2种基因漂移检测方法对比及其影响因素分析

[目的]确定针对田间基因漂移常用的PCR检测或蛋白检测方法2种方法检测结果的一致性及其环境影响因素。[方法]通过设计环境因素和大量样本的PCR检测和蛋白检测方法,对3个处理（风力处理、蜜蜂处理和空白对照）下3个品种共计1769个样本进行了双重检测。[结果]田间基因漂移存在基因转入但不表达的现象,即PCR检测和蛋白检测结果并非完全一致。环境因素中,风力处理和蜜蜂处理对基因表达无显著影响,但蜜蜂处理的基因表达率高于风力处理。[结论]为基因漂移的精确检测提供了参考。     

IrrE基因转化甘蓝型油菜及其分子检测

为提高油菜的盐胁迫的耐受性,文章以甘蓝型油菜(Brassica napus L.)下胚轴为转化材料,通过农杆菌介导法将耐辐射球菌(Deinococcus radiodurans,DR)的IrrE基因导入甘蓝型油菜84100-18(玻里马细胞质雄性不育恢复系)中,经过卡那霉素的筛选培养,获得了抗卡那霉素的再生植株,对抗性植株进行PCR和实时荧光定量PCR检测。结果表明:部分抗性植株多次重复检测显示为阳性植株,初步证实了IrrE已整合到油菜基因组中并且IrrE基因已经在这些植株中进行mRNA水平的转录。     

检测猪圆环病毒2型的一种PCR方法

参照genbank已发表的猪圆环病毒2型的基因序列，设计l对2型特异的引物，对广东省20个猪场送检的患病断奶仔猪的病料进行PCR扩增，并将PCR产物连接到pMDl8-T载体上，对重组质粒进行PCR、酶切鉴定及测序，最后发现PCR检测均为阳性。     

多重PCR方法同时检测3种转基因作物外源基因

根据目前转基因作物常见的外源基因,选择出现几率较高的Ca MV 35S、NOS、CP4-epsps 3个基因,引物分别参照国家相关标准中的特异性序列,建立可同时特异性地检测3种外源基因的多重PCR检测体系。同时,对反应条件进行优化并测试其特异性和灵敏度。已知样品检测证明,此多重PCR体系具有良好的可靠性。利用此体系在对康定县境内出售大米、玉米样品检测中未检测相关基因。     

2种自动凯氏定氮仪的对比分析

从自动凯氏定氮仪中挑选2种分别使用电位法和颜色法对于最终结果进行判断的仪器,介绍这2种凯氏定氮仪的工作原理及主要部件,使用这2种仪器分别对豆粕、大豆等进行蛋白检测与分析,并对2种仪器工作效率、试剂消耗及维护成本等方面进行综合分析。结果表明:Vapodest 50s和KJELTEC 8400这2种仪器都能很好地进行样品粗蛋白含量的检测试验。但是从工作效率和维护成本方面来看,KJELTEC 8400自动凯氏定氮仪要相对优于Vapodest 50s自动凯氏定氮仪,后者蒸馏滴定时间较长,人工参与度高,后期使用维护成本较高,不利于实验室工作优化。     

猪链球菌2型溶血素基因的检测

根据GenBank发表的猪链球菌2型(SS2)溶血素基因(sly)全序列,利用O ligo(7.0)软件设计并合成了可扩增长度为495 bp的引物,从SS2参考菌株ATCC43765和SS2江苏分离株HA9801中扩增出495 bp的条带,利用HindⅢ限制性内切酶对具有相应单一酶切位点的PCR扩增产物进行酶切,获得预期的314 bp和181 bp的2个DNA片段,检测灵敏度达到2.5×102CFU.mL-1;但不能从马链球菌兽疫亚种ATCC35246、大肠埃希氏菌ATCC25922、单增李斯特杆菌ATCC19115/413、金黄色葡萄球菌ATCC25923、粪肠球菌ATCC29212中扩增出相应的条带。PCR扩增产物的测序结果与GenBank的猪链球菌sly基因(Z36907)核苷酸序列完全一致。该方法可快速、敏感、特异地检测SS2的溶血素基因。     

