一例冰下低温爆发的锦鲤疱疹病毒病的鉴定

2013年4月初低温下,吉林省白山地区某网箱养殖场鲤（Cyprinus carpioL．）大量死亡,病死鲤无明显临床病变。采用PCR扩增技术检测了这些病鱼,结果表明,该低温爆发的疾病为锦鲤疱疹病毒病（KHVD）。这种病常爆发在水温为18-28℃的春秋季,冰下爆发还未有报道。本次锦鲤疱疹病毒病的鉴定,对于锦鲤疱疹病毒感染鲤温度条件的变化和疾病的预防提供了参考。     

鲤鱼患锦鲤疱疹病毒病的诊断和防控

近几年来我国养殖鲤鱼的锦鲤疱疹病毒病危害十分严重,全国主要鲤鱼养殖地区都有流行,池塘养殖、网箱养殖到小型湖泊养殖等各种养殖模式发病率、死亡率都很高。由于对该病的宣传力度不够,绝大多数鲤鱼养殖业者和基层鱼病防控单位甚至还不知道有这种疾病或知之甚少,鲤鱼患该病后错误地当成     

锦鲤疱疹病毒病疫苗和免疫方法的研究进展

锦鲤疱疹病毒病(Kio herpesvirus diease,KH-VD)是由锦鲤疱疹病毒引起的一种导致锦鲤和普通鲤鱼高发病率和高死亡率的病毒病,死亡率可高达80%～100%。该病主要发生在水温18～28℃的春秋两季,夏季和冬季很少或不发生,同时该病只感染鲤鱼以及其他鲤科鱼类,而不感染其他品种的鱼类,但可携带病毒。经研究发现,该病毒为双股线性DNA病毒,其基因组大小为295kb,有156个开放阅读框(ORF),但只有少数确定了其功能。经电镜观察可发现该病毒是大小为100～110纳米的二十面体,有囊     

锦鲤疱疹病毒GZ1301株的分离与鉴定

2013年4月,广东省一锦鲤养殖场暴发不明病因疾病,濒死锦鲤在塘边游动缓慢直至死亡,死亡率高达100%。现场采样发现,发病锦鲤体长25 cm,眼球凹陷,胸鳍及腹鳍出现出血斑点,解剖发现内脏器官包括肝、脾、肾肿大。细菌分离结果显示,内脏器官肝脏和肾脏中未分离到细菌。提取自然发病鱼的肝、脾、肾、鳃组织DNA作为模板,采用世界动物卫生组织(OIE)推荐的锦鲤疱疹病毒(KHV)检测引物进行PCR扩增,均能扩增出预期大小的特异性产物。NCBI的Blast搜索结果显示,扩增序列与KHV胸苷激酶(thymidine kinase,TK)基因核苷酸序列同源性为99%。病鱼内脏组织研磨过滤除菌后,腹腔注射20尾锦鲤,可复制出与自然发病相似的症状,并于7 d内全部死亡。取病鱼的鳃和肾脏研磨过滤除菌后进行细胞感染实验,结果显示,组织滤液感染CCB细胞后,盲传5代可以观察到典型的细胞病变效应(CPE)。将出现典型CPE的CCB细胞进行超薄切片制备和电镜观察,电镜下病毒呈对称20面体,直径约100 nm。将出现典型CPE的细胞进行间接免疫荧光实验,可以观察到特异性荧光。根据TK基因全长序列建立系统进化树,证实该毒株为KHV亚洲型毒株,暂命名为KHV-GZ1301株。研究结果可为KHV起源进化、分类以及疾病防控提供重要材料。     

