牛乳中产色葡萄球菌的分离与鉴定

[目的]确定送检的患乳房炎病牛乳汁中是否有产色葡萄球菌感染。[方法]从患乳房炎病牛乳汁中分离致病菌,并对其进行鉴定,最后通过药敏试验筛选出对其敏感的药物。[结果]分离菌16S rRNA基因片段为长度1 422 bp的核苷酸序列。经BLAST分析可知,其与产色葡萄球菌16S rRNA核苷酸序列相似性高达99%,确定其为产色葡萄球菌。药敏试验结果表明,产色葡萄球菌对环丙沙星和四环素高度敏感,而对多黏菌素-B、青霉素、克林霉素和诺氟沙星等不敏感。[结论]研究结果可为确定乳房炎的病原及治疗方法提供新思路。     

猪体内金黄色葡萄球菌及凝固酶阴性葡萄球菌耐药性调查及耐药基因分布研究

2010年从广东省不同地区230头猪的淋巴结样品中分离鉴定出90株葡萄球菌,其中金黄色葡萄球菌19株,凝固酶阴性葡萄球菌71株.采用琼脂稀释法检测其对14种抗菌药物的敏感性,并用PCR方法检测13种耐药基因的携带情况,运用统计学方法分析猪体内金黄色葡萄球菌与凝固酶阴性葡萄球菌的耐药性和耐药基因分布情况的差异.结果显示葡萄球菌对大环内酯类、林可胺类和四环素类抗生素的耐药率较高(>80%).金黄色葡萄球菌与凝固酶阴性葡萄球菌对多数药物耐药情况及耐药基因的携带情况差异不显著,但对苯唑西林的耐药率及linA、ermB基因的携带率差异显著(P<0.05),凝固酶阴性葡萄球菌明显高于金黄色葡萄球菌.     

中国部分地区猪源和牛源金黄色葡萄球菌耐药性及凝固酶分型研究

【目的】了解中国动物源金黄色葡萄球菌的耐药现状,以及凝固酶血清型和基因型分布情况,为控制动物源金黄色葡萄球菌的传播和流行提供理论依据。【方法】用微量肉汤稀释法测定细菌耐药性;用凝固酶分型血清确定血清型别;扩增凝固酶基因（coa）并进行序列测定,用mega软件进行序列分析。【结果】共鉴定出124株金黄色葡萄球菌。耐药性检测结果表明,在13种测试抗菌药中,金黄色葡萄球菌对氨苄西林和青霉素的耐药率最高,接近100%,其次是红霉素75%,其它10种药物的耐药率在50%以下,头孢西丁耐药率27%,未发现万古霉素耐药菌株;凝固酶血清分型率达91%,共分出6个型,VII型,VI型和复合型占优势,未分离到Ⅲ型和Ⅴ型;扩增凝固酶基因,共分为6个基因型;构建了凝固酶基因的系统进化树。【结论】中国动物源金黄色葡萄球菌的耐药状况比较严重,猪源菌株的耐药率要高于牛源菌株。凝固酶血清型别多样,分布相对较集中,具有独特的流行特征;凝固酶表型与其基因的进化特征并没有出现直接对应关系,但为进一步开展兽医临床金黄色葡萄球菌分子流行病学调查研究奠定了理论基础。     

某奶牛场牛乳源金黄色葡萄球菌的分离鉴定与耐药性调查

从山西某奶牛场随机采集25份奶样,进行细菌分离培养、染色镜检、H2O2酶试验鉴定,并对其进行了9种药物的敏感性试验。结果表明,从25份奶样中分离出18株金黄色葡萄球菌;这18株金黄色葡萄球菌对多种药物呈现出耐药性,其中,对阿莫西林耐药率最高,达77.8%,对卡那霉素、庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星、氧氟沙星、磷霉素、头孢曲松的耐药率介于11.1%~44.4%,对左氧氟沙星的耐药率最低,为5.6%。说明金黄色葡萄球菌为该奶牛场奶牛乳房炎的主要致病菌,该场奶牛对9种抗生素产生了普遍的耐药性,建议该奶牛场以体外药物敏感试验为参考,进一步扩大药物的筛选范围,选择更多敏感药物进行治疗。     

