干扰素刺激基因ISG15、OAS1和RSAD2在奶牛早期妊娠诊断中的应用

研究旨在探讨干扰素刺激基因15(Interferon stimulated gene 15,ISG15)、2′-5′寡腺苷酸合成酶1(2′-5′-oligoadenylate Synthetase 1,OAS1)和S-腺苷甲硫氨酸基区域蛋白2(Radical S-adenosyl methionine domain containing 2,RSAD2)对奶牛早期妊娠诊断的价值,为其在奶牛早期妊娠诊断中的应用提供理论依据。36头青年母牛分别于人工授精(artificial insemination,AI)后0d、18d、21d、28d采集外周血,利用荧光定量PCR技术对ISG15、OAS1和RSAD2在18d外周血总白细胞中的相对表达量(相对于0d)进行了分析;分别利用化学发光法和ELISA技术对血清孕酮(18d、21d)和牛妊娠相关糖蛋白(pregnancy-associated glycoprotein,PAG),(28d)进行了检测。通过建立受试者工作特征曲线(ROC曲线)综合评估了三个候选生物标志物单独或联合检测在奶牛早期妊娠诊断中的统计学指标,并与孕酮检测和PAG检测的诊断效能进行了同步比较分析。对ISG15、OAS1和RSAD2三者的分析结果表明,ISG15与RSAD2联合检测的敏感性和特异性分别为94.7%和100%,具有最优的诊断价值;以血清中孕酮含量作为参考指标时,AI后21d妊娠诊断的敏感性和特异性与18d相比较优,分别为88.9%和94.1%,但诊断效能不及ISG15、RSAD2二者联用;PAG ELISA最早于AI后28d可做出诊断,且相对于ISG15-RSAD2联用其诊断的特异性较低,为94.12%。综上所述,利用ISG15和RSAD2基因不仅可望在AI后18d成功实现妊娠诊断而且具有最高的灵敏度和特异性,研究结果为下一步建立奶牛新型早期妊娠诊断技术奠定了基础。     

妊娠失败牛外周血中干扰素刺激基因和细胞因子的表达分析

为了探究牛人工授精后妊娠失败的原因,本研究分析了妊娠失败牛外周血干扰素刺激基因和细胞因子等的表达变化。试验选取11头健康状况良好、体况相近的未孕奶牛,采集人工授精后0d、18d和28d的血液样本,结合28d血清PAG检测和42d直肠触诊,对确定为妊娠失败牛的血液样本进行分析。结果表明,与0d相比,人工授精后18d血液RSAD2、MX1和RTP4 mRNA的表达均呈上调趋势,但无显著差异;18d时IL-2mRNA的表达显著高于0d,IL-10和CCL8 mRNA的表达显著低于0d,IFN-γ、IL-4和CXCL10 mRNA的表达均呈上调趋势,但无显著差异。说明妊娠失败与胚胎发育早期母体免疫失调及妊娠识别能力不足有关。     

产后20天应用氯前列烯醇对分娩期和产后期异常奶牛繁殖指标的影响

本试验选用276头高产中国荷斯坦牛为研究对象,其中120头初产奶牛和156头经产奶牛均表现为分娩期异常或产后期异常,如难产、胎衣不下、双胎难产、早产或子宫感染。试验牛被分为处理组与对照组。处理组在产后20d间隔811连续两次皮下注射氯前列烯醇（0.4mg/次）,对照组注射4．0mL灭菌生理盐水。然后观察其首次发情的时间、适合第一次人工授精的时间、首次授精妊娠率、150d妊娠率、产后的空怀天数、重复配种奶牛的比例和每头牛的授精次数。结果表明,产后应用前列腺素对产后首次发情的时间和产后首次人工授精的时间没有影响,但处理组奶牛首次人工授精的妊娠率明显升高,这在头胎牛更为明显;产后应用氯前列烯醇可明显减少平均授精次数、缩短产后空怀时间、增加产后150d泌乳奶牛的妊娠率、降低产犊后重复配种率。     

不同受体牛对黑毛和牛冷冻胚胎移植的效果

[目的]选择不同品种牛,利用同期发情和自然发情后作为受体牛,进行日本和牛冻胚移植研究。[方法]选择奶牛20头和南德温杂种肉牛41头作为受体牛,利用CIDR+PG做人工同期发情处理,发情后的受体牛移植和牛冻胚。统计分析受体牛的同期发情率和移植后的妊娠率。[结果]试验结果表明奶牛和南德温杂种肉牛的受体牛同期发情率分别为90.00%和85.36%,差异显著(P<0.05);在同一牛场场使用不同品种受体牛进行冻胚移植试验结果表明,15头奶牛和27头南德温杂种肉牛受体牛妊娠率分别为46.67%和48.14%,差异不显著(P>0.05)。[结论]只要符合胚胎移植受体牛要求,奶牛和南德温杂种肉牛均可作为和牛胚胎移植受体牛。     