基于dnaJ基因的弧菌PCR检测方法

[目的]建立一种能扩增dnaJ基因全长的PCR检测方法,为弧菌的快速筛查及种类鉴定提供技术支持.[方法]以弧菌dnaJ基因为靶基因,在其首尾的保守区域设计一对简并引物,经优化退火温度和引物浓度,建立能扩增弧菌接近全长dnaJ基因的PCR检测方法,并通过特异性试验、灵敏度试验和临床应用评价等验证其适用性.[结果]优化后的PCR反应体系50.0 μL:2×F8 FastLong PCR MasterMix 25.0 μL,上、下游引物(20 μmol/L)各2.0 μL,DNA模板5.0 μL,灭菌水补足至50.0 μL.扩增程序:94℃预变性3 min;94℃ 10 s,55℃ 15 s,72℃ 15 s,进行35个循环;最后72℃延伸5 min.该PCR检测方法对副溶血弧菌、哈氏弧菌、创伤弧菌、河流弧菌、溶藻弧菌、拟态弧菌、霍乱弧菌和栖黑海弧菌等8种弧菌属细菌具有很强的特异性,对弧菌的最低检出限为102CFU/mL.应用建立的PCR检测方法对51株分离自海水样品的弧菌和32株分离自对虾样品的弧菌进行检测,结果显示全部为阳性,其中,海水样品中包括有副溶血弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌、河流弧菌、哈氏弧菌和栖黑海弧菌,对虾样品中包括副溶血弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌、河流弧菌和哈氏弧菌;经测序及同源性比对分析发现,种间菌株的dnaJ基因序列相似度为79.5%~92.8%,种内菌株间的dnaJ基因序列相似度为98.2%~99.9%.[结论]基于dnaJ基因建立的弧菌PCR检测方法能扩增出弧菌接近全长dnaJ基因,具有快速便捷、灵敏准确、适应性好等优点,结合测序技术,可为弧菌快速筛查及种类鉴定提供更全面和更准确的技术手段.     

PCR对绿脓杆菌algX基因检测及常见问题分析

绿脓杆菌广泛分布于自然界及正常动物皮肤、肠道和呼吸道,是临床上较常见的条件致病茵之一。常根据微生物学、免疫学及流行病学结合聚合酶链反应(PCR)等现代分子生物学技术进行检测。PCR技术具有简便、快速、灵敏、特异性强等特点。从20世纪90年代开始,聚合酶链反应作为快速诊断疫病的重要手段,在绿脓杆菌外毒素A受体结合亚单位基因的检测和研究上得到了充分应用。笔者对PCR检测绿脓杆菌藻聚糖生物合成基因algX的常见问题进行分析。     

布鲁菌PCR检测方法的建立及其应用

本文根据已发表布鲁菌BCSP31基因序列,设计1对引物,以布鲁菌19号苗基因组DNA作为模板,建立诊断牛布鲁菌病的PCR方法,并对方法的特异性、敏感性及适用性进行验证.结果显示,PCR能扩增布鲁菌BCSP31基因特定序列.该方法对布鲁菌的最小检出量为9pg,对葡萄球菌26001株、大肠杆菌O78等7种参照菌株的核酸扩增结果均为阴性.建立的PCR方法具有快速简便、特异性强、敏感性高等特点.     

安氏隐孢子虫ITS-1基因PCR检测方法的建立

[目的]建立针对安氏隐孢子虫的PCR快速检测方法,为安氏隐孢子虫的检测和分子流行病学调查提供技术支撑.[方法]根据GenBank中安氏隐孢子虫的ITS-1基因序列设计1对特异性引物,建立基于ITS-1基因的PCR方法,并通过特异性试验、敏感性试验、临床检测以及与经典巢式PCR检测方法进行比较等,验证其可行性.[结果]基于ITS-1基因的PCR检测方法能扩增出安氏隐孢子虫的特异条带,而对猪源隐孢子虫、贝氏隐孢子虫、微小隐孢子虫、牛泰勒氏虫、牛巴贝斯虫、伊氏锥虫、食道口线虫的扩增结果均为阴性;将测序结果进行BLAST比对,发现其与GenBank中安氏隐孢子虫的同源性均在99%以上.敏感性最低可检测每克牛粪中5个卵囊;用于检测广西不同地区的1613份牛粪样品时,与经典巢式PCR检测方法相比,发现两者的阳性检出率均为11.72%,且吻合率达100%.[结论]安氏隐孢子虫ITS-i基因PCR检测方法具有快速、敏感、特异的特点,适用于安氏隐孢子虫的检测和分子流行病学调查分析.     