象山县网箱养鲈的现状与对策

结合调查和亲身育苗实践，论述了浙江省象山县网箱养鲈的现状、存在问题及对策。     

锦鲤疱疹病毒天津株的分离与鉴定

为分析近年来天津地区养殖鲤(包括锦鲤)暴发性死亡的病因,利用病原菌分离、细胞培养、电镜观察、组织病理切片、人工感染实验、PCR和荧光定量PCR检测、基因分型等方法对患病鱼及病原进行了研究。结果显示,在患病鱼体表未发现大量寄生虫;在肝、脾、肾等内脏组织中未能分离到细菌;在鳃组织中发现大量的圆形病毒颗粒;使用患病鱼组织滤液感染锦鲤鳍条原代细胞,可观察到典型的细胞病变效应(CPE),注射患病鱼组织滤液和产生病变的细胞上清液可分别导致健康锦鲤93.3%和86.7%的死亡率;通过病理组织切片观察,主要病变组织为鳃、肝脏和肾脏。采用世界动物卫生组织(OIE)推荐的锦鲤疱疹病毒(KHV)检测方法进行PCR检测发现KHV呈阳性,且KHV在鳃组织中含量最高,肾脏次之,脑组织中最少。结合TK基因全长序列建立系统进化树和基因型分析,证实此次分离到的KHV为亚洲型毒株,属于I++II–基因型,将其命名为KHV-TJ1601株。这是我国华北地区首次报道KHV I++II–基因型的存在,可为KHV的进化分析和疫苗制备提供基础资料。     

锦鲤疱疹病春主要囊膜蛋白基因的PCR扩增与序列分析

为了进一步研究锦鲤疱疹病毒主要囊膜蛋白(KHV-MEP)的功能及锦鲤疱疹病毒(KHV)的感染机制,根据KHV-MEP基因序列设计并合成1对引物,从自然感染KHV发病的锦鲤(Cyprinus carpio Koi)肝组织总DNA中扩增获得特异性基因片段.将所得基因片段克隆到pMD18-T Simple Vector载体中,获得重组质粒T-KMEP;酶切鉴定后进行序列测定,并采用氨基酸亲水性分析软件Tmpred对其编码氨基酸序列进行分析;在对该片段所编码氨基酸可能抗原位点分析的基础上,进行PCR改造构建原核表达载体,获得重组表达载体pBV-KMEP1和pBV-KMEP2.所获得的基因片段大小为771 bp,该基因片段与GenBank中已登录的KHV-MEP基因(AB178537)的同源性为100%,是一个完整的开放阅读框,所编码的蛋白由256个氨基酸组成,分子量为28.2kD,等电点(PI)为8.65.该序列含有4个跨膜区,可构成主要抗原决定簇.结果显示所获得的目的基因片段就是锦鲤主要囊膜蛋白全基因.     

鲤疱疹病毒3型T分离株主要免疫原性蛋白的鉴定

为了鉴定鲤疱疹病毒3型(Cyprinid Herpesvirus 3,CyHV-3)主要免疫原性蛋白,研究采用CyHV-3-T分离株感染CCB细胞系,运用蔗糖密度梯度超速离心方法对CyHV-3进行纯化,纯化的病毒颗粒经SDSPAGE和考马斯亮蓝染色后,用锦鲤(Cyprinus carpio haematopterus)抗CyHV-3阳性血清进行Western blotting分析和液相色谱串联质谱鉴定。结果表明,透射电镜下可观察到大量完整囊膜包裹或只有裸露核衣壳的CyHV-3颗粒,Western blotting结果显示抗CyHV-3阳性血清与多种病毒蛋白具有明显特异性免疫反应,质谱鉴定表明其中4种免疫原性蛋白分别为ORF92、ORF66、ORF72和ORF81,其中ORF66和ORF72为首次鉴定的具有免疫原性衣壳蛋白。本研究将为CyHV-3血清学诊断方法的建立、亚单位疫苗或DNA疫苗的研制提供更多候选抗原。     

南四湖网箱网围养殖对水环境的影响

通过对南四湖水域营养盐、污染物对比发现:南四湖养殖区和非养殖区水体TN、TP、COD、Cu含量差别不大,石油类养殖区略高;养殖区TLI(∑)与非养殖区TLI(∑)差别不大。南四湖进行网箱、网围养殖,对湖区水环境无明显影响。     

Koi herpesvirus epizootic in cultured carp and koi, Cyprinus carpio L., in Taiwan