奶牛妊娠判断的方法

简便而有效的早期妊娠诊断,可以及时分辨妊娠牛和空怀牛。对已妊娠母牛要提高饲养管理水平。对空怀牛要查找出未妊娠的原因,在下个情期补配,这样可以减少空怀,缩短产犊间隔,提高繁殖率。1外部观察法配种后的奶牛一般在经过1个发情周期后,未出现发情的,可能已妊娠,而出现发情的,则未妊娠,     

青年奶牛同期发情和同期排卵-定时输精试验

试验旨在研究同期发情和同期排卵-定时输精技术在青年奶牛中的应用。选择1 046头澳大利亚进口荷斯坦青年奶牛,随机分为两组:一组自然发情人工授精配种(对照组);另一组采用前列腺素F2α(PGF2α)诱导母牛发情或按照同期排卵-定时输精程序(Ovsynch或Ovsynch+CIDR法)处理母牛后人工授精配种(试验组),统计同期发情率、不返情率、第一次人工授精妊娠率和21d妊娠率等繁殖指标。结果表明,试验组青年奶牛人工授精后不返情率和第一次人工授精妊娠率与对照组间无显著差异(P0.05),但21d妊娠率显著高于对照组(53.1%和35.3%,P0.05)。试验组中,1次PG法、间隔7d2次PG法和间隔11d2次PG法的同期发情率分别为76.1%、81.7%和84.6%,差异均不显著(P0.05);同期排卵-定时输精组中,Ovsynch法(GPG)和Ovsynch+CIDR法(GPG+CIDR)的不返情率、第一次人工授精妊娠率和21d妊娠率间无显著差异(P0.05)。不同输精人员可显著影响青年奶牛的第一次人工授精妊娠率(P0.05),而不同公牛常规冷冻精液对青年奶牛第一次人工授精妊娠率无显著影响(P0.05)。同期发情及同期排卵-定时输精技术可使青年奶牛集中发情,提高参配率,从而提高21d妊娠率,有效加快青年奶牛人工授精效率,降低饲养成本。     

青年奶牛同期发情和同期排卵－定时输精试验

试验旨在研究同期发情和同期排卵－定时输精技术在青年奶牛中的应用。选择1046头澳大利亚进口荷斯坦青年奶牛,随机分为两组:一组自然发情人工授精配种(对照组);另一组采用前列腺素F_2α(PGF_2α)诱导母牛发情或按照同期排卵－定时输精程序(Ovsynch或Ovsynch+CIDR法)处理母牛后人工授精配种(试验组),统计同期发情率、不返情率、第一次人工授精妊娠率和21d妊娠率等繁殖指标。结果表明,试验组青年奶牛人工授精后不返情率和第一次人工授精妊娠率与对照组间无显著差异(P>0.05),但21d妊娠率显著高于对照组(53.1%和35.3%,P<0.05)。试验组中,1次PG法、间隔7d2次PG法和间隔11d2次PG法的同期发情率分别为76.1%、81.7%和84.6%,差异均不显著(P>0.05);同期排卵－定时输精组中,Ovsynch法(GPG)和Ovsynch+CIDR法(GPG+CIDR)的不返情率、第一次人工授精妊娠率和21d妊娠率间无显著差异(P>0.05)。不同输精人员可显著影响青年奶牛的第一次人工授精妊娠率(P<0.05),而不同公牛常规冷冻精液对青年奶牛第一次人工授精妊娠率无显著影响(P>0.05)。同期发情及同期排卵－定时输精技术可使青年奶牛集中发情,提高参配率,从而提高21d妊娠率,有效加快青年奶牛人工授精效率,降低饲养成本。     

奶牛不孕症的诊疗

2007年以来,笔者对县城一奶牛场不孕奶牛进行了调查,该奶牛场共存栏800多头奶牛,两年共发现不孕奶牛18头,多为产后60 d以上或育成16个月龄以上仍未发情和经妊娠检查空怀的母牛,膘情较好,无其它疾病,均作为长期不发情母牛及早进行了诊治.对18头不孕牛治愈了16头,治愈率达88.9%.     