乳源耐甲氧西林葡萄球菌的耐药性、 产毒性与生物膜形成能力检测

从安徽省合肥地区奶牛隐性乳房炎生乳中分离鉴定24株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。采用E-test方法测定12种抗菌药物对乳源MRSA合肥分离株的最小抑菌浓度,微量板半定量法测定乳源MRSA合肥分离株形成生物膜的能力,PCR方法检测这些分离株携带耐药基因、毒力基因和生物膜形成相关基因的情况。结果显示受试MRSA分离株对苯唑西林、克林霉素、甲氧苄胺嘧啶、红霉素、利福平、头孢噻肟、庆大霉素、环丙沙星、四霉素、丁胺卡那、替考拉宁和万古霉素的耐药率依次为100%、75%、54.2%、50%、45.8%、45.8%、33.3%、29.2%、25%、20.8%、4.2%和0%,且83.3%分离株呈现多重耐药;受试MRSA分离株携带耐药基因mec A、blatem-1、aac(6’)/aph(2")、Erm B、tet M和qac A基因的检出率分别为100%、54.2%、70.8%、33.3%、41.7%和50%,而毒力基因Clf A、Fn BPA、SEA、PVL、TSST、Hla、Ca L和Nuc的携带率分别为33.3%、83.3%、79.2%、37.5%、58.3%、87.5%、100%和100%;受试MRSA分离株中生物膜形成能力强、中等、弱以及不能形成生物膜的细菌分别占37.5%(9/24)、12.5%(3/24)、25%(6/24)和25%(6/24),生物膜形成相关基因ica A、ica D、agr、Sig B和Sar A基因的检出率分别为50%、50%、50%、91.7%和83.3%。结果表明,乳源MRSA合肥分离株均为产毒性和多重耐药性MRSA,且75%分离株具有生物膜形成能力。     

不同环境因素对表皮葡萄球菌生物膜形成的影响

采用微量板半定量法研究影响表皮葡萄球菌生物膜形成的因素,同时模拟奶牛体内环境因素,如乳糖、酪蛋白和Ca2+等,探索不同理化因素对表皮葡萄球菌生物膜形成的影响,结果表明,检测的3种培养基中,胰蛋白胨大豆肉汤(Typtic Soy Broth,TSB)培养基最有利于表皮葡萄球菌的生长及其生物膜的形成,且最适质量分数为3%左右;在pH中性条件下,NaCl对表皮葡萄球菌生物膜的形成有明显抑制作用;当pH大于7时,表皮葡萄球菌生物膜形成能力明显减弱。在模拟奶牛体内环境因素中,一定质量分数的Ca2+(0.2%及以上)与高质量分数的乳糖(8%及以上)对生物膜形成有明显抑制作用,而外源添加酪蛋白对表皮葡萄球菌生物膜形成没有明显影响。     

市售鲜牛奶中金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

[目的]通过对石河子地区市售鲜牛奶中金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性的分析,评估该区域鲜牛奶的安全性。[方法]采用稀释涂平板法分离金黄色葡萄球菌,结合接触酶、兔血浆凝固酶试验,nuc基因扩增,16S r RNA基因测序进行鉴定。同时,选用K-B纸片法测定分离菌株的耐药性。[结果]从10份样品中分离得到金黄色葡萄球菌16株。其中,47.8%的菌株表现为多重耐药,12株金黄色葡萄球菌对头孢他啶具有耐药性。[结论]样品中金黄色葡萄球菌多重耐药性严重,应该采取相应的措施加以监管。     