Koi herpesvirus (KHV) poses a significant threat to cultured koi and common carp, both Cyprinus carpio L. Since the first reported case in Israel in 1998, KHV has rapidly spread worldwide. This study investigates the spread of KHV to Taiwan by collecting 49 cases of suspected common carp and koi infections from 2003 to 2005 for analysis. Clinical signs included lethargy, anorexia, increased respiratory movements and uncoordinated swimming. Hyperaemia, haemorrhage on body surface and necrotic gill filaments were recorded. Gill epithelial hyperplasia, necrosis and eosinophilic intranuclear inclusion bodies were observed by histological examination, while virions were detected using transmission electron microscopy. By detecting the presence of the KHV thymidine kinase (TK) gene and the KHV 9/5 gene using polymerase chain reaction (PCR), 37 cases were identified as KHV-positive, and the cumulative mortality of infected fish was 70-100%. Positive cases showed identical sequences for the genes analysed, implying that they were of the same origin. For the KHV 9/5 gene sequence, these cases exhibited 100% identity with the Japanese strain (TUMST1, accession number AP008984) and 99% identity with the Israeli (KHV-I, DQ177346) and US (KHV-U, DQ657948) strains. Additionally, a loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay was performed and found to be more sensitive than PCR tests, suggesting its potential use as a rapid diagnostic method for KHV. This is the first epidemiological study of KHV infection in cultured common carp and koi in Taiwan.     

Koi herpesvirus and carp oedema virus: Infections and coinfections during mortality events of wild common carp in the United States

Koi herpesvirus (KHV; cyprinid herpesvirus‐3) and carp oedema virus (CEV) are important viruses of common and koi carp (Cyprinus carpio); however, the distribution of these viruses in wild common carp in North America is largely unknown. During the summers of 2017 and 2018, 27 mass mortalities of common carp were reported from four states in the USA (Minnesota, Iowa, Pennsylvania and Wisconsin), the majority of which were distributed across eight major watersheds in southern Minnesota. Samples from 22 of these mortality events and from five clinically healthy nearby carp populations were screened for KHV, CEV and SVCV using real‐time polymerase chain reaction (qPCR). KHV was confirmed in 13 mortality events, CEV in two mortality events and coinfections of KHV/CEV in four mortality events. Nucleotide sequence analysis revealed that the KHV and CEV detected here are closely related to European lineages of these viruses. While molecular detection alone cannot conclusively link either virus with disease, the cases described here expand the known range of two important viruses. This is also the first reported detection of KHV and CEV coinfections in wild carp populations.     

水晶彩鲫、红鲫和锦鲤的腹膜脏层黑色素观察

对水晶彩鲫(Carassius auratus transparent coloredvar.)、红鲫(C.a.redvar.)和锦鲤(Cyprinus carpio ornamentalvar.)腹膜脏层黑色素进行肉眼观察和密度分布统计。结果表明,这3种鱼的不同体色个体,腹膜脏层黑色素的密度不同。依据黑色素的密度,将其分为Ⅰ~Ⅵ级。水晶彩鲫的腹膜脏层黑色素密度:肉白a个体为Ⅰ级(无黑色素分布),肉白b和红白个体多数在Ⅰ~Ⅱ级,红色个体多数在Ⅰ~Ⅳ级,杂色个体多数在Ⅳ~Ⅵ级,密度表现出依次递增的趋势。红鲫的腹膜脏层黑色素密度:白色个体分布在Ⅲ级,红白个体分布在Ⅲ~Ⅳ级,红色个体分布在Ⅲ~Ⅴ级,杂色分布在Ⅳ~Ⅵ级,青灰色分布在Ⅴ~Ⅵ级,密度依次也表现出递增的趋势。锦鲤的腹膜脏层黑色素密度:体表没有黑色斑纹的红、黄、白、红白和黄白等个体为Ⅰ级,无黑色素分布;体表有黑色斑纹的红黑、黄黑、白黑和红白黑等个体多数有黑色素出现,主要分布在Ⅳ级。[中国水产科学,2007,14(1):144-148]     

