4种浒苔多糖的体外抗禽流感病毒活性研究

为了检测不同提取方法获得的浒苔提取物浒苔多糖1、浒苔多糖2、浒苔多糖3和浒苔多糖硒的体外抗禽流感病毒活性,试验将4种浒苔多糖用细胞维持液倍比稀释,以金刚烷胺、病毒灵、黄芪多糖和紫锥菊提取物为对照,以犬肾细胞(MDCK)为细胞模型,观察细胞病变效应(CPE),并采用MTT法研究4种浒苔多糖对H9N2禽流感病毒的直接杀灭、抑制病毒复制和阻断病毒吸附的治疗指数。结果表明:浒苔多糖1和浒苔多糖2直接杀灭H9N2禽流感病毒作用治疗指数分别为7.33和7.29,该指数低于金刚烷胺(33.56)、病毒灵(36.00)和黄芪多糖(15.78),高于紫锥菊提取物(6.92);浒苔多糖1和浒苔多糖2抑制H9N2禽流感病毒复制作用的治疗指数分别为5.78和6.13,该指数低于金刚烷胺(22.68)、病毒灵(26.71)和黄芪多糖(10.18),高于紫锥菊提取物(5.41);浒苔多糖1和浒苔多糖2阻断H9N2禽流感病毒吸附作用的治疗指数分别为13.83和12.75,该指数低于金刚烷胺(46.61)、病毒灵(55.20)和黄芪多糖(16.25),高于紫锥菊提取物(11.22);浒苔多糖3和浒苔多糖硒不具有直接杀灭病毒、抑制病毒复制和阻断病毒吸附的作用。说明浒苔多糖1和浒苔多糖2具有体外抗禽流感病毒活性,表现为对H9N2禽流感病毒具有直接杀灭、抑制病毒复制和阻断吸附的作用,浒苔多糖3和浒苔多糖硒无体外抗禽流感病毒活性。     

浒苔多糖体外抗犬冠状病毒临床分离株的作用研究

利用A72细胞(犬纤维肉瘤细胞系)从山东某宠物医院临床上表现为急性胃肠炎症状的幼犬腹泻粪便中分离到1株病毒,通过间接免疫荧光(IFA)和RT-PCR进行鉴定,确定为犬冠状病毒,命名为CCoV-SW1。为探讨浒苔多糖(EPS)体外抗CCoV-SW1毒株的作用效果,以A72细胞为细胞模型,通过直接杀灭、抑制复制及阻断吸附3个方面进行研究。结果表明,EPS对A72细胞最大安全浓度为62.5mg/L;EPS对CCoV感染A72细胞抑制率与EPS质量浓度有一定量效关系;EPS对CCoV具有直接杀灭和阻断吸附的作用,并且与EPS浓度具有量效关系;EPS抑制CCoV复制效果不明显,但仍有一定效果,当EPS浓度为62.5mg/L时,细胞存活率为37.2%。EPS在体外对CCoV具有直接杀灭和阻断吸附的作用,为CCoV的预防和治疗提供依据。     

板蓝根、黄芪对猪繁殖与呼吸综合征病毒的体外抑制作用

为了解中草药黄芪、板蓝根对病毒增殖的抑制作用,对黄芪、板蓝根及二者联合使用在Marc-145的单层细胞上对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)增殖的抑制作用进行了研究。结果表明,板蓝根能够显著抑制PRRSV体外增殖,对PRRSV的最小直接杀灭浓度为0.195 mg/mL,最小阻断浓度为0.097 mg/mL;黄芪对PRRSV增殖的抑制作用较弱。板蓝根、黄芪联合使用时对PRRSV的抑制作用显著增强,板蓝根对PRRSV的最小直接杀灭浓度降为0.097 mg/mL,最小阻断浓度降为0.049 mg/mL。     

黄芪、板蓝根对猪细小病毒体外抑制作用研究

为研究中草药黄芪、板蓝根作为抗病毒药物的效果及初步机理，利用细胞病变（CPE）抑制实验测定黄芪、板蓝根单独使用及1：1联合使用在PK-15单层细胞上对猪细小病毒（PPV）的抑制作用。结果表明：板蓝根单独使用时体外对PPV有明显的抑制作用，其对PPV的最小直接杀灭浓度为0．62mg／mL，最小阻断浓度为0．31mg／mL；而黄芪单独使用时对PPV无明显的抑制作用。板蓝根、黄芪1：1联合使用时对PPV的抑制作用显著增强，其对PPV的最小直接杀灭浓度提高为0．31mg／mL，最小阻断浓度提高为0．075mg／mL。     

苦参碱对PRRSV的体外抑制作用及其机制

本试验以Marc-145细胞为模型,采用细胞病变(CPE)抑制试验和MTT法测定细胞活力,观察苦参碱(matrine)体外抗猪繁殖呼吸与综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)活性,并从抑制病毒复制、阻断吸附和直接杀灭3个方面探讨苦参碱体外抑制PRRSV的作用机制.结果显示,苦参碱CC50＞1 500 mg/L,最大安全浓度为750 mg/L,EC50为(443.5±33.4)mg/L,SI≥3.38,在安全浓度范围内对PRRSV感染Marc-145细胞的抑制率达到93.6％;在直接杀灭和复制抑制试验中最高抑制率分别达到105.10％和91.53％;在病毒吸附抑制试验中抑制率＜20％,表明苦参碱不能阻断PRRSV对Marc-145细胞的吸附.结果表明,苦参碱在体外可有效抑制PRRSV对Marc-145细胞的感染,其抗病毒机制可能是干扰病毒的复制或/和直接杀灭病毒,提示苦参碱可作为研发预防及治疗猪蓝耳病的药物或先导化合物.     

