重组大肠杆菌高密度发酵过程中乙酸的控制

大肠杆菌是工业生物技术应用最广泛的生产菌种,当其在葡萄糖培养基上快速生长时,乙酸作为副产物会大量积累。由于乙酸对细胞生长和目标蛋白生产均有负面影响,因而乙酸的生成被认为是大肠杆菌高密度发酵生产重组蛋白过程中最大的问题与难题。在过去20a间,有大量研究致力于在重组大肠杆菌生长过程中降低乙酸的积累。该文主要在生物过程水平上,综述了控制乙酸的相关研究及成果,以期更好地研究和控制重组大肠杆菌的高密度发酵过程。     

重组大肠杆菌的高密度发酵放大工艺研究

在初步筛选获得性价比较好的大肠杆菌高密度发酵培养基的基础上,以表达溶菌酶基因的pcDNKLYZ重组质粒转化的大肠杆菌DH5α为模型,用150 L发酵罐进行工艺放大研究,通过对细菌生长密度(D600 nm值)、质粒产量的比较和分析,探讨用于重组质粒规模化生产的发酵工艺。结果表明:国产培养基中添加100 mL.L-1甘油、磷酸盐和硫酸盐后,重组菌的生长密度和质粒产量均与进口LB培养基接近或略高;收集的菌体分别于-70和-20℃保存,质粒提取和定量检测结果显示保存6周后质粒产量无明显变化;质粒提取和定量检测结果显示每克湿菌用5 mL溶液悬浮,可获得较高的质粒产量。     

重组毕赤酵母高密度发酵表达猪表皮生长因子及其纯化鉴定

采用高密度发酵法在5.5 L发酵罐中对pPIC9-pEGF/GS115重组毕赤酵母Pichia pastoris菌株进行发酵,在培养至酵母菌体密度(D600nm)约150时,以甲醇诱导目的蛋白表达,48 h后菌体密度达315,目的蛋白表达产量约300 mg/L.发酵上清液经0.45μm和截留相对分子质量30 000的超...     

重组G蛋白基因工程菌高密度发酵研究

[目的]探索基因重组工程菌高密度发酵工艺,为得到高浓度和高产量的链球菌(Streptococcus)G蛋白(SPG)奠定基础。[方法]通过一级摇瓶、二级种子罐培养,以及将菌种转接到发酵罐并进行分批补料高密度培养,探讨了IPTG加入量等条件对发酵的影响,考察了接种量、氧气、pH、培养方式等发酵工艺。[结果]高密度发酵能得到至少80 g/L的菌体,最高达到150 g/L,每升发酵液可得到1 g的SPG。SPG高密度发酵的生产条件为:接种量10%,通气量1 vvm,溶氧控制在30%～45%,发酵过程控制pH 7.0～7.2,IPTG的诱导浓度为0.2 mmol/L,时间为4 h,发酵后SPG总蛋白能达到菌体蛋白的20%以上。[结论]利用该生产工艺可得到高浓度菌体和高产量SPG。     

重组UK114工程菌的高密度发酵培养

为了鉴定重组UK114基因工程菌是否稳定表达,并进行初步的高细胞密度发酵试验。将重组基因工程菌BL21(DE3)/p GEX-4T-3-UK114进行菌种的传代培养并酶切检测;在保持菌种不变情况下,在5 L高密度发酵罐中,采用补料分批培养方法进行高密度发酵。结果表明,重组基因工程菌BL21(DE3)/p GEX-4T-3-UK114传代20代后质粒稳定存在,高密度发酵结束菌体浓度OD600大于50,融合蛋白量占菌体总蛋白量的31%,其含量达到2.1 g/L,工程菌获高效表达。     

周期操作对重组大肠杆菌高密度发酵表达类人胶原蛋白的影响

采用补料一分批式发酵,研究了4种不同间歇周期补氮操作对细胞生长和类人胶原蛋白表达的影响,以及发酵过程中细胞质粒稳定性、细胞菌落形成能力和乙酸生成量的变化。结果表明,在每隔10min连续补加 36mL补料氮溶液(22s完成补加操作)的周期操作下,细胞质粒稳定性明显提高,细胞菌落形成能力下降较小,乙酸生成量低,仅0．7 g／L,最终细胞密度为84 g／L,类人胶原蛋白表达量可达到14 g／L,在4种操作方式中最高。     

