根癌农杆菌介导的柑桔遗传转化技术

以新会橙、锦橙(Citrus Sinensis Osb．)胚状体以及北碚447锦橙、纽荷尔脐橙(C．SinensisOsb．)田问成年树腋芽为转化起始材料，经含外源抗菌肽基因(Shiva A和Cecropin B)的根癌农杆菌感染后，比较了胚状体在不同培养基中丛芽的诱导频率和卡那霉素(Km)质量浓度对胚状体丛芽生长以及最终转化频率的影响，也对成年树腋芽在不同BA、IAA质量浓度处理、不同创伤部位和是否用石蜡带(Parafilm)包裹创伤口的诱芽和转化率进行了研究。PCR检测和Southern blot分析证明外源抗菌肽基因(Shiva A和Cecropin B)已导入上述4个柑桔品种；离体抑菌试验证明转基因植株叶片提取液对溃疡病菌有一定的抑制作用。建立了一个简便、快捷、通用的柑桔遗传转化体系。     

根癌农杆菌介导花生高效遗传转化体系的优化

本文研究表面活性剂(MES,methyl ester sulfonate)、真空渗入法和二次侵染对提高花生转化效率的影响,建立了一种农杆菌介导的花生快速高效遗传转化体系。该体系以带子叶的胚轴为外植体,在OD600为0.7的菌液中,加入150mg/L的MES,40kPa真空处理10min,共培养3d后进行二次侵染。采用该体系可显著提高遗传转化率,GUS基因阳性表达率最高,达73.3%。     

HSSP基因植物表达载体构建及其对大豆的遗传转化

大豆中含硫氨基酸匮乏,限制了大豆的营养价值和商业价值。为了提高大豆的含硫氨基酸含量,利用人工设计合成的高含硫氨基酸贮藏蛋白基因(HSSP)转化大豆。以载体p TF101.1为骨架,构建植物表达载体p TFGS,利用农杆菌介导法转化大豆品种东农50,经PCR及试纸条检测,获得转基因大豆16株,基因的转化效率为1.94%。对转基因大豆株系GSDL5进行组织特异性分析,结果表明,HSSP基因在种子中超量表达,而在其它组织部位仅有微量表达。采用接头PCR方法对株系GSDL5基因组插入位点侧翼序列进行克隆,获得与大豆基因组序列匹配的436 bp侧翼序列,HSSP基因插入2号染色体基因的非编码区。经研究,获得了遗传背景明确的,仅在大豆种子中超量表达HSSP的转基因株系GSDL5。     

硝酸银在香蕉遗传转化上的作用

试验以天宝蕉茎尖横切薄片为材料,研究硝酸银在根癌农杆菌介导的香蕉遗传转化中的作用。试验表明,硝酸银对农杆菌菌株LBA4404有较强的抑制作用;在筛选培养基中添加2mg·L^-1硝酸银,褐变乃至死亡的薄片比未添加硝酸银少9．0％,抗性芽分化率增高5％,因此硝酸银对香蕉的遗传转化有促进作用。     

甘薯离体遗传转化研究进展

对甘薯遗传转化目的基因的来源、受体系统和转化方法,以及采用遗传工程改良甘薯品种等方面的研究进展进行综述,并讨论了今后的研究重点。     

亚麻转基因技术研究进展

亚麻是我国重要的纺织工业原料及油料作物，每年亚麻产品出口创汇10-20亿美元。亚麻新品种对农业及亚麻产业具有重要意义。越来越多的科技工作者进行亚麻转基因技术的研究，并利用该技术改良亚麻品种。本文介绍了亚麻转基因技术的概况、研究进展、存在的问题及国内外有关亚麻转基因信息。     

农杆菌介导的芦笋遗传转化体系的建立

以芦笋"井岗701"胚状体为试验材料,在构建p CAMBIA3300-35S-hevein-NOS植物表达载体基础上,采用农杆菌介导的转基因方法,探究菌液浓度、AS浓度、侵染时间和共培养时间等4个因素对芦笋转基因效率的影响,以期建立高效的芦笋转基因体系。结果表明:用菌液浓度OD_(600)=0.6,AS终浓度为200μmol/L的农杆菌菌液进行侵染,侵染10 min后,暗培养4 d的转基因效率最佳,经PCR检测,阳性转化率达21%,获得了转基因幼苗。本实验构建了完整的农杆菌介导的芦笋遗传转化体系。     

Cry1Ac和sck双价抗虫基因遗传转化甘蔗的研究

将双价抗虫基因,即修饰的苏云金芽孢杆菌毒蛋白基因(Cry1Ac)和修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(sck)导入甘蔗优良品种ROC22,获得潮霉素抗性转化植株95株,35株能检测到外源抗虫基因,获得的13株RT-PCR双基因均呈阳性的甘蔗植株,斑点杂交检测有4株呈阳性。结果表明:外源抗虫基因已导入甘蔗基因组中。     

根癌农杆菌介导的大麦幼胚遗传转化影响因素研究

为建立和优化根癌农杆菌介导的大麦遗传转化体系,以大麦幼胚为转化受体,研究了根癌农杆菌介导法转化大麦的主要影响因素。结果表明,以gus基因瞬时表达率、抗性愈伤组织诱导率为转化指标,筛选出了对大麦幼胚感染力比较强的农杆菌菌株EHA105,以及高敏感受体基因型甘啤4号和秀81-47等。实验结果还表明,预培养1 d的大麦幼胚具有较高的瞬时表达率(91%),是较好的转化受体。菌液侵染浓度OD600=0.5,侵染时间为30 min时转化效率最高。在此基础上,侵染后幼胚与农杆菌采用液体共培养方式可明显提高转化效率,gus基因瞬时表达率最高可达90%。在优化条件下,转化约30 d后抗选择剂潮霉素(Hyg)的愈伤组织占受体组织总数的34.2%。     

亚麻转基因技术研究进展

亚麻是我国重要的纺织工业原料及油料作物,每年亚麻产品出口创汇10-20亿美元.亚麻新品种对农业及亚麻产业具有重要意义.越来越多的科技工作者进行亚麻转基因技术的研究,并利用该技术改良亚麻品种.本文介绍了亚麻转基因技术的概况、研究进展、存在的问题及国内外有关亚麻转基因信息.     