海水网箱养殖许氏平鲉细菌性疾病病原鉴定及致病性研究

2019年8月,大连市金州区大李家街道海域海水网箱养殖许氏平鲉(Sebastes schlegeli)暴发严重的皮肤溃疡性疾病。以其为研究对象,从体表病灶、肝脏和肾脏上进行细菌分离,得到1株优势菌株BN-1910。为了验证网箱养殖许氏平鲉死亡是否由该菌株引起,采取腹腔注射的方式进行该菌株回感,以确定该菌株的致病力。在对菌株进行生理生化检验和形态学观察后,可以初步判断菌株为哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)。基于16S rRNA基因序列构建的分子系统发生树表明,哈维氏弧菌(MT864681.1)和该菌株在系统发育树中聚为一支,99%置信水平。研究结果显示,菌株BN-1910为哈维氏弧菌(V.harveyi),对许氏平鲉10 d的LD50为7.98×10^3 CFU/mL;对14种药物的敏感试验证实,菌株BN-1910对氟哌酸、链霉素和左氧氟沙星敏感。     

天津地区网箱养鲤主要鱼病调查

天津地区网箱养鲤常见鱼病17种,其中危害大、造成损失重的4种:烂鳃病、三代虫病、鲤鱼出血性败血病、野鲤碘泡虫病。本文分析了网箱中鱼病发生的特点。     

网箱养鲤烂鳃病防治技术

水库网箱养鲤烂鳃病极易发生 ,危害严重。笔者对龙屯水库网箱养鲤烂鳃病的防治技术进行了探讨 ,已收到较好效果。1　病因　细菌性烂鳃病是柱状屈桡杆菌 (Ｆｌｅｅｘ ｉｂａｖｔｅｒｃａｌｘｍｎａｒｉｓ)引起的鱼病。由于饲料原料来源不一 ,有时保管不善 ,饲料质量得不到保证。饲料中的维生素矿物质添加不足。水库管理不当 ,饲养初期投料不足 ,鱼体质弱 ,抗病力差。又由于水库多年施化肥养鱼 ,水质被污染 ,鱼体免疫力低下 ,易感烂鳃病。2　发病症状　 1998年 7月 19日水温 2 7～ 2 8℃ ,龙屯水库网箱鲤鱼发生烂鳃病。病情来势凶猛 ,传播迅速…     

日本锦鲤并发症的防治实例

2005年9月笔者接诊一例日本锦鲤病害,通过对病鱼的诊断、现场调查和分析,为鱼鲺、烂鳃和疖疮并发病,在采取综合防治技术措施后,未造成重大损失,取得了良好的效果.现把诊治情况介绍如下,供同行参考.     

网箱养殖镜鲤烂鳃病防治试验

镜鲤Ｍｉｒｒｏｎｃａｒｐ即通称的散鳞镜鲤 ,系上年引进品种。镜鲤体表被鳞 ,属散鳞型 ,看上去鳞片稀少 ,给人一种无鳞的感受 ,是当年我国北方地区养殖对象之一 ,因其肉质坚实 ,杀之生食简便快捷 ,近年来倍受韩国等国家食客的青睐 ,常年有 10 0 0克 /尾及超过 10 0 0克 /尾的商品鱼活运至韩国等国家和地区 ,是当地居民食生鱼片的货源之一。镜鲤目前开展了网箱养殖 ,以供出口换汇 ,增加渔民收入。威海、烟台两市有的水库专门以网箱饲养 ,鱼种来源采取就地 (库 )自繁自育。镜鲤很少疾病 ,但 2 0 0 0年 7月上旬以来 ,网箱养殖的镜鲤突发了烂鳃…     

小浪底水库网箱养鱼指环虫病调查报告

对2004和2005年小浪底水库10数个网箱养殖区域指环虫病大规模流行情况进行了调查。共跟踪调查鱼病30余例,其中现场调查10余例,诊断养殖户病鱼20余例。对网箱指环虫病预防、治疗过程中存在的问题进行了分析,并提出了有效解决办法。