基因工程菌的高密度发酵研究

就基因工程菌高密度发酵工艺的几个主要影响因素,包括重组菌构建、培养条件、生长抑制因子以及它们的控制技术等因素进行了综述;分析了这些因素对目的蛋白表达的影响;介绍了基因工程菌高密度发酵领域的一些研究进展.     

纳豆芽孢杆菌高密度发酵条件优化

为有效提高纳豆菌的产率,达到高密度发酵培养的效果,对纳豆芽孢杆菌高密度发酵培养的培养基成分和培养条件进行了优化试验。采用单因素和正交试验方法,最终确定最佳培养基为淀粉20．0g／L,酵母粉2．0g／L,蛋白胨2．0g／L,NH4C11．0g/L,K2HPO4 2．0g／L,KH2P042．0g／L,MgSO41．0g/L。最佳培养条件为：初始pH值6．5;接人菌种的体积分数为0．05;培养温度35℃。在20L发酵罐中高密度发酵培养,纳豆芽孢杆菌活菌数达2．95×10^14 cfu／L,较优化前提高近一个数量级。     

基因工程牛生长激素高密度发酵表达的研究

通过对重组牛生长激素基因工程大肠杆菌摇瓶和5、30 L发酵罐发酵表达的研究,建立了基因工程牛生长激素的高密度发酵表达工艺,菌体密度最高可达到OD550=120,rbIL-2的表达量占菌体总蛋白的20%以上.     

饲用枯草芽孢杆菌高密度发酵培养基的优化

为了提高枯草芽孢杆菌NKY1145发酵液微生物活菌量,对培养基组成成分(碳源、氮源和无机盐)进行了优化试验。最终确定了枯草芽孢杆菌高密度发酵培养基组成成分最佳组合为葡萄糖2%,糖蜜3%,酵母粉3%,黄豆粉2%,氯化铵3%,硫酸镁2%,柠檬酸钠3%,枯草芽孢杆菌NKY1145最大活菌数浓度可达到6.3×109CFU/m L。     

高细胞密度发酵技术的研究进展

随着基因重组技术和发酵技术的发展,为实现菌体的低成本规模化生产,高细胞密度发酵技术已成为发酵领域的研究热点。该研究阐述了影响高细胞密度发酵的主要因素和建立高细胞密度发酵技术的优化策略,并对高细胞密度发酵技术的应用前景进行了展望。     

生防芽孢杆菌高密度发酵技术研究进展

低成本、高效率的高密度培养工艺和技术是近年来研究芽孢杆菌菌剂工业化生产的热点。影响高密度发酵的因素非常多,包括菌种、培养基组成、培养条件、培养方式等。对影响芽孢杆菌高密度发酵主要因素的研究进展进行了综述,旨在为芽孢杆菌的高密度发酵提供相关理论依据与技术指导。     

Expression of Duck Interferon Alpha in BL21（DE3）plysS

To obtain the protein of duck interferon alpha and study its biological activities, the prokaryotic ex-pression vector of DuIFN-α was constructed and expressed in BL21 (DE3) plysS. Using PCR technique, the proteingene of DuIFN-α was cloned from pMD-18-duIFN-α recombinant. The gene was then inserted to pGEM-T vectorand identified by restriction endonuclease analysis and sequencing. DuIFN-α was ligated with the prokaryotic expres-sion vector of pET30 a, then transformed into BL21 (DE3) plysS. The best inducing time and IPTG concentration for the expression of this recombinant protein was tested through the expression of the positive recombinant with differ-ent time span and different IPTG concentration. Lots of the protein of DuIFN-α were expressed in BL21 (DE3)plysS with 1 mmol·L-1 IPTG for 4 hours and its molecular weight for 34 000.     