植物基因枪转化技术及其在茶树上的应用前景

基因枪作为一种新发展起来的实现生物遗传转化的工具，正越来越受到人们的关注，基因枪法转化频率的高低主要由微弹制备，轰击参数选择，外植体状态这三方面决定，茶树的遗传转化工作起步较晚，且大多数的研究都依赖农杆菌系统完成，基于基因枪技术的不受基因型限制及其转受体广泛的特点，该技术也将会在茶树的遗传转化研究中发挥重要的作用。     

亚麻转基因植株的再生及生根培养的研究

本试验以亚麻幼苗的下胚轴为外植体,利用抗除草剂Basta的目的基因和G USINT基因,采用农杆菌介导法进行了亚麻转基因过程中植株再生及生根适宜培养基的筛选试验.经试验得出:在附加少量BA和NAA的Ms培养基上愈伤组织的再分化率可达31.8%～40 .2%.经GUS基因检测在脱菌后3天亚麻下胚轴初步形成的愈伤组织的转化率可达72.2%;四周后的转化率为25%;再生植株的转化率为20%.在1/2Ms培养基中附加0.001mg/L NAA 可使再生植株的生根率达到87.4%.通过试验初步建立起了根瘤农杆菌介导法亚麻转基因系统.     

利用农杆菌介导法进行亚麻转基因的培养基研究

本试验以亚麻幼苗的下胚轴为外植体进行了卡那霉素选择压力的试验.确定50mg/L为适宜的选择压力.同时采用农杆菌介导法,利用EHA105菌株进行了亚麻转基因适宜培养基筛选试验.经试验认为MS培养基是亚麻转基因的适宜培养基.在附加IAA3.5mg/L、KT2mg/L、LH150mg/L的MS选择培养基上转化外植体的愈伤组织的诱导率可达77.4%.     

亚麻转基因植株的再生及生根培养的研究

本试验以亚麻幼苗的下胚轴为外植体 ,利用抗除草剂 Basta的目的基因和 GUSINT基因 ,采用农杆菌介导法进行了亚麻转基因过程中植株再生及生根适宜培养基的筛选试验。经试验得出 :在附加少量 BA和 NAA的 Ms培养基上愈伤组织的再分化率可达31.8%～ 40 .2 %。经 GUS基因检测在脱菌后 3天亚麻下胚轴初步形成的愈伤组织的转化率可达 72 .2 %;四周后的转化率为 2 5 %;再生植株的转化率为 2 0 %。在 1/2 Ms培养基中附加 0 .0 0 1mg/L NAA可使再生植株的生根率达到 87.4%。通过试验初步建立起了根瘤农杆菌介导法亚麻转基因系统。     

利用农杆菌介导法进行亚麻转基因的培养基研究

本试验以亚麻幼苗的下胚轴为外植体进行了卡那霉素选择压力的试验。确定5 0mg/L为适宜的选择压力。同时采用农杆菌介导法 ,利用EHA1 0 5菌株进行了亚麻转基因适宜培养基筛选试验。经试验认为MS培养基是亚麻转基因的适宜培养基。在附加IAA3.5mg/L、KT2mg/L、LH1 5 0mg/L的MS选择培养基上转化外植体的愈伤组织的诱导率可达 77.4%。     

植物抗病基因工程育种策略及其在大豆上的应用

概述了植物抗真菌病害、细菌病害和病毒病害基因工程育种的主要策略,重点介绍了大豆转基因抗病育种的主要成果.植物抗病害转基因育种策略主要包括基于寄主-病原菌相互识别和信号传导体系的基因工程和基于抗菌蛋白的基因工程;植物抗病毒病害基因工程育种策略还包括病毒外壳蛋白基因介导的抗性、复制酶介导的抗性、运动蛋白介导的抗性、卫星RNA介导的抗性、RNA介导的抗性等.     

亚麻转基因中抗生素应用效果的研究

在利用农杆菌介导法进行亚麻抗除草剂草丁膦(Basta)目的基因(Bar)导入工作中；对选择培养基内加入．500mg/l克拉维酸钾(timentin进口) 200mg/l头孢噻肟(claforan进口)的抗菌素来取代500mg/l头孢噻肟(Cefotaxime国产)不仅脱菌效果彻底，期效长，且不影响亚麻愈伤形成和芽的分化；同时对再生植株进行了盆栽Basta抗性筛选试验，获得不同抗性的植株和种子。     

亚麻再生体系建立与遗传转化研究进展

介绍了根癌农杆菌介导的亚麻遗传转化的研究现状,综述了亚麻高效再生体系的建立和遗传转化过程中的主要影响因素,包括外植体的选择、最适培养基、培养条件以及农杆菌菌株类型、菌液浓度、侵染时间、预培养时间、共培养时间、筛选剂类型、除菌剂类型等内容,讨论了亚麻遗传转化存在的问题,并对这一体系的发展进行了展望.