单克隆抗体应用于ELISA诊断猪弓形虫病的研究

本文应用抗弓形虫单克隆抗体ELISA对猪弓形虫病感染进行现场调查研究。用一般ELISA的间接法、双单抗夹心法、单抗及第二抗体夹心法分别检测Ab、Cag及CIC。杭州地区一般屠宰猪血清阳性检出率分别为52.79%、0%及8.22%;有弓形虫病流行史的某种猪场母猪血清的阳性检出率分别达84.51%、32.65%及68.39%,三者均明显高于屠宰猪。14头疑似弓形虫病猪血清的阳性检出率分别为6/14、10/14及12/14,Cag或和CIC阳性率合计为14/14。初步认为应用ELISA间接法检测Ab可作为猪弓形虫感染血清流行病学检查;应用McAb ELISA夹心法检测CAg及CIC具有早期诊断猪弓形虫病的价值,并可作为历史流行点猪弓形虫病是否存在近期流行或尚有活动性感染及暴发性流行的监测方法。     

三种血清学方法检测弓形体抗体的比较

对IHA、IFA及ELISA三种方法检测弓形体抗体作了比较。感染兔血清首次检出抗体时间及阳性兔数:IHA为感染后第5天(1/15)、IFA为第6天(1/15)、ELISA为第4天(8/15);达全阳性时间分别为感染后第13、15及6天,GMT分别为4693、1301及8192。对照兔血清的假阳性率均为1.42％。三法检测猪血清的阳性率分别为42.0、41.0及44.0％。结果表明,三法均具有高度的敏感性和较高的特异性,其中以ELISA法最为灵敏,IHA法操作简便,两法均适用于现场血清学调查。     

双抗体夹心ABC-ELISA检测弓形虫循环抗原方法的建立

为检测弓形虫循环抗原,以实现弓形虫急性感染的早期诊断,本研究建立了基于ABC(avidin biotin-peroxidase complex)放大系统的双抗体夹心ELISA方法。通过制备弓形虫排泄分泌抗原(ESA)并免疫动物,经3种抗原的筛选以获得抗循环抗原(CAg)的单抗,以方阵滴定法确定最佳多抗包被浓度和单抗工作浓度,利用夹心法和ABC放大系统建立检测弓形虫循环抗原的夹心ABC-ELISA方法,用该方法对人工感染犬血清和其他阳性血清样本进行检测以确定该方法的检出时间和准确性,并应用于临床样品的检测。结果:获得了3株针对不同抗原表位的单克隆抗体,并对CAg有较高特异性。双抗体夹心ABC-ELISA反应条件:兔多抗包被浓度为3.7μg/mL,生物素标记3A5、3E5和10F5-3单抗在混合工作液中的浓度分别为0.1、0.13和0.12μg/mL。该ELISA方法对ESA最低检测限为11.9 ng/mL,并与隐孢子虫早期感染牛血清、血吸虫尾蚴早期感染牛血清、艾美耳球虫早期感染鸡血清、犬瘟热急性感染早期血清、犬细小病毒急性感染血清无交叉反应。用该ELISA方法检测人工感染的犬,于感染后2 d血清即显示阳性,该方法能明显区分标准阳性血清和阴性血清。用该方法检测68份猪临床血样(其中包括2份标准阳性血清),检测结果与Nest-PCR结果一致。表明该双抗体夹心ABC-ELISA方法特异性强、敏感性高,可用于弓形虫急性感染的早期或活动期的诊断。     

鹅细小病毒单抗双夹心ELISA检测方法的建立

为建立鹅细小病毒(GPV)检测方法,本研究以兔抗GPV IgG为捕获抗体,抗GPV单克隆抗体为检测抗体,通过方阵试验确定了兔抗GPV IgG最适包被浓度为16 mg/L,抗GPV单克隆抗体最佳工作浓度为10.8 mg/L,酶标二抗最佳稀释倍数为1∶4 000,建立了检测GPV单抗双夹心ELISA方法,对GPV检测灵敏度达0.312 mg/L.用该法对延边某养鹅场疑似发生小鹅瘟病的252只病死鹅进行检测,结果阳性率为75.79%,与病毒中和试验方法的检测结果符合率迭91.11%.本研究建立的单抗双夹心ELISA方法为GPV的检测和区城流行病学调查提供了一种简便快速的血清学诊断方法.     

应用BA-Dot-ELISA快速检验旋毛虫病的研究

以旋毛虫肌幼虫层析抗原及国产 BA 试剂建立了快速检验旋毛虫病的 BA-Dot-ELISA。本法采用全血、眼观判定.应用预先制成快诊膜,可在1小时内报告检验结果.BA-Dot-ELISA 检出人工感染猪血清抗体的时间(人工感染后第4天)早于 Dot-ELISA(感染后第7天)和PPA-ELISA(感染后第10天)、与猪囊虫、猪弓形体、猪瘟不发生交叉反应.初步证实了本法具有简、快、敏、特等优点,有助于低水平血清抗体旋毛虫病猪的检测,尤其适合于早期诊断,宰前检查和流行病学调查.     