拉萨市牦牛肉源金黄色葡萄球菌的鉴定及其耐药性分析

[目的]明确西藏拉萨市牦牛肉源金黄色葡萄球菌常见肠毒素(SEs)基因分布特征及其多重耐药性,为牦牛肉源产SEs金黄色葡萄球菌的快速鉴定及其防控提供科学依据.[方法]通过Baird-Parker显色培养筛选及Nuc基因扩增鉴定从拉萨市牦牛肉样品中分离获得金黄色葡萄球菌,利用PCR鉴定分析金黄色葡萄球菌中9种常见SEs基因的分布特征,并采用K-B纸片扩散法对产SEs金黄色葡萄球菌进行多重耐药性分析.[结果]从100份牦牛肉样品中分离获得29株金黄色葡萄球菌,其SEs基因鉴定结果表明,9种SEs基因检测出6种(SEB、SEC、SEE、SEG、SHE和SEI),有3种(SEA、SED和SEJ)未检出.其中,SEG基因检出率79.31%,SEC和SEI基因检出率均为68.97%,SEB基因检出率55.17%,SHE基因检出率51.72%,SEE基因检出率3.45%.29株金黄色葡萄球菌对青霉素(P)、氨苄西林(AMP)、克拉霉素(CLR)、红霉素(E)和磺胺甲恶唑(SMZ)的耐药率较高,分别为79.31%、65.52%、58.62%、51.73%和31.04%;对阿米卡星(AK)、替卡西林(TIM)、苯唑西林(OX)、环丙沙星(CIP)和四环素(TE)的耐药率较低,分别为10.35%、6.90%、3.45%、3.45%和3.45%;对头孢西丁(FOX)、头孢他啶(CAZ)、头孢噻肟(CTX)、庆大霉素(CN)和氯霉素(C)尚未产生耐药性.29株金黄色葡萄球菌共表现出13种耐药谱,多重耐药率高达93.1%(27/29),其优势耐药谱为AMP/P、SMZ/CLR/E和AMP/P/CLR/E.[结论]西藏拉萨市牦牛肉源金黄色葡萄球菌含有SEG、SEC、SEI、SEB、SEH和SEE等多种SEs基因,且对青霉素类、大环内酯类和磺胺类等多种抗菌药物已产生较强的耐药性.     

一株猪源沃氏葡萄球菌的分离鉴定及耐药特性分析

 采用含16μg/mL亚胺培南选择剂的MH琼脂培养基,从外观健康猪新鲜粪便中分离培养获得1株耐亚胺培南细菌。该菌镜检为粗大的球杆状革兰氏阳性菌,生化发酵赖氨酸、七叶苷和木糖醇均为阳性,对10种常规抗生素均呈高度耐药,具有“超级细菌”的特点。经聚合酶链式反应（PCR）扩增、克隆及测序分析该菌株16S rRNA,将其初步鉴定为沃氏葡萄球菌(Staphylococcus warneri)。鉴于猪与人类健康关系密切,该结果提示应加强对猪源细菌耐药性监测及基础研究。     

奶牛乳房炎源性金黄色葡萄球菌分离株N_2的耐药性分析及其基因特征

以乳房炎源性金黄色葡萄球菌分离株N2为研究对象,采用纸片扩散法分析了耐药性,应用刚果红法检测了生物被膜形成能力,利用PCR法扩增了8种生物被膜形成基因和9种肠毒素基因。结果表明,金黄色葡萄球菌分离株N2具有广泛的耐药性,仅对苯唑西林高度敏感,具有较强的生物被膜形成能力,携带除bap外所有的被测生物被膜相关基因和sea、sec、seg、sei 4种肠毒素基因。结果表示金黄色葡萄球菌分离株N2可能存在多种侵袭方式,在临床上难以防治,为进一步以该菌株为研究材料进行相关研究奠定了基础。     

奶牛生乳中洛菲不动杆菌的分离鉴定与耐药性分析

对29份外观正常的奶牛生乳乳样进行乳品质分析和细菌学检测,利用16SrDNA序列分析鉴定乳样中分离的菌株,并进行14种药物的敏感性试验。结果表明,10份乳样有细菌检出,其中4份乳样中分离得到洛菲不动杆菌;药物敏感性结果表明,洛菲不动杆菌对复方新诺明具有较强的耐药性;乳品质分析结果表明,该4份乳样体细胞数(SCC)偏高,乳成分和部分理化性质与其他正常乳无明显区别。     

牛肉中金黄色葡萄球菌的复核鉴定研究

[目的]采用2种方法复核检出牛肉中金黄色葡萄球菌阳性结果,确保检测结果的准确性。[方法]按照GB 4789.10—2010《食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》方法前增菌、选择性分离培养、革兰氏染色和血浆凝固酶试验鉴定金黄色葡萄球菌,应用SN/T1870—2007《食品中致病菌检测方法实时PCR法》对疑似阳性结果进行了进一步验证和复核。[结果]经过2种方法验证可疑菌落,该批牛肉中检出金黄色葡萄球菌。[结论]分离并鉴定牛肉中金黄色葡萄球菌可疑样品时,可采用不同方法进行验证和复核,该方法可提高检测结果的准确性,可用于畜禽肉中致病菌的检测。     

TMPD降解菌Staphylococcus pasteuri的鉴定

通过形态学观察、生理生化特征测定和16S rDNA序列同源性分析,对1株TMPD降解菌(LF-2)进行了鉴定.结果表明:LF-2的形态及主要生理生化特征与葡萄球菌属一致,而且与巴氏葡萄球菌(AJ717376)的16S rDNA序列具有99.80%的同源性;在系统发育树上构成一个分支.由此确定TMPD降解菌LF-2属于巴氏葡萄球菌(Staphylococcus pasteuri).     

