行了研究。pCAGGoptiHA5分别以100和10μg剂量一次或两次免疫3周龄SPF鸡，首次免疫后4周以同样剂量和途径进行第二次免疫，一次免疫后4周、两次免疫后2周分别用100LD50的HPAIV A／Goose／GuangDong／1／96（H5N1）鼻腔途径进行攻击，观察发病与死亡情况，分别于攻毒后第3、5、7天采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况，同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、NT抗体以及AGP抗体的动态变化。结果，100μg pCAGGoptiHA5一次免疫、100μg pCAGGoptiHA5两次免疫以及10μg pCAGGoptiHA5两次免疫均可对免疫鸡形成100％完全保护（不发病、不致死、不排毒），10μg剂量pCAGGoptiHA5一次免疫可对免疫鸡形成100％的保护（不发病、不致死），结果表明，pCAGGoptiHA5作为疫苗效果良好、成本低廉，有望成为预防H5亚型高致病力禽流感的高效、安全新型基因工程疫苗。     

不同免疫增强剂影响肉鸡禽流感免疫效果及生长的试验

免疫调节剂是用于调节和控制免疫功能的药物,包括免疫抑制剂和免疫增强剂。免疫增强剂是一类单独使用或抗原同时使用、通过非特异性途径增强机体的免疫应答的物质。它可增强机体的免疫系统功能,缓解由环境造成的免疫功能紊乱,有利于预防和治疗传染性和条件性疾病。目前在临床上常用的免疫增强剂有很多,如：卡介苗、盐酸左旋咪唑、香菇多糖、胸腺素、白细胞介素-2（白介素-2）和黄芪多糖等等。本试验选用黄芪多糖粉剂、黄芪多糖注射液、盐酸左旋咪唑药物作为免疫增强剂,来探明不同免疫增强剂对肉鸡禽流感免疫功能和生长促进的影响差异。     

免疫增强剂对猪瘟疫苗免疫效果的影响

为查明免疫增强剂是否能够提高猪瘟疫苗免疫抗体水平,选用猪用转移因子与黄芪多糖注射液直接稀释猪瘟兔化高效细胞弱毒苗的方法进行猪瘟疫苗免疫试验。与对照组相比,猪用转移因子直接稀释猪瘟兔化高效细胞弱毒苗组S/P平均值首免后10 d提高127.27%,差异显著（P＜0.05）;首免后20 d提高156.60%,差异极显著（P＜0.01）;整个试验期提高57.05%。与黄芪多糖注射液直接稀释猪瘟兔化高效细胞弱毒苗组相比,S/P平均值首免后10 d提高131.48%,差异显著（P＜0.05）;首免后20 d提高91.55%,差异显著（P＜0.05）;整个试验期提高31.84%。证明猪用转移因子直接稀释猪瘟疫苗可提高猪瘟疫苗的免疫抗体水平;同时也揭示采用断奶前后首免、60日龄左右二免的猪瘟疫苗免疫程序,仔猪在首免后10～30 d免疫抗体S/P值低,阳性率在60%以下,易感染猪瘟野毒。     

禽流感-新城疫重组二联活疫苗与重组禽流感灭活疫苗组合免疫效果观察

为进一步了解、掌握禽流感-新城疫重组二联活疫苗及与重组禽流感灭活疫苗组合使用的免疫效果,本研究以麻花鸡作为试验对象,制定了4种不同的免疫程序,分别对4组试验鸡群进行免疫,通过测定各组鸡只产生的免疫抗体效价和免疫抗体合格率,以评价二联活疫苗及与禽流感灭活疫苗的免疫效果。试验结果表明:禽流感-新城疫重组二联活疫苗单独用于肉鸡禽流感H5免疫预防抗体效价低于4 log2;建议禽流感-新城疫重组二联活疫苗可以与重组禽流感病毒灭活疫苗组合使用,两种疫苗免疫时间间隔2周左右,以免抑制机体产生对新城疫的免疫应答。     

H5亚型高致病性禽流感二价灭活疫苗对不同日龄家禽的免疫原性研究

为找出禽流感母源抗体及免疫抗体消长规律,对不同日龄的蛋鸡进行了免疫,并进行了跟踪检测,为制定禽的免疫程序提供科学依据。从试验结果可见,雏鸡母源抗体水平与种鸡的抗体水平相关,种鸡血清中H5亚型禽流感HI抗体水平与子代母源抗体消长规律呈正比。     