猪弓形体病的血清学调查

采用间接血凝试验(IHA)对广东省部分地区猪场送检的269份血清进行猪弓形体病的血清学检测,结果表明有61份血清阳性,平均阳性率为22.7%,最高阳性率为71.4%,该地区猪场有猪弓形体病感染。     

单克隆和多克隆双抗体夹心斑点酶联法检测兔瘟病毒的研究

本文建立的酶标双抗体夹心斑点酶联法检测兔瘟病毒的主要步骤为,以单抗包被,加入待测抗原,再加多克隆兔抗兔瘟病毒血清,最后加酶标羊抗兔抗体示踪。由于本法操作简便、试剂用量小、肉眼可观察结果、无需特殊仪器,故对兔瘟的诊断具有较大的实用价值。     

应用间接ELISA检测鸡病毒性关节炎抗体的研究

用本试验建立的抗鸡病毒性关节炎(AVA)抗体的间接 ELISA 方法检测了实验感染 AVA 病毒(AVAV)的鸡血清、自然感染鸡血清及 IBD,ND 和 MD 病鸡血清,证明其具有较高特异性.通过对鸡实验感染 AVAV 后不同时期的检测表明.间接 ELISA 可在感染后6天检出血清特异性抗体,且不同时期检出率均高于 AGID 法,并可在2小时内报告试验结果.适用于 AVAV 抗体的常规检测.用该法对来自南京、海宁、长春等地鸡场的162份血清进行检测,阳性率为10.5%.     

应用间接ELISA诊断兔轮状病毒性腹泻

应用间接 ELISA 检查10例兔轮状病毒感染兔的血清,感染后10天开始出现阳性反应,21天全部阳转.对巴氏杆菌病、波氏菌病、葡萄球菌病、病毒性出血症患兔的血清进行了排除检验。检查27例健康兔血清,ELISA 试验均为阴性。利用间接 ELISA 检查了644份兔血清,群养兔的阳性率达59.2%左右,散养兔为7.6%左右。本法具有特异性强、敏感性高、重复性好、简便、快速的优点。生产实践中有很大的应用价值。     

张家口坝上地区鸡兔弓形虫病流行病学调查

为摸清张家口坝上地区鸡、兔弓形虫病的感染情况,采用间接血凝试验(IHA)对张家口坝上地区散养鸡、笼养鸡、家兔、兔场兔的745份血清进行弓形虫血清学检测。结果表明,散养鸡阳性率6.6%(24/364);笼养鸡阳性率0%(0/120);家兔阳性率12.5%(22/175);兔场兔阳性率2.3%(2/86)。其中阳性散养鸡血清抗体滴度分布在1:256有25%(6/24),阳性家兔血清抗体滴度分布在1:256有9.1%(2/22)。     

林芝市两区县藏猪流行性腹泻血清学调查

为了解西藏市猪流行性腹泻(PED)流行病学情况,采用双抗原夹心酶联免疫法(ELISA)对采集的林芝市巴宜区和米林县364份藏猪血清进行检测。结果表明:藏猪的PEDV抗体平均阳性率为39.56%,其中公猪血清抗体阳性率为40.63%,母猪血清抗体阳性率为38.37%。从性别上公猪和母猪的抗体阳性率无显著性差异(P>0.05),但巴宜区(26.37%)和米林县(52.74%)PEDV抗体阳性率存在显著性差异(P<0.05)。说明林芝部分地区藏猪流行性腹泻感染普遍,应注意防止该病的发生。     

应用单抗间接ELISA检测兔出血症病毒的研究

建立了用于检测脏器组织中兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）抗原的单抗间接ＥＬＩＳＡ法，并与血凝试验（ＨＡＴ）和多克降双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法进行比较，在被检的７８９份样品中，种方法检测结果皆为阴性的有５５１份，皆为阳性者１７３份；单抗间接ＥＬＩＳＡ和多克隆双体夹心ＥＬＩＳＡ均为阳性者３１份；公多克隆双抗体夹心ＥＬＩＳ为阳性者３１份；仅ＨＡＴ为阳性者２份；仅单抗间接ＥＬＩＳＡ为阳性者１份。实验结果证实，单抗间接     

上海浦东地区犬弓形虫病流行情况调查

目的了解上海浦东地区犬弓形虫病流行情况。方法对上海浦东地区城市犬血清样本150份、农村犬血清样本85份和养狗场犬血清8份用间接血凝试验进行了弓形体抗体检测。结果城市犬阳性率为5.3%(8/150),农村犬阳性率为5.9%(5/85),养狗场犬未检出阳性。结论农村犬和城市犬均存在HEV感染,农村犬感染比率略高于城市犬。     

福建省家兔主要养殖地区弓形虫病的血清学调查

为摸清福建省家兔主要养殖地区弓形虫病的感染情况,采用间接血凝试验(IHA)对福建4个地区大型兔场、散养农户兔场的690份血清进行弓形虫病血清学检测.被检血清抗体滴度大于或等于1∶64判为阳性.结果表明:福建省4个主要养殖地区兔场弓形虫病阳性率9.71％(67/690)；其中,大型兔场阳性率1.73％(8/462),散养农户兔场阳性率25.88％(59/228).     

