O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法的建立

本研究建立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法,确立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法检测O型口蹄疫血清阴阳性判定标准：抗体效价大于或等于1：32时判为O型口蹄疫抗体阳性;1：16～1：32时判为O型口蹄疫抗体可疑。检测131份阴性血清、口蹄疫亚洲1型阳性血清和A型阳性血清,固相竞争ELISA方法和液相阻断ELISA方法的特异性分别是95．5％,84．7％。固相竞争ELISA方法检测口蹄疫亚洲1型、口蹄疫A型阳性血清时,无交叉反应,O型口蹄疫病毒感染牛、免疫牛和感染猪血清的阳性检出率均为100％,免疫猪检出率为86．7％。     

口蹄疫病毒A型竞争ELISA抗体检测试剂盒在流行病学调查中的应用

为评价口蹄疫病毒A型竞争ELISA(cELISA)抗体检测试剂盒在流行病学调查中的应用前景,对2017年从福建省三明市采集的336份黄牛、奶牛、羊和猪血清样品,用A型cELISA抗体检测试剂盒进行抗体检测。结果显示,92份黄牛血清、92份羊血清、92份猪血清、60份奶牛血清的A型抗体阳性率分别为13.04%、11.96%、20.65%、86.67%。从上述4种血清中,各挑选10份血清(阴性、阳性各5份)共40份,采用口蹄疫病毒液相阻断ELISA(LPB-ELISA)抗体检测试剂盒进行验证。结果显示:cELISA检测为阳性的20份血清中,用LPB-ELISA检出阳性19份;cELISA检测为阴性的20份血清中,用LPB-ELISA检出阴性17份;两种方法的κ值为0.8,总符合率为90.00%。结果表明,A型cELISA试剂盒与LPB-ELISA试剂盒的符合率和一致性均较高,可用于口蹄疫流行病学调查和血清学监测。     

口蹄疫O型固相竞争ELISA抗体检测试剂盒的临床应用

用口蹄疫O型固相竞争ELISA检测血清1 150份,口蹄疫O型免疫血清820份,敏感性为91.83%;试剂盒特异性评价检测血清180份,其特异性为89.4%;固相竞争ELISA和液相阻断ELISA共同检测血清100份,其相关性分析为0.964 1,R2为0.929 5,属于高度相关。3批试剂盒检测血清样品50份,检测结果差异不显著,口蹄疫O型固相竞争ELISA抗体检测试剂盒检测结果比较稳定,具有良好的批间可重复性和稳定性。     

口蹄疫病毒抗体SPC-ELISA定性检测与LPB-ELISA定量检测方法的比较

为评估固相竞争ELISA（SPC-ELISA）定性检测与液相阻断ELISA（LPB-ELISA）定量检测口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus，FMDV）抗体的符合度和一致性，以2022年春季从规模猪场、牛场、羊场采集的300份血液样本为试验对象，分别应用SPC-ELISA定性和LPB-ELISA定量检测方法进行O、A型FMDV抗体检测，对检测结果应用统计软件GraphPad Prism 8中的χ2检验进行差异显著性统计与分析，采用Kappa统计量分析两种ELISA检测方法的一致性。结果显示：SPC-ELISA检测两种抗体的阳性率总体均略高于LPB-ELISA，但差异不显著（P＞0.05）。两种方法检测O型FMDV抗体总符合率为94.81%，Kappa值为0.8；检测A型FMDV抗体总符合率为91.48%，Kappa值为0.7。结果表明，两种方法检测结果符合度高，且高度一致。因此，在FMDV抗体检测时可根据实际需要任意选择其中一种使用。本研究为技术人员在实际工作中科学选择检测方法提供了参考。     

竞争ELISA检测猪呼吸与繁殖综合征病毒抗体研究

应用抗PRRSN蛋的单克隆抗体建立了竞争ELISA检测技术,与美国IDEXX公司的间接ELISA检测试剂盒对比检测了30份SPF猪血清,29头SPF猪人工接种呼吸与繁殖综合征病毒后于5d、12d、29d采集的猪血清共87份,临床血清95份,以及其他相关病毒的阳性血清。实验证明,竞争ELISA的检测阴阳性限值为30%,检测特异性为100%,在人工攻PRRSV病毒第五天的猪血清中,可检测到抗PRRSVN蛋白抗体,12dpi,阳性检出率为93%,29dpi,阳性检出率为100%,与IDEXXPRRSVELISA试剂盒进行比对,结果表明,二种检测方法检测美洲株PRRSV抗体的符合率为90%以上,但检测欧洲株抗体符合率较低。建立的竞争ELISA检测技术对于PRRSV美洲株抗体的早期诊断有非常重要的意义。     