重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗免疫效果评估

2017年7月,农业部决定对全国家禽开展H7亚型流感免疫。为评价重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对家禽的安全性及免疫效果,2017年10—12月以田间试验方式,常规养殖肉鸡(江村黄鸡)、樱桃谷白鸭、黑棕鹅各120只。按程序免疫:肉鸡9日龄首免(剂量0.3 mL),30日龄二免(剂量0.5 mL);樱桃谷白鸭15日龄首免(剂量1 mL);黑棕鹅15日龄首免(剂量1 mL)、50日龄二免(剂量1.5 mL)。定期采集血清测定抗体效价直至出栏,并每日观察禽群临床表现。试验结果显示:鸡首免后21 d,H5亚型HI抗体效价为4.2 log2,抗体合格率均小于70%,H7亚型HI抗体效价为7.5 log2,抗体合格率均大于70%;二免后H5和H7亚型HI抗体效价均大于8 log2,抗体合格率均大于70%。鸭首免后21 d,H5亚型HI抗体效价为5.1 log2,抗体合格率均大于70%,H7亚型HI抗体效价为5.6 log2,抗体合格率均大于70%,出栏前(47日龄)H5和H7亚型HI抗体效价均大于6 log2,抗体合格率均大于70%。鹅首免后21 d,H5亚型HI抗体效价为3.9 log2,抗体合格率均小于70%,H7亚型HI抗体效价为5.2 log2,抗体合格率均大于70%;二免后H5和H7亚型HI抗体效价均大于7 log2,抗体合格率均大于70%。通过临床观察,未发现该疫苗有严重免疫副反应。试验结果表明,该二价灭活疫苗安全有效,但对于生长周期超过70 d天的家禽,应免疫两次。     

H9亚型禽流感病毒感染鸡生理指标的分析

通过测定H9亚型禽流感发病鸡群及健康鸡群的某些生化指标,发现H9亚型禽流感疾病状态下皮质醇激素、甲状腺激素和血清钙的水平均与健康鸡群差异显著,而生长激素和血清磷无明显差异.这些变化是由于机体对疾病的抵抗或代谢紊乱产生的,可以作为疾病诊断的依据.     

H9亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫产生期内T淋巴细胞表型亚类的检测与研究

采用免疫荧光法、使用流式细胞检测仪对经H9亚型禽流感病毒人工感染SPF鸡、H9亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫SPF鸡以及经免疫后使用H9亚型禽流感病毒攻毒后的SPF鸡外周血、脾脏、胸腺中T细胞表型亚类(CD4+、CD8+、TCR1+)的变化规律进行了监测,结果表明,H9亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫后抗原的缓慢释放可在一定程度上激发机体的细胞免疫应答,使免疫活性T淋巴细胞得到活化,免疫后鸡体外周血中CD4+、CD8+和TCR1+T细胞的数量呈现出一明显升高的过程;同时,人工感染免疫鸡后,脾脏和胸腺TCR1+T细胞的数量上升,外周血CD4+、CD8+和TCR1+T细胞的数量少量降低或维持不变,随后短期即恢复正常;而人工感染SPF对照鸡后,外周血CD4+、CD8+和TCR1+T细胞的数量呈现下降趋势.     