PAGmRNA在奶牛血液中表达的研究

本试验采用半定量RT-PCR的方法,检测和分析了牛PAG基因mRNA在妊娠牛及空怀牛血液中的表达规律。结果发现,PAG基因mRNA在妊娠21d的母牛及空怀牛血液中都有表达,而妊娠牛表达量显著高于空怀牛（P〈005）。这说明配种后21d奶牛血液中PAG基因的表达量可以作为奶牛早期妊娠诊断的依据。     

妊娠失败水牛血常规分析

[目的]通过分析空怀水牛血常规数据,从血液生理变化层面探讨水牛人工授精后早期妊娠失败的原因。[方法]采集14头摩拉水牛人工授精后0d、18d、20d、23d和28d血液样本,利用全自动血液细胞分析仪进行血常规检测。于人工授精后的42d进行直肠检查和B超诊断,对确诊为空怀的摩拉水牛血液参数进行统计分析。[结果]人工授精后0d和18d白细胞(WBC)参数均在正常值范围或接近正常值。20d、23d和28d白细胞数显著高于0d(P0.05),并且超出正常值范围;其中,18d和20d嗜中性粒细胞绝对值(NEU)及其比例显著低于0d(P0.05),18d~28d淋巴细胞绝对值(LYM)及其比例均高于0d。与0d相比,18d及之后,红细胞数(RBC)和红细胞压积(HCT)均极显著下降(P0.01),但红细胞平均体积(MCV)和红细胞分布宽度变异数(RDW)均极显著上升(P0.01)。[结论]妊娠失败摩拉水牛中淋巴细胞及其比例上升是导致外周血白细胞数显著上升的主要原因;妊娠失败一方面与胚胎发育早期母体较弱的免疫耐受/妊娠识别能力有关,另一方面,人工授精后牛群的贫血体况也提示有必要进一步加强对与配母牛的繁殖管理。     

感染犬新孢子虫泌乳奶牛流产后的早期恢复

本文旨在评价感染犬新孢子虫奶牛流产后的繁殖性能。在92头流产奶牛中,有68头牛为犬新孢子虫血清阳性,有24头为阴性。只给每天产奶量在25kg以上的流产后发情牛输精,在流产的30d中,当发情第一次输精时检查子宫复旧正常。在92头流产奶牛中,有73头(79.3%)妊娠,这其中有57头(83.8%)是犬新孢子虫血清阳性,有16头(66.7%)为阴性。经t-检验和秩和检验分析,妊娠天数及泌乳次数在犬新孢子虫血清阳性和阴性牛间没有差异,而犬新孢子虫血清阳性牛从流产到第一次人工授精的间隔时间、妊娠所需的授精次数,以及从流产到下一次妊娠的间隔时间都显著低于血清阴性牛(P0.0001)。经Log线性回归分析发现,牛群、泌乳次数、流产时的妊娠天数,以及从流产到人工授精所需时间对牛群没有显著影响。据优势比分析,犬新孢子虫血清阳性牛在流产后第一次人工授精妊娠的几率是血清阴性牛的6.22倍。在流产30d内对53头犬新孢子虫血清阳性牛(78%)授精,有26头(49%)妊娠,而仅1个血清阴性牛(4.2%)在30d内待授精,并且第一次授精后仍未孕。这些结果表明,感染犬新孢子虫的奶牛流产后一个月内可以授精,并有很高的生育率。建议早期检查犬新孢子虫血清阳性流产奶牛子宫复旧状况。     

围产科尔沁牛外周淋巴细胞HSP70的表达

选择经同期发情处理的妊娠科尔沁牛5头（2～3胎）,于分娩-14、-6、-2、0、2、6、14d颈静脉采血,分离淋巴细胞,采用RT～PCR、Westernblotting法分别检测淋巴细胞的HSP70mRNA与蛋白表达。结果显示,各受试牛的HSP70mRNA与蛋白表达变化趋势基本-致,即从-14d开始逐渐下调,0d最低,继而再逐渐上调。结果表明,HSP70作为淋巴细胞内重要伴侣分子,随着分娩的启动和发生其表达抑制显著增强,但在分娩后被迅速解除,其表达逐渐上调。     

围产科尔沁牛外周淋巴细胞HSP70的表达

选择经同期发情处理的妊娠科尔沁牛5头(2³胎),于分娩-14、-6、-2、0、2、6、14d颈静脉采血,分离淋巴细胞,采用RT-PCR、Western blotting法分别检测淋巴细胞的HSP70mRNA与蛋白表达。结果显示,各受试牛的HSP70mRNA与蛋白表达变化趋势基本一致,即从-14d开始逐渐下调,0d最低,继而再逐渐上调。结果表明,HSP70作为淋巴细胞内重要伴侣分子,随着分娩的启动和发生其表达抑制显著增强,但在分娩后被迅速解除,其表达逐渐上调。     

新疆牦牛同期发情人工授精试验效果观测

试验选取20头3～6岁天山山区放牧状态牦牛,进入人工圈养环境驯化后,先期采用阴道栓药物同期发情技术,使用新疆褐牛冻精人工授精技术,发情率为55%,受胎率为5%;后期对剩余19头空怀牦牛改用药物同期发情人工授精技术,发情率为53%,受胎率为47%,前后对比,发情率差异不显著,受胎率表现差异极显著。     