两种O型口蹄疫ELISA检测试剂盒的对比

为比较哪种ELISA试剂盒能够更准确、简便、快捷地检测出口蹄疫病毒抗体,本研究使用液相阻断酶联免疫吸附试验(LB-ELISA)试剂盒和固相竞争酶联免疫吸附试验(SPC-ELISA)试剂盒,对2014年广西各市县动物疫病预防控制中心送检的已免疫过口蹄疫疫苗的猪、牛、羊血清共计1121份进行了检测,对比两种试剂盒的特异性、敏感性、阳性检出率及符合率。检测结果表明,两种口蹄疫ELISA试剂盒的阳性检出率不同,LB-ELISA的阳性检出率比SPC-ELISA高2.4%;LB-ELISA试剂盒对血清抗体滴度水平的要求相比SPC-ELISA试剂盒要低,因此LB-ELISA试剂盒更适合于口蹄疫病毒感染的检测。     

猪口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法的建立

根据猪口蹄疫O型流行毒株VP1序列设计出5条合成肽,以固相法合成并以此合成肽作为包被抗原建立猪口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法,并对该方法敏感性、特异性、重复性等进行验证。结果表明:该检测方法敏感性为96.0%,特异性为99.1%,批内与批间重复试验变异系数小于10.0%。比对试验结果显示,该检测方法与UBI猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒符合率为93.2%,与中国农业科学院兰州兽医研究所口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒符合率为85.7%。该猪口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法敏感性好、特异性强、稳定性高、操作简便,可用于检测O型口蹄疫抗体水平。     

应用固相竞争ELISA、液相阻断ELISA和中和试验检测口蹄疫抗体的比较研究

为了评价建立的口蹄疫固相竞争酶联免疫吸附试验(solid phase competition ELISA,SPC-ELISA)方法与传统的中和试验(VNT)和液相阻断酶联免疫吸附试验(liquid phase block ELISA,LPB-ELISA)检测方法之间的关系,本研究对野外采集的不同种类的猪、牛和牦牛共94份血清样品分别进行O型口蹄疫病毒SPC-ELISA、LPB-ELISA和VNT检测,并分别比较3种方法的符合率和阳性检出率。结果表明,建立的O型口蹄疫病毒SPC-ELISA方法与VNT 具有很好的符合率,达88.3%,其中,猪和牦牛血清符合率高达90%和89.5%,阳性检出率为91.2%比LPB-ELISA更符合VNT,因此建立的SPC-ELISA方法比LPB-ELISA方法更符合VNT。     

不同ELISA试剂盒评价口蹄疫O型、A型二价灭活苗免疫效果对比

为对比不同ELISA试剂盒评价口蹄疫O型、A型二价灭活苗免疫效果的差异,选取市面上3种不同厂家生产的口蹄疫ELISA检测试剂盒,同时检测3个免疫不同口蹄疫O型、A型二价灭活苗羊场的抗体水平。结果显示：3种试剂盒检测不同场口蹄疫O型抗体合格率均在70%以上,符合率为72.41%~100%;S2试剂盒检测3个场的A型抗体合格率均高于70%,S1和S3试剂盒各有2个场的合格率低于70%,且3种试剂盒符合率较低,为48.28%~68.97%。结果表明,不同ELISA试剂盒评价口蹄疫免疫效果存在一定差异,其中检测A型抗体试剂盒差异显著（P＜0.05）;3种ELISA试剂盒均可用于口蹄疫O型抗体检测,但并不全适合于A型抗体检测。本试验为相关实验室选择合适试剂盒提供了依据。     

单抗竞争ELISA检测猪沙门氏菌感染方法的建立与应用

以猪霍乱沙门氏菌作为包被抗原 ,利用沙门氏菌O7单克隆抗体酶结合物建立了竞争ELISA方法检测猪霍乱沙门氏菌抗体。经过研究确定抗原包被浓度为 2×1 0 8CFU/ml,血清检测稀释度为 1∶1 6,酶标抗体浓度为 1∶70 0 ,包被液为碳酸盐缓冲液 ( 0 .0 5MpH9.6)。应用单抗竞争ELISA和平板凝集试验 (PAT)同时对 5 0 6份血清进行猪霍乱抗体检测 ,PAT的检出率为 3 .60 % ,ELISA检出率为 5 .75 % ,两者符合率达 96.4%。试验结果表明 ,ELISA方法敏感性高 ,特异性强 ,稳定性和重复性好 ,操作简便。本方法的建立在猪群沙门氏菌感染的检疫、实验室诊断的标准化及流行病学调查方面具有应用价值。     

