日本乙型脑炎病毒保护性抗原基因表达的研究

日本乙型脑炎是由日本乙型脑炎病毒引起的严重的人畜共患性传染病,日本乙型脑炎病毒的结构蛋白包括C、Pr M和E 3种。其中C蛋白主要参与病毒RNA和蛋白之间的相互作用,且具有核定位信号序列,在乙脑病毒中,缺失此序列后C蛋白只在感染细胞的细胞质中出现;PrM和E基因是其主要免疫保护性抗原基因,表达的蛋白是乙型脑炎病毒的主要结构蛋白,是病毒颗粒的主要成分,也是维持病毒粒子形态结构的主要物质,主要参与病毒感染的后期阶段,可诱导产生保护性免疫。近年来许多学者对日本乙型脑炎病毒保护性抗原基因原核表达和真核表达及其相关免疫原性进行了大量的研究,取得了一定的研究进展,文章主要针对日本乙型脑炎病毒保护性抗原基因表达的研究进展进行了综述,为乙型脑炎基因工程疫苗的进一步研究提供参考。     

猪乙型脑炎病毒的分离及鉴定

为了从猪乙型脑炎发病养猪场流产胎儿病料中分离出适应在细胞培养的猪源乙型脑炎病毒.本试验采用猪乙型脑炎病毒RT-PCR检测的阳性样品,在BHK-21细胞上培养和驯化,经过JEV特异阳性血清中和试验、小鼠致死量测定等一系列研究.结果表明:成功分离获得的JEV(A6株)能造成BHK-21细胞明显而稳定的细胞病变,经过连续传代...     

猪日本乙型脑炎病毒NS1基因重组腺病毒的构建及表达

应用RT-PCR方法扩增出猪日本乙型脑炎病毒（JEV）的NS1基因,通过Sal Ⅰ＋EcoR Ⅰ双酶切后把该基因插入到经过同样双酶切的穿梭质粒pDC315中.重组穿梭载体经过双酶切和PCR鉴定后进行测序,序列测定正确.将获得的重组穿梭质粒与腺病毒骨架质粒共转染293细胞后获得重组腺病毒.PCR鉴定及间接ELISA检测的结果证明所构建的重组腺病毒成功地表达了JEV的NS1.     

猪的日本乙型脑炎

日本乙型脑炎又叫流行性乙型脑炎,是由日本乙型脑炎病毒引起的一种人畜共患急性传染病,1948～1950年日本学者先后从母猪流产胎儿和母猪的脑组织中分离出日本乙型脑炎病毒。本病多发生于日本、朝鲜、印度和东南亚各国,我国除西藏、青海、新疆为非流行区域外,其它省市均为乙型脑炎的流行区,尤其在潮湿多雨的南方地区,最容易发生乙型脑炎。1病原日本乙型脑炎病毒属黄病毒科、黄病毒属。病毒粒子呈球形,直径大小在35～40纳米,有囊膜,衣壳呈20面体对称,基因组为正向性单股RNA,含有10976个核苷酸,相当于3432个氨基酸残基。病毒对外界的抵抗力不…     

怎样预防猪的日本乙型脑炎?

37 编辑同志：人的乙型脑炎与猪的乙型脑炎有关系吗？怎样预防猪的日本乙型脑炎？     

日本乙型脑炎病毒的分离与鉴定

收集一例疑为乙型脑炎病毒感染的种公猪肿大的睾丸病料,并将其处理制成匀浆过滤后,用乳鼠脑内接毒和细胞接毒相结合的方法盲传并分离病毒,然后设计一对PrM/E基因的特异性引物,采用RT-PCR方法对所分离的病毒进行鉴定,并将其PrM/E基因扩增产物测序,测序结果与乙型脑炎GenBank登陆的SA14-14-2株(AF315119)和SA14株(U14163)进行比较。结果表明,所分离病毒的PrM/E基因序列与JEV强毒株SA14和弱毒株SA14-14-2相应序列同源性分别为98.1%和97.1%,证实分离毒株为乙型脑炎病毒。     