奶牛乳房炎源性金黄色葡萄球菌分离株N_2的耐药性分析及其基因特征

以乳房炎源性金黄色葡萄球菌分离株N2为研究对象,采用纸片扩散法分析了耐药性,应用刚果红法检测了生物被膜形成能力,利用PCR法扩增了8种生物被膜形成基因和9种肠毒素基因。结果表明,金黄色葡萄球菌分离株N2具有广泛的耐药性,仅对苯唑西林高度敏感,具有较强的生物被膜形成能力,携带除bap外所有的被测生物被膜相关基因和sea、sec、seg、sei 4种肠毒素基因。结果表示金黄色葡萄球菌分离株N2可能存在多种侵袭方式,在临床上难以防治,为进一步以该菌株为研究材料进行相关研究奠定了基础。     

浙江省主要奶牛养殖区乳房炎致病菌金黄色葡萄球菌的耐药性

为了解浙江省奶牛乳房炎致病菌的耐药情况,评估其耐药表型与基因型的相关性,本研究从浙江省主要奶牛养殖区奶牛乳房炎病例分离到70株金黄色葡萄球菌,测定它们对13种常用抗菌药物的药敏性,并采用聚合酶链式反应(PCR)检测这些细菌耐青霉素G、庆大霉素、红霉素和四环素的耐药基因mecA、aac(6')/aph(2″)、erm和tetM的携带情况.结果表明,奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌对常用抗生素的耐药情况严重,耐药表型和耐药基因型的符合率较高.70株金黄色葡萄球菌主要对青霉素G、庆大霉素、红霉素和四环素耐药,表型耐药率分别为90.0%、67.1%、50.0%和60.0%,耐药基因mecA、aac(6')/aph(2″)、erm和tetM的检出率分别是92.9%、77.1%、48.6%和61.4%,耐药表型与耐药基因型的符合率分别为97.1%、70.0%、87.1%和81.4%.     

新疆南疆地区奶牛乳房炎性表皮葡萄球菌生物膜形成及其相关基因的检测

为了揭示新疆南疆地区奶牛乳房炎性表皮葡萄球菌生物膜形成状况,采用微孔板半定量法检测了分离自新疆南疆地区奶牛乳房炎乳样中表皮葡萄球菌的生物膜形成能力,并采用PCR技术扩增表皮葡萄球菌生物膜形成相关基因.结果表明,41％的表皮葡萄球菌能形成不同程度的生物膜,且生物膜形成相关基因较复杂,给本地区奶牛乳房炎的防制带来很大困难.     

威海近海底泥中兼性厌氧菌的分离及鉴定

对威海近海底泥中兼性厌氧菌进行了分离和鉴定,分离得到7株不同种类的细菌:HY1、HY2、HY3、HY4、HY5、HY6、HY7。经Blast软件比对分析以及构建系统发育树,结果表明,HY7与Mi-crobacterium kitamiense的相似性达到99.79%,属于同一个种;而HY1、HY2、HY3、HY4、HY5、HY6与数据库中已明确鉴定种的最大同源性都小于95%,应该是潜在的新属新种,有待进一步鉴定。     

湖南西部地区鸡大肠杆菌血清型分布及耐药性分析

[目的]研究湖南西部地区鸡大肠杆菌的血清型分布及其耐药性。[方法]从湖南西部地区12县市12个养鸡场分离出147株鸡源大肠杆菌,进行血清型鉴定,并测定分离率高的血清型对抗菌药物的敏感性。[结果]在分离到的18个血清型中,O_6、O(22)、O_8和O_4血清型分离率最高,分别为17.7%、12.2%、11.6%和10.2%,为优势型。按NCCLS推荐的纸片扩散法测定了其对14种抗菌药物的敏感性。结果表明,细菌耐药性严重,以多药耐药为主,分离菌对四环素和萘啶酸的耐药率最高,分别为96.6%和85.0%,细菌对头孢噻肟、头孢噻吩、头孢曲松较为敏感,其耐药率在2.0%～8.2%。[结论]为有效防治湖南西部地区鸡大肠杆菌病提供了有价值的参考资料。