ELISA和LAT检测猪血清弓形虫抗体的比较

应用弓形虫重组蛋白rMIC3为抗原建立的酶联免疫吸附试验(ELISA)和乳胶凝集试验(LAT)2种方法,平行检测来自36个猪场的471份猪血清中的抗弓形虫特异性抗体。结果显示,ELISA和LAT对母猪弓形虫抗体的阳性检出率分别为42.86%(21/49)和44.90%(22/49),2种方法的阳性检出符合率为95.45%(21/22);对育肥猪的阳性检出率分别为42.06%(135/321)和43.61%(140/321),2种方法的阳性检出符合率为93.57%(131/140);对仔猪的阳性检出率分别为29.07%(30/101)和45.54%(46/101),2种方法的阳性检出符合率为63.04%(29/46)。结果表明,ELISA和LAT可用于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,LAT更适合于仔猪弓形虫病的检测。     

猪水肿毒素单抗竞争ELISA试剂盒的研制及应用

本研究旨在建立猪水肿毒素抗体的快速检测方法.以纯化的猪水肿毒素A亚基基因片段的原核表达产物作为抗原免疫BALB/c小鼠制备单抗,并利用表达蛋白和猪水肿毒素A亚基单抗酶结合物建立了竞争ELISA方法检测猪水肿毒索抗体.经过研究确定抗原包被浓度为0.32 btg·mL-1,待检血清最佳稀释度为1:2,酶标单抗工作浓度为1:3 200,血清抑制率大于40 %为阳性.应用单抗竞争ELISA和细胞毒性中和试验同时对60份血清进行猪水肿毒素抗体检测,竞争ELISA的检出率为33.8%,细胞毒性中和试验检出率为30.9%,两者符合率达88.2 %.试验结果表明,该ELISA方法特异性强,敏感性高,稳定性和重复性好,操作简便.本方法的建立在实验室诊断的标准化、猪水肿病疫苗免疫效果的评价及流行病学调查方面具有较高的应用价值.     

一致性检验比较牛口蹄疫病毒抗体LBE检测试剂盒

用660份牛血清比较牛口蹄疫病毒O型、A型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒检测结果的一致性,并用u检验排除抽样误差的影响。结果表明:待检血清最终稀释度数为1∶64时O型试剂盒联合检出523份口蹄疫抗体阳性和102份阴性,符合率为94.70%,结果一致性为极强(Kappa值=0.82);待检血清最终稀释度数为1∶128时O型试剂盒联合检出476份口蹄疫抗体阳性和125份阴性,符合率91.06%,结果为高度一致(Kappa值=0.75);血清最终稀释度数为164时A型试剂盒联合检出498份口蹄疫抗体阳性和120份阴性,符合率为93.64%,结果一致性为极强(Kappa值=0.81),血清最终稀释度数为1∶28时A型试剂盒联合检出354份口蹄疫抗体阳性和233份阴性,符合率为88.94%,结果为高度一致(Kappa值=0.77)。在不同包被方式下,LBE试剂盒检测待检血清牛口蹄疫病毒抗体结果一致性较好。兽医实验室可应用一致性检验,结合本单位人力、财力和物力等条件,选择适宜的牛口蹄疫病毒抗体检测试剂盒。     

间接ELISA和HI方法检测禽流感病毒抗体的相关性试验

分别采用商品化的酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测试剂盒和血凝抑制(HI)试验方法对153份血清样本进行禽流感病毒(AIV)的H5抗体检测,比较间接ELISA和HI两种方法检测结果的相关性。研究结果表明,间接ELISA和HI两种方法呈较好的相关性,二者间的相关系数为0.765。间接ELISA和HI两种方法检测AIV抗体的阳性符合率为95.8%,阴性符合率为87.2%,总体符合率为96.7%。间接ELISA方法是一种敏感、特异和快速的血清学诊断方法,可以用于临床样本的大规模检测。     

猪乙型脑炎间接ELISA与血凝抑制试验方法的比较

用血凝抑制试验和间接ELISA两种方法检测乙脑阳性血清均呈阳性反应,检测乙脑阴性血清均呈阴性反应。用间接ELISA对来自9个猪场74份送检血清进行了猪乙脑病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）抗体检测,并与血凝抑制试验（HI）进行对比,两种方法检测总符合率为85.1%(63/74),经统计分析,检测结果差异不显著(P＞0.05)。对来自无猪乙脑病猪场24头健康猪的血清进行检测,两种方法结果均为阴性,符合率为100%。对10份阳性血清进行检测,ELISA检测效价较HI效价高,表明ELISA比HI敏感。结果表明,ELISA与HI检测结果相符,前者更适用于猪血清中乙脑IgG抗体的大规模检测。     