黑龙江省部分地区进口荷斯坦奶牛病毒性腹泻血清流行病学调查

为了解黑龙江省进口荷斯坦奶牛感染牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的情况,试验采用原核表达蛋白E0-E2为抗原,建立间接ELISA法,检测奶牛血清中BVDV的抗体。结果表明:九三地区的BVDV抗体阳性率最高,达到了72.22%;密山地区阳性率最低,但也达到了59.91%;北安地区阳性率为61.84%,总体血清阳性率为64.35%。说明病毒性腹泻在黑龙江省存在非常高的血清阳性率,提示必须加强对本病的检疫净化,采用间接ELISA法对不同牛群进行BVDV抗体检测,可以及时了解病毒性腹泻的感染清况,为防治该病提供理论依据。     

新疆哈密地区畜禽弓形体病的调查

1988年,对哈密地区二县一市的37个乡部分畜禽,以间接血凝(IHA)试验进行了血清学调查。弓形体 IHA 抗原、阴、阳性血清:为中国农科院兰州兽医研究所诊断制剂组生产,抗原与阳性血清效价不低于1:1024。人血清1029份.检测方法:按中国农科院兰州兽医研究所弓形体制剂组的《弓形体病间接凝集试验操作细则》进行,被检血清抗体滴度达到1:64判为阳性.结果:受检血清的阳性数,羊为22/1505,猪为19/326,鸡为32/187,牛、马、骆驼血清均为阴性。应当指出,哈密市的受检羊、猪、鸡血清的阳性数多于巴里坤县和伊吾县。哈密地区流防所对当地人血清弓形体病的检出阳性数为:哈族16/305,维族9/365,汉族9/359.在以上抽检人中有牧民256人,阳性率为4.21%;学生(14～16岁)208人,阳性率为4.28%;职工324人,阳性率2.16%;农民226人,阳性率2.6%。     

四川部分猪场猪弓形体病的血清学调查

为了解四川部分猪场猪弓形体的感染情况,我们随机采集365份不同日龄猪的血样,分离血清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行抗体水平检测.结果表明,受检的365份血清样本,检出猪弓形体抗体165份,阳性率为45.21%,其中37日龄猪、60-70日龄猪、产仔母猪的阳性率分别为26.08%、26.67%、95.00%.表明猪场不同日龄的猪都有一定程度的弓形体感染.而母猪的感染率最高,养猪场应引起高度重视,以减少经济损失.     

新疆部分规模化羊场绵羊肺炎支原体血清学调查

为调查新疆部分地区规模化羊场绵羊肺炎支原体的感染情况,分别采用绵羊肺炎支原体(MO)、肺炎支原体(MP)双抗体夹心ELISA和间接ELISA检测具有呼吸道症状羔羊血清中的MO/MP抗原抗体,共检测5个地区5个规模化羊场67份发病羔羊血清。结果显示,5个不同地区羊场MO-Ag阳性率为26.66%~100%,MO-Ab阳性率为46.66%~100%,其中3个羊场MO-Ag阳性率为100%,湖羊、小尾寒羊的阳性率(75%~100%)远高于萨福克羊(26.66%);5个不同地区均存在MP感染,MP-Ag阳性率为0~29%,MP-Ab阳性率为19%~58.33%;75%的发病羔羊均存在MO和MP双重感染。调查结果表明,新疆地区规模化羊场普遍存在绵羊肺炎支原体感染,且呈高态势水平,应加强防控措施。本调查结果为新疆地区绵羊传染性胸膜肺炎的防控提供了血清流行病学数据。     

松江区家禽弓形虫感染的血清学调查

应用间接血凝试验(IHA)对松江区13个镇(街道)的禽类养殖户及3个规模养鸡场的580份禽类血清进行了弓形虫感染抗体检测,共检出抗体阳性血清91份,总抗体阳性率为15.69%(其中鸡抗体阳性率为10.03%、鸭抗体阳性率为26.54%、鸽抗体阳性率为5.0%)。结果表明,松江区禽类养殖场(户)均存在不同程度的弓形虫感染,且散养鸡的阳性率明显高于规模场鸡,散养鸭的阳性率明显高于散养鸡。     

家兔葡萄球菌病血清学诊断的研究 Ⅰ.琼脂糖免疫扩散试验

以琼脂糖免疫扩散法检测实验感染葡萄球菌的免,其血清沉淀抗体在感染后13～41天阳转;自然流行群中的兔血清,阳性率为41.5％,群养兔为17.40％,散养兔为10.20％。兔巴氏菌抗原、波氏菌抗原、链球菌抗原对葡萄球菌感染兔血清沉淀抗体不发生交叉夏应。葡萄球菌抗原对巴氏菌高免兔血清、巴氏菌抗体阳性兔血清、波氏菌阳性兔血清及健康兔血清不发生反应。