硫酸化茯苓多糖对PRRSV体外感染Marc-145细胞作用的影响

用稀碱法从茯苓中提取茯苓多糖,应用氯磺酸-吡啶法得到硫酸化茯苓多糖。通过观察细胞病变(CPE)效应来评价不同浓度硫酸化茯苓多糖和不同作用方式对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染Marc-145细胞的影响。结果表明,硫酸酯化茯苓多糖预作用于单层细胞12 h后感染104TCID50PRRSV,能明显阻断病毒感染细胞,其阻断病毒感染作用的最小浓度为100 mg/L;而硫酸化茯苓多糖预作用4 h后感染104TCID50的PRRSV阻断感染作用不明显,显示硫酸化茯苓多糖体外对PRRSV感染细胞的阻断感染作用呈一定的浓度和时间依赖性。感染剂量为104TCID50PRRSV后加入不同浓度硫酸化茯苓多糖,也能有效抑制病毒在细胞上的感染与增殖,其作用最小浓度为50 mg/L;而不同浓度多糖与104TCID50病毒在体外共同孵育12 h后加入到单层细胞,多糖直接杀灭PRRSV的最小浓度为100 mg/L。     

应用生物反应器培养ST细胞制备猪传染性胃肠炎病毒

通过生物反应器制备猪传染性胃肠炎病毒(TGEV),研究了感染复数(MOI)、微载体浓度、病毒感染时间(TOI)和病毒维持液对病毒效价的影响,结果表明,分别以1:500稀释种毒(8.0 LgTCID50/mL)后接种、接种72 h的ST细胞、5 mg/mL微载体浓度和维持液低糖DMEM+0.2%水解乳蛋白(LH)的参数培养方式效果最为理想。     

黄芪、金银花提取物体外抗禽流感病毒的试验研究

选用黄芪、金银花作为抗病毒药物,利用细胞病变(CPE)抑制实验测出黄芪、金银花提取物单独使用及1:1联合使用在鸡胚成纤维细胞(CEF)上培养对禽流感病毒AIV(H9N2亚型)的最小直接杀灭浓度和最小阻断浓度.结果表明:黄芪、金银花提取物对CEF的无毒浓度分别为62.5mg/ml、31.25mg/ml.金银花提取物体外对AIV有抑制作用,其对AIV的直接杀灭浓度为7.81mg/ml;最小阻断浓度为3.90mg/ml;黄芪提取物单独使用对AIV的抑制作用不显著.金银花与黄芪提取物联合使用,其抑制作用增强,对AIV的直接杀灭浓度为0.98mg/ml,最小阻断浓度提高1.95mg/ml.     

大黄体外抗猪流行性腹泻病毒的研究

为研究大黄对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染所引起的细胞病变的抑制作用及其机理,本试验采用形态学观察法测定大黄溶液在Vero细胞上的最大安全浓度,建立体外病毒感染Vero细胞模型并利用该模型进行了大黄对病毒抑制作用的研究。结果显示,本试验成功建立了体外病毒感染模型和大黄的抗病毒试验方法;大黄在Vero细胞上的最大安全浓度为3.28 mg/mL;形态学观察法和MTT法均显示大黄不仅能阻断病毒吸附Vero细胞,抑制病毒的合成复制,还可直接灭活病毒。本研究结果表明,大黄具有抗PEDV的作用,为临床上预防和治疗猪流行性腹泻(PED)提供理论基础。     

3种中药及其提取物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒作用的研究

为研究板蓝根、黄芪和青蒿及其提取物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的作用,本试验在研究板蓝根、黄芪和青蒿及其提取物对Marc-145细胞最大安全浓度的基础上,研究3种中药提取物体外抗PRRSV的作用。结果显示,板蓝根多糖、黄芪多糖和青蒿素3种中药提取物对Marc-145细胞安全浓度分别为为0.03、0.03和0.06 mg/mL,板蓝根、黄芪和青蒿3种中药单方的安全浓度分别为6.25、6.25和3.13 mg/mL。在体外抗PRRSV作用的试验中,3种中药单方中黄芪的阻断作用最强,能达到100%的保护率,中药提取物中板蓝根多糖对PRRSV的阻断作用最强,在浓度为0.031 mg/mL时对细胞保护率能达到48.03%,青蒿素最差,在0.16 mg/mL时就已不具有阻断作用。板蓝根多糖对病毒不具有直接杀灭作用,黄芪多糖和青蒿素在浓度为0.32 mg/mL时,保护率都是20%左右;黄芪的直接杀灭作用保护率为100%,且非常稳定,青蒿在浓度较高时还有促进细胞生长的作用,但稳定性差,随浓度降低其保护率迅速下降。在对病毒的抑制作用试验中,3种中药提取物的作用相当,浓度为0.01 mg/mL时,板蓝根多糖、黄芪多糖和青蒿素多糖对细胞的保护率分别为24.57%、24.30%和26.20%;而3种中药单方的细胞保护率都能达到100%甚至以上。综合3种作用方式可知,3种中药提取物中,黄芪多糖的抗PRRSV作用最好,青蒿素次之,板蓝根多糖最差;3种中药单方中黄芪的效果最好,青蒿最差。因此,可知黄芪及其提取物具有非常强的抗PRRSV作用,可对其进行进一步研究,以供临床上使用。