应用IHA与竞争ELISA方法检测猪瘟免疫抗体的比较与分析

通过对300份猪血清样品应用正向间接血凝试验(IHA)与酶联免疫吸附试验(竞争ELISA)方法进行猪瘟免疫抗体检测。采用IHA方法,以抗体效价≥2~5为合格标准时,其抗体合格率为95.3%;采用竞争ELISA方法,以阻断率≤50%为阳性标准时,其抗体阳性率为93.6%,两种检测方法总体一致符合率93.0%,经X~2检验,两者差异不显著,说明IHA方法和竞争ELISA方法皆可用于检测猪瘟免疫抗体水平。     

比较3种间接ELISA试验检测口蹄疫感染抗体的研究

将3种检测口蹄疫非结构蛋白抗体的间接ELISA试验进行了比较。这3种间接ELISA试验检测田间血清样品的最低符合率为96％，最高符合率达98％：有2种间接ELISA试验可以检测到感染口蹄疫第10天后血清中的口蹄疫感染抗体．有1种间接ELISA试验可以检测到感染口蹄疫第14天后血清中的口蹄疫感染抗体；这3种间接ELISA试验检测12份已知口蹄疫阳性血清的试验结果吻合。研究表明．这3种间接ELISA试验方法对于检测口蹄疫感染抗体具有较好的特异性．其中猪口蹄疫3A蛋白间接ELISA诊断试剂盒在灵敏性、特异性和符合率方面更优于另外2种试剂盒。     

两种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体ELISA检测方法的比较

对常用的兰州兽医研究所和北京世纪元亨生产的两种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体的ELISA检测方法,在检测猪血清抗体时的敏感性进行比较,以期获得可应用于口蹄疫检疫的最佳试剂盒。采用上述两种阻断ELISA试剂盒对170份猪血清样品进行ELISA检测。结果表明,两种试剂盒的阳性检出率相差不大,阳性检出率分别为5. 29%和5. 88%。本试验表明:兰州兽医研究所和北京世纪元亨生产的口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体检测试剂盒检测结果差异不大,均可应用于口蹄疫血清学筛选性试验。     

不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响

为研究不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响,通过原核表达获取猪瘟病毒重组E2蛋白、E0蛋白、C蛋白和NS5B蛋白,大小分别约为35 kD、42 kD、16 kD和80 kD。经Ni-NTA亲和层析柱纯化并利用BandScan软件进行计算,纯度均在90%以上,满足ELISA检测包被用原料纯度的要求。将上述4种蛋白作为包被抗原进行ELISA,以10份企业阳性质控品血清和10份企业阴性质控品血清为检验指标比较不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响。结果以E2蛋白为原料的包被板检测质控血清时,灵敏度和特异性均达到80%以上,能够满足猪瘟病毒抗体ELISA检测的要求,故选择E2蛋白作为包被抗原并进行相关检测试剂的研制。用研制的试剂与国际知名度高、产品质量好的美国IDEXX同类试剂对432份临床猪血清进行符合性检测,结果与美国IDEXX试剂的阳性符合率为95.53%,阴性符合率为86.56%,总符合率为91.67%,两种试剂检测结果具有较高的一致性。试验表明,用E2蛋白为包被抗原对猪瘟病毒抗体进行ELISA检测的效果最好,制备的检测试剂可用于临床猪瘟病毒血清抗体的检测,为今后猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂的进一步研制奠定了基础。     

小反刍兽疫病毒竞争ELISA检测试剂盒生产工艺研究

为研究小反刍兽疫病毒（PPRV）竞争ELISA试剂盒的生产工艺,本试验利用昆虫细胞表达的PPRV核蛋白及其单克隆抗体,建立一种特异性高、敏感性强的PPRV竞争ELISA检测方法,并对该方法的各个步骤进行优化,确定该方法的最适条件,从而确定竞争ELISA的操作程序。并用该方法与OIE推荐的PPRV rC-ELISA抗体检测试剂盒同时检测来自西藏、内蒙古共977份临床羊、牛血清样本,结果显示特异性、敏感性、符合率分别达99.89%、93.82%、99.38%。本研究建立的PPRV竞争ELISA方法为该病毒检测试剂盒的研制奠定技术基础,为小反刍兽疫的防控提供科学依据。