松科植物基因流的测量方法研究进展

基因流是影响植物种群遗传结构的重要因子,其对于濒危植物的保护研究有重要意义。松科植物作为重要的造林绿化树种,有着巨大的生态和经济价值,但由于人为的干扰破坏,近年来松科的很多属种已濒临灭绝。文中通过对国内外松科植物基因流的测量方法及研究进展进行总结讨论,以期对今后的松科植物繁育保护工作起到一定的帮助。     

花生矮化病毒3种PCR检测方法的建立和比较

建立了花生矮化病毒（PSV）普通RT-PCR、SYBR Green I荧光RT-PCR和免疫捕获RT-PCR检测方法,并比较了它们的检测灵敏度。结果表明,以阳性对照为样品,普通RT-PCR灵敏度达到10-4,SYBR Green I荧光RT-PCR和免疫捕获RT-PCR的检测灵敏度相当,相对灵敏度均可达到10-6;检测混有PSV的大豆叶片样品,普通RT-PCR灵敏度为10-1,SYBR Green I荧光RT-PCR和免疫捕获RT-PCR的检测灵敏度为10-5;SYBR Green I荧光RT-PCR和免疫捕获RT-PCR方法比直接RT-PCR灵敏度高至少100倍,尤其在带毒植物叶片检测中优势更明显,而且灵敏、简便、同时重复性好。     

猪微卫星多态性两种检测方法的比较研究

 为了确定一种安全、有效的检测猪微卫星多态性的实验方法,采用两种电泳和两种染色方法对大白猪基因组DNA进行了6个微卫星座位的PCR扩增,并将扩增产物在2.5%的琼脂糖凝胶上电泳,EB染色,然后又在8%的聚丙烯酰胺凝胶上电泳,AgNO₃染色。结果表明两种方法检测出的等位基因数目和基因多态性水平存在差异,8%的聚丙烯酰胺凝胶电泳在区分微小差异片段能力上明显优于2.5%的琼脂糖凝胶电泳。     

两种管流试验模型流速确定方法的比较

采用管流试验装置模拟实际成品油管道时,常采用相似原理来确定试验模型.比较了使用相似原理和有效剪切应力相等原理2种方法确定管流试验装置流速的合理性.结果表明:在管壁性质改变时采用相似原理来确定模型的流速是不适用的,而有效剪切应力相等原理能够保证管内流动状态与实际工业管道一致,验证了有效剪切应力相等原理的合理性.     

两种血清抗性检测方法的比较分析

采用流式细胞术法对大肠杆菌的血清抗性进行检测,并与传统涂板法相比较,探讨流式细胞术在血清抗性检测方法中的应用。结果表明,两者呈正相关关系(P=0.0340.05),流式细胞术法可以代替涂板法对大肠杆菌的血清抗性进行检测。该方法可以减少由于涂板不均匀、人工计数等造成的误差,且易操作、计算少、耗时少,数据更准确。     

校园网流量异常检测与处理方法

新闻自由与人格权是统一性和矛盾性并存的辩证关系。我国新闻侵权审判具有新闻报道的监督性可能影响审判,大众关注度较高,法官的价值取向对审判的影响重大的独有特征。目前我国新闻侵权审判存在诸如审判依据尚未系统化、科学化,审判标准不统一,审判结果严重失衡,政治压力直接影响审判结果等缺陷。本文通过对新闻侵权审判的法理分析,同时借鉴美国新闻侵权审判制度及其经验,以期寻求一条具有中国特色的新闻审判的司法裁判之路。     

基于PCR技术检测肠球菌esp基因的引物选择及其初步应用

现今全球水域环境受到人类活动的影响,粪便污染日趋严重,因此确定水环境是否存在粪便污染对公众健康、环境治理等方面具有重要意义.以人类肠道致病痛原体肠球菌中的esp基因作为检测水体中人类粪便污染的分子标记,从3对具有代表性的引物中选择最佳引物,建立PCR检测方法,得到了较佳的PCR反应条件,并初步应用于湖北武汉地区南湖水中...     

流动注射分析法和传统方法测定土壤中N的比较研究

为了对FIAstar 5000流动注射分析仪和传统方法(氧化镁浸提.扩散法、酚二磺酸比色法和镀铜镉还原-重氮化耦合比色法)的分析结果进行比较,分别采用此两种方法测定了同一流域内不同利用类型土壤中铵态氮、硝态氮和亚硝态氮的含量,通过样品均值、测试误差、回收率和标准偏差等指标对两种方法进行了比较研究.结果表明,流动注射分析仪在测定土壤中铵态氮和硝态氮时,分析速度快且仪器具有较好的稳定性(5次平行次数内结果RSD<5%).从分析结果的准确性看,采用流动注射分析仪分析土壤中铵态氮、硝态氮时,与传统方法也具有可比性,样品回收率分别为98.5%～102.0%和96.7%～98.3%.在测定土壤亚硝态氮时,流动注射分析法仪器稳定较差(5次平行次数内结果RSD>6%),且分析结果普遍偏低,需要进行必要的校正.因此,在大批量测定土壤样品铵态氮、硝态氮时,用流动注射分析法是可行的,但测定亚硝态氮含量时,存在较大的误差,需要进行校正.