乙型脑炎病毒SXBJ07株E基因的克隆及原核表达

为构建乙型脑炎病毒(JEV)SXBJ07株E基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行高效表达;根据JEV SXBJ07株基因组全序列设计1对特异性引物,RT-PCR扩增E基因全长;将目的基因插入pGEM-T连接载体,筛选出阳性重组质粒;将该质粒克隆至原核表达载体pET32α中,再转化入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达后对其产物进行SDS-PAGE电泳分析和Western-blot检测。结果表明:扩增到了全长为1 500 bp的JEV SXBJ株E蛋白基因;重组质粒pET-32α-E构建成功;融合蛋白可以与乙脑阳性血清抗体特异性结合。说明在大肠杆菌中成功表达了JEV E蛋白。     

猪乙型脑炎病毒实验室检测方法研究进展

猪乙型脑炎严重危害着人类健康,给世界养猪业造成了极大经济损失。本文从血清学和病原学方面入手,综述了猪乙型脑炎病毒最新实验室检测方法研究进展,以期为该病的预防与控制提供参考。     

乙型脑炎病毒NS1基因重组伪狂犬病毒的构建

设计1对引物从含有乙型脑炎病毒NS1基因的质粒pNS1上亚克隆NS1基因,将NS1基因插入到中间转移载体pUSK中，获得重组中间转移质粒pUSK—NS1。将pUSK—NS1与伪狂犬病毒Ea株TK／gG／LacZ^ 突变株基因组共转染真核细胞IBRS-2，通过空斑纯化得到了乙型脑炎病毒NS1基因重组伪狂犬病毒株TK／gG^-／NS^ 1。经检测,重组病毒能表达具有生物活性的NS1蛋白。该重组病毒可作为猪乙型脑炎和伪狂犬病双价基因工程疫苗用毒株。     

猪细小病毒和乙型脑炎病毒感染的防制对策探讨

猪细小病毒（ＰＰＶ）和乙型脑炎病毒（ＪＥＶ）感染是我国猪繁殖障碍性疾病的两大主要病原,它们引起妊娠母猪胚胎死亡、重吸收、死胎、木伊胎、弱产等。近年来我国猪细小病毒和乙型脑炎病毒感染报道大量增加,给养猪生产造成了严重的经济损失,为了阐明ＰＰＶ和ＪＥＶ感...     

乙型脑炎的流行及新型脑炎病毒

流行性乙型脑炎 (简称乙脑 )为最常见的病毒性脑炎 ,由日本脑炎病毒 (JEV)引起。据估计 ,目前乙脑每年发病约 5万例 ,其中 1/ 3病例死亡 ,且有一半的幸存者可发生严重的神经精神后遗症。中国、东南亚、印度的发病率较高。 2 0世纪 90年代中后期 ,人类又发现了新型脑炎病毒 :亨德拉病毒及尼帕病毒。1　流行病学乙型脑炎流行最早描述是在 19世纪 70年代发生于日本 ,此后每 10年就有一次大流行报道。自然情况下 ,马、骡、驴、猪、牛、羊、鸡、犬、猫、野鸟都可以感染本病 ,人亦易感。其中马最易发病 ,猪、人次之 ,其它畜禽多为隐性感染 ,这些…     

猪流行性乙型脑炎的流行及免疫预防

猪流行性乙型脑炎又称日本乙型脑炎,简称乙脑,是由乙脑病毒引起的一种人兽共患急性传染病。主要是蚊类等吸血昆虫传播,怀孕母猪感染后表现流产、死胎或木乃伊胎,公猪发生睾丸炎,育肥猪持续高热,仔猪常呈脑炎症状。猪乙型脑炎病毒（JEV）对猪的致死率不高,但此病造成怀孕母猪发生繁殖障碍是主要的经济损失,对作为畜牧业支柱产业的养猪业持续增产造成巨大的危害。     