肉鹅H5亚型禽流感疫苗免疫效果的研究

选用H 5亚型禽流感油乳剂灭活疫苗(H 5N 1,R e1株)对马岗鹅作首免日龄、免疫次数与免疫剂量的免疫试验。结果表明,雏鹅在7、14或21日龄作1次免疫均产生免疫应答,其中14与21日龄免疫组免疫后第5周抗体水平均达4 log2以上,抗体动态变化均值与峰值均高于7日龄免疫组2~3个滴度。用0.5、1和2 m l/只3个剂量对14日龄雏鹅的免疫试验中,0.5m l组抗体水平上升过程缓慢,免疫后4周抗体水平才达4 log2以上,1与2 m l组在免疫1周后上升速度较快,免疫后2周即达4 log2以上,抗体水平相近,但2 m l免疫组免疫后5~7周抗体水平均低于1 m l免疫组。说明接种剂量为1或2 m lH 5N 1油苗比接种0.5 m l的免疫效果好,尤以1 m l免疫剂量效果最好。雏鹅在7、14日龄或14、21日龄作2次免疫和7、14、21日龄作3次免疫,首免后抗体上升速度快,各检测点抗体水平均值相近,均在首免后3周达到4 log2以上,4~5周达6 log2以上,4~7周的抗体水平均高于14日龄1次免疫组,且提前2周达到4 log2以上,说明2次、3次免疫组的抗体水平高于1次免疫组,而2次与3次免疫组的抗体水平无明显差异。以上结果说明,在肉鹅生产的禽流感免疫中,选择以14日龄首免0.5 m l/只,21日龄2免接种1 m l/只可取得较为理想的免疫效果。     

H7N9亚型重组禽流感病毒rGD76株灭活疫苗的研制

利用H7N9亚型重组禽流感病毒rGD76株进行灭活疫苗的研制,并对疫苗的免疫效果进行评价,为家禽H7N9亚型流感的防控提供科学数据及手段。将AIV-rGD76株用灭菌生理盐水作104倍稀释后,接种11日龄非免疫鸡胚,37℃孵育72h后收获感染鸡胚尿囊液,经甲醛灭活后,加矿物油佐剂乳化制成油乳剂灭活疫苗,对制备疫苗的性状、安全性、免疫效力等进行检验。结果显示,制备的3批重组禽流感病毒灭活疫苗(H7N9亚型,rGD76株)均为油包水型,黏度均在50cP以内,对3批疫苗取样,样品经3000r/min离心15min,管底无水相析出。安全性试验结果显示,将疫苗按1mL/只超剂量接种3周龄SPF鸡,试验鸡在观察期内全部健活,未出现局部或全身不良反应,表明疫苗对SPF鸡具有良好的安全性;免疫效力及攻毒保护试验结果显示,用疫苗按0.3mL/只的剂量免疫接种3周龄SPF鸡1次,免疫接种后21d试验鸡血清中rGD76株的HI抗体平均效价可达8log2以上,使用H7N9亚型高致病性禽流感病毒GD16株滴鼻接种0.2mL/只(含100LD50)对免疫鸡进行攻毒,疫苗对免疫鸡的保护率均为100%。在实验室条件下研制出重组禽流感病毒灭活疫苗(H7N9亚型,rGD76株),疫苗的各项指标均符合标准。     

HSN2与H5N1禽流感油乳灭活疫苗免疫鹅群对H5N1流行株攻毒的保护效力及母源抗体对免疫效力的干扰

应用HSN2和HSN12种类型禽流感油乳灭活疫苗分别免疫鹅群，观察比较了二者对HSN1型高致病性禽流感病毒的攻毒保护效力。结果表明，在同等剂量免疫条件下，从发病率、死亡率和泄殖腔排毒规律3项指标综合评价来看，HSN1灭活苗水禽免疫组对高致病性禽流感HSN1流行株攻毒的保护妓率较HSN2灭活苗理想，且水禽禽流感母源抗体对灭活苗免疫具有一定的干扰作用。     

重组禽流感灭活苗和禽流感灭活苗对鸡免疫效果的观察

用重组禽流感灭活苗接种10日龄、14日龄和21日龄的SPF鸡,接种后HI抗体效价无显著差异。将H5N1和H5N2疫苗分别接种21日龄SPF鸡,结果表明,H5N1和H5N2均能刺激SPF鸡产生较高的HI抗体;分别接种三黄鸡,接种后21 d,H5N1能刺激三黄鸡产生较高的HI抗体;而H5N2不能刺激三黄鸡产生合格的HI抗体,与SPF鸡免疫组相比差异显著。经过二次接种,HI抗体平均为8.9 log2,与SPF鸡组接种后42 d的各组相比差异不显著,而与一免后21 d的各组HI抗体效价相比差异显著。表明应用禽流感灭活苗对三黄鸡免疫接种,必须进行二免方可达到理想免疫效果,而应用重组禽流感灭活苗对三黄鸡进行免疫接种,一次免疫即可获得较高的HI抗体效价。