玉米材料的耐密性鉴定及耐密型育种的思考

逐步增加玉米种植密度是当前玉米生产发展的必然趋势,而玉米自交系的耐密性在一定程度上决定了杂交种的耐密性。以夏玉米育种上常用的4个基本骨干自交系为试验材料,以耐密自交系130为对照,在种植密度7.5万～15.0万株/hm^2范围内设计6个梯度水平,分析不同种植密度对玉米主要生育期、穗部性状、倒伏倒折率和产量的影响,旨为耐密型玉米育种提供合理的选系密度。结果表明：随着种植密度的增大,4个参试玉米材料的穗长变短、穗粗变细、秃尖长度增大,当密度超过某一个范围后倒伏倒折率明显增大,产量呈先增加后降低的变化趋势,其中产量最高的种植密度范围为12.0万～13.5万株/hm^2;而耐密自交系130（对照）的穗部性状变化幅度较小,倒伏倒折率明显较低,产量一直呈增加趋势。在试验密度范围内,不同种植密度对同一玉米材料的主要生育期和穗行数均无显著影响。并对耐密型玉米品种选育的种植密度和杂交种鉴定技术进行了探讨,认为在选择耐密型自交系时低代选系材料的种植密度应〉13.5万株/hm^2,在选择耐密型杂交种时还要保证穗粒数和穗粒重不能降低得太多,对耐密型杂交种进行鉴定时设立一年多点异地鉴定并适当加大鉴定种植密度。     

基于重组工程法高转化效率的大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株构建

[目的]提高最常用的异源蛋白表达宿主菌E.coli BL21(DE3)的转化效率。[方法]利用基于质粒的重组工程系统和双链断裂修复功能。[结果]敲除了编码降解外源DNA的I型限制性内切酶的hsdR基因,获得了高转化效率以及其他功能与BL21(DE3)仍保持一致的LS1928菌株。[结论]获得的LS1928菌株可能会作为获得催化用酶的关键材料,进而在蛋白质工程等研究领域有着重要的作用。     

重组酶Cre基因在大肠杆菌中的高效表达及其一步纯化和活性检测

为了实现DNA重组酶Cre在体外的应用, 以pET-30a高效表达载体为基础构建了pTE30-Cre质粒.将此质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导的Cre基因的高效表达.对表达出的Cre重组酶蛋白进行镍离子鳌合法一步纯化,并以带有两个同向loxP位点的质粒为底物,对纯化出的Cre酶进行活性检测.该实验为Cre酶的体外应用奠定了基础.      

大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白的研究

为了研究在大肠杆菌BL2 1(DE3)中重组蛋白的表达特点 ,探讨重组蛋白在大肠杆菌中表达时可溶性蛋白与包涵体出现的特点 ,从表达载体中表达了植物ACC合成酶 .经SDS PAGE电泳与双波长扫描分析 ,确定目的蛋白随表达时间、菌液密度的增加而增加 .但是其最佳表达时间为 2 5h ,菌液密度OD6 0 0 为 0 6 ,IPTG的最佳浓度为 0 6mmol L ,此时目的蛋白含量占全菌蛋白含量之比最高 .植物ACC合成酶在大肠杆菌中表达时以包涵体的形式存在 ,未能检测到可溶性蛋白的表达     

玉米耐密性及其生理基础研究进展

种植耐密型玉米是近几年玉米生产发展的趋势。本文在前人研究的基础上,就耐密型玉米耐密性的评价方法以及耐密型玉米耐密生理基础进行总结和探索,以期为耐密型玉米自交系及杂交种选育提供参考。     

枯草芽孢杆菌B21抗菌蛋白的分离纯化及特性研究

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B21对番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea Pers.)有较强的抑制作用,其产生的抗菌物质主要是抗菌蛋白.为明确该抗菌蛋白的理化性质,利用饱和硫酸铵沉淀法得到拮抗粗提蛋白,所获粗提蛋白不耐高温,对胰蛋白酶和蛋白酶K部分敏感,对链霉蛋白酶不敏感而对氯仿敏感,作...