猪乙型脑炎病毒E蛋白的原核表达与鉴定

参照已发表的日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)基因组序列,设计合成1对特异性引物,PCR扩增长约972 bp的E基因片段。将目的片段定向克隆到pET30a表达载体中,酶切及测序鉴定均正确后,转化BL21表达菌,经IPTG诱导得到了以包涵体形式表达的重组蛋白。将重组蛋白变性、纯化和复性后,免疫印迹检测证明纯化的重组蛋白具有良好的抗原性和特异性。     

猪乙型脑炎病毒E基因的克隆与序列分析

根据GenBank中猪乙型脑炎病毒SA14-14-2基因序列设计2对引物,从分离的猪源乙型脑炎病毒SD-001株的细胞培养物中扩增出包括E基因全长的两段基因.将扩增的目的片段进行克隆与序列分析.结果表明,所克隆的E基因编码结构域(Domain)区段与SA14-14-2、P3、Beijing-1等毒株的核苷酸与氨基酸序列同源性分别达97.2%与96.8%以上,属于Ⅲ型乙型脑炎病毒,与疫苗株SA14-14-2的Domain区相比,共有8个氨基酸位点变异.     

甲病毒载体的研究进展

甲病毒属于披膜病毒科,是一类有包膜的单股正链RNA病毒。近些年来,国内外有关甲病毒载体的研究非常活跃,其已被用于疫苗研究、基因治疗以及分子生物学等研究领域。基于甲病毒载体的构造原理,将其分为三类,分别为复制完全型载体、复制缺陷型载体和DNA/RNA载体。就这三类载体的改造过程进行了探讨,并对这三类载体的特点及其应用研究进展等方面进行了阐述,以期为开发出更安全、更有效的甲病毒载体提供参考。     

武汉地区猪乙型脑炎病毒分离鉴定及外源性污染检定

从武汉地区两个规模化猪场的母猪流产胎儿脑组织和罹患争性睾丸炎公猪的睾丸实质中首次分离出２株乙型脑炎病毒，定名为ＨＷ１和ＨＷ２。经理化及生物学检验、电镜观察、血清学交叉中心试验及外源性污染检验证实，ＨＷ１和ＨＷ２是两析纯净的ＪＥＶ强毒株，抗原性良好，可用作灭活疫苗的制苗毒种及效力试验的攻毒用毒株。     

日本脑炎病毒NSl基因在大肠杆菌中的高效表达

提取日本脑炎病毒弱毒株SA14-14-2的基因组RNA，用RT-PCR扩增其NS1基因cDNA，将其克隆到原核表达载体pET-30b( )中，转化大肠杆菌BL-21（DE3）,经IPTG诱导，NS1基因获得高效表达。SDS-PAGE分析显示，表达的融合蛋白表观相对分子质量约为46000，重组NS1蛋白占菌体总蛋白的30.8%。Western blotting分析表明，重组蛋白具有良好的免疫原性。     

乙型脑炎病毒NS1蛋白的可溶性表达与抗原性分析

为获得可溶性表达的乙型脑炎病毒(JEV)NS1蛋白,将编码JEV SA14-14-2株NS1蛋白基因克隆至原核表达载体pMAL-c5X中,构建重组融合表达质粒pc5X-NS1;用重组质粒转化宿主菌ER2523后,经IPTG诱导得到可溶性的融合蛋白MBP-NS1;优化诱导表达条件,于28℃、0.3 mmol/L IPTG诱导4 h;最后融合蛋白经直链淀粉树脂柱纯化。结果表明:重组融合蛋白MBP-NS1具有良好的抗原性和特异性。     

夏秋季需重视猪日本乙型脑炎

<正>猪日本乙型脑炎又称流行性乙型脑炎(简称乙脑,JE),是由日本乙型脑炎病毒引起的一种急性的人畜共患传染病。1948～1950年日本学者先后从猪流产胎儿和母猪的脑组织中分离出日本乙型脑炎病