亚硒酸钠维生素E对奶牛生产性能的影响

采用对比试验设计,中国荷斯坦牛试验组与对照组各为30头,试验组30头奶牛围产期(产前、产后15d)开始补喂亚硒酸钠维生素E粉。每天补喂2次,每次15g,产前补喂15d,产后补喂15d。结果表明,试验组奶牛胎衣不下率明显低于对照组;试验组奶牛产后第1次发情平均时间比对照组缩短6d,试验组奶牛产后空怀平均时间比对照组缩短7d;试验组确定妊娠29头比对照组确定妊娠27头多2头,并且情期受胎率和总受胎率试验组比对照组高14%和7%,差异显著(P<0.05);平均产奶量试验组比对照组高12.50%,差异显著(P<0.05)。     

同期发情在奶牛场繁殖方面的应用

在奶牛场繁殖方面，由于营养水平不同导致奶牛群的人工授精率和产犊率往往比较低。为解决上述问题，我们于１９９６年６～７月间在宝泉岭圣原奶牛场对３５头，其中空怀牛２４头、哺乳牛１１头（产犊后２个月）的奶牛应用前列腺素（上海计划生育研究所）进行同期发情试验，取得了满意效果。对供试牛进行直肠检查摸清卵巢状况：结果卵巢上有黄体的母牛２９头（哺乳牛９头，空怀牛２０头），卵巢静止的母牛６头（哺乳牛２头，空怀牛４头）。对卵巢上后４８～９２小时，以阴门水肿流粘液，接受爬跨，卵巢有正常卵泡发育判定为发情，对发情牛按冻…     

牛人工授精后受胎与血中孕酮浓度变化的关系(摘要)

给牛人工授精后第7日、20～22日共3次以酶免疫测定法测定血清中孕酮浓度变化,以探讨牛的发情状态的判定及早期妊娠诊断。供试牛共52头,其中47头(90.4％)为排卵性发情,1头(1.9％)为无排卵性发情,其于4头(7.7％)为非发情的牛。自人工授精60日后进行直肠检查,其中36头(69.2％)确认为妊娠,并且这些牛均为排卵性发情。妊娠牛(n=36),与授精后第7日的非妊娠牛(n=16)血中孕酮浓度差异显著。在授精后第20～22日,妊娠牛血中孕酮     

补喂碘化钾治疗奶牛乏情

我县奶牛近年常常出现空怀期延长,奶牛不发情等现象,考虑到与缺碘有关,经采用短时间补喂碘化钾与注射雌二醇对照试验,收到可喜效果。选择产后长期不发情的成年母牛82头,分为补喂碘化钾的Ⅰ组(43头)和注射雌二醇的Ⅱ组(39头)。均为无子宫内膜炎等疾病的牛。Ⅰ组每头每天1～1.3g碘化钾混于精料中喂1周;Ⅱ组每头一次肌肉注射10mL(20mg)雌二醇。结果Ⅰ组补喂碘化钾日期到发情配种日期平均间隔天数24.8±19.4d。喂药后第1次发情37头,发情率86.1%,配种37头,妊娠26头,第1次情期受胎率70.3%,总受胎率(妊娠牛头数占用药牛头数)为60.5%。Ⅱ组注射雌二…     

不同胚胎移植方法对天祝白牦牛受胎率的影响

为提高胚胎移植技术在牦牛上的运用效果,选用51头甘肃省天祝县健康黑牦牛作为受体,以纯种天祝白牦牛作为供体生产胚胎,分别对同期发情处理和自然发情的受体牛进行鲜胚和冻胚移植试验。结果,同期发情处理的受体牛鲜胚移植的受胎率显著高于冻胚移植的受胎率(P0.05),分别为52%和38.5%;在自然发情受体牛的胚胎移植中也得到了相似结果,鲜胚和冻胚的移植受胎率分别为60%和50%,同期发情处理牛的平均妊娠率则低于自然发情受体牛的平均妊娠率(P0.05),二者分别为47.5%和54.5%。结论,牦牛鲜胚移植的受胎率明显高于冻胚移植的受胎率,而且自然发情受体牛的受胎率高于同期发情处理牛。     

荷斯坦牛生产体内性控胚胎的试验研究

本研究采用荷斯坦牛X-性控冻精和超数排卵技术生产奶牛体内性控胚胎。结果显示,使用阴道栓(Cue-Mate)对31头供体奶牛进行同期发情处理,发情率为100%,且发情时间较集中。31头供体奶牛共回收胚胎321枚,头均回收胚胎10.35枚,其中可用胚胎225枚,头均可用胚胎7.26枚。选择36头黄牛受体进行单胚移植,其中21头移植鲜胚,妊娠10头,妊娠率47.62%;15头移植冻胚,妊娠6头,妊娠率40.00%。