铁皮石斛原球茎液体悬浮培养研究进展

铁皮石斛是我国传统的名贵中药,具有很高的药用价值。为了解决铁皮石斛组织培养中存在的组培苗生产成本高、移栽苗成活率低等问题,铁皮石斛原球茎悬浮培养的研究日益增多。从影响原球茎增殖和石斛多糖积累的因素及石斛多糖药理研究等方面阐述了关于铁皮石斛原球茎悬浮培养的研究概况。     

铁皮石斛原球茎多糖提取最佳工艺研究

对铁皮石斛悬浮培养原球茎多糖的提取、纯化条件进行优化研究,正交试验结果表明,提取的最佳工艺为80℃热水中浸提2 h,加水量20倍,提取3次,醇析时乙醇的浓度为80%。粗多糖脱蛋白时,氯仿/正丁醇(v/v)为1∶0.4,样品/氯仿 正丁醇(v/v)为1∶0.35,萃取时间采用5 min最佳。     

蔗糖对铁皮石斛原球茎生长与多糖积累的影响

在确定合适碳源的基础上,研究比较不同蔗糖浓度下铁皮石斛原球茎生长和多糖的积累情况.结果表明,在葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖4种碳源中,蔗糖和葡萄糖对原球茎生长和多糖积累的影响优于乳糖和果糖.在蔗糖浓度为30～60g/L时,浓度越高,原球茎生长受到抑制越大,而且生长周期延长,但多糖含量增加越快,多糖含量越高;当蔗糖浓度超过60g/L时,蔗糖表现出明显的抑制效应;适合多糖积累的蔗糖起始浓度为30 g/L时,有利于原球茎的生长,最大干重量为17.93g/L,多糖最高含量为208.7mg/g,培养40 d时,其产量为3 679.6 mg/L.     

铁皮石斛原球茎固体培养和液体悬浮培养动力学研究

为筛选适合铁皮石斛原球茎的最佳培养方式，采用固体培养和液体悬浮培养两种培养方式，并研究液体悬浮培养的营养消耗变化规律，同时考察了液体培养液中pH值和电导率的变化。结果表明：原球茎在固体培养条件下，培养60d后干重达到最大，为13．40g／L，多糖产量最大值为2412．5mg／L；在液体悬浮培养条件下，干重仅需要50d可达到17．64g／L，多糖产量最大值为3081．2mg／L。液体培养在生物量、多糖产量上均优于固体培养；原球茎生长与碳源、氮源和磷的消耗存在着密切关系，培养基电导率变化与原球茎的生物量积累呈线性关系。     

铁皮石斛原球茎富硒悬浮培养条件优化

通过对铁皮石斛原球茎富硒悬浮培养的生长指标及多糖、生物碱、总蛋白质、硒含量等指标进行评价,优化铁皮石斛富硒悬浮培养条件,为开发富硒铁皮石斛产品提供理论依据与物质基础.研究结果表明,优化的铁皮石斛原球茎富硒悬浮培养基为MS+2.0 mg·L-1 6-BA+0.50 mg·L-1 NAA+30 g·L-1蔗糖+0.05 m...     

几种因素对铁皮石斛原球茎生长和多糖积累的影响

通过探讨几种不同因素对铁皮石斛原球茎生长和多糖积累的影响,结果表明,MS、1/2MS、B5、N6和White培养基对原球茎的生长和多糖积累有不同的影响;其中,1/2MS和N6培养基适合原球茎生长和多糖积累.当氮源浓度为30～60mmol/L、NO3-/NH4 分子比为40∶20、30∶30时,有利于原球茎生长和多糖积累.通过二次回归正交组合设计,优化拟合得到激素6-BA和NAA的正交回归模型;寻优定量结果表明,6-B A为1.25mg/L、NAA为0.52mg/L时,原球茎最大干重可达14.68g/L;当6-BA与NAA组合的最佳浓度配比为1.41mg/L、0 36mg/L时,原球茎最高多糖含量为274.2mg/g·DW.在以转速、接种量、pH 3因素4水平的L16(43)正交试验中,对原球茎生长影响最大的因子是pH,其次是转速,接种量影响最小;当初始培养液pH为7.0、摇床转速为110r/min、接种量为30g·FW/L时,适合原球茎生长.各因子对原球茎多糖积累的影响程度依次为转速、pH、接种量,当初始培养液pH为5.0、摇床转速为110r/min、接种量为50g·FW/L时,有利于多糖积累     

热水浸提法提取铁皮石斛原球茎多糖的工艺

利用正交试验对铁皮石斛原球茎多糖提取的工艺条件进行优化,考察料水质量比、浸提温度、浸提时间和浸提次数4个因素对铁皮石斛原球茎多糖得率的影响。结果表明,铁皮石斛原球茎多糖的最佳提取工艺为浸提次数4次,浸提时间3 h,料水质量比1∶60,浸提温度80℃,多糖得率为9.17%。在4个提取因素中,对铁皮石斛原球茎多糖提取影响最大的因素是浸提次数,其次是浸提时间,料水质量比和浸提温度影响都比较小,其中浸提次数不同水平间呈极显著差异,浸提时间、料水质量比和浸提温度对铁皮石斛原球茎多糖提取率影响不显著。     

外源一氧化氮对铁皮石斛原球茎生长和多糖积累的影响

以硝普钠（SNP）为一氧化氮（NO）供体,研究了不同浓度的外源NO对铁皮石斛原球茎生长、叶绿素含量、蔗糖合成酶（SS）活性和多糖积累的影响。结果总体表现为低浓度的SNP有利于铁皮石斛原球茎的生长,而高浓度的SNP可以促进多糖的合成。在添加0.50 mmol·L-1SNP的培养基中培养28 d时其干质量比对照高36.9％,总叶绿素含量在14 d时为对照的1.33倍;在添加1.00 mmol·L-1 SNP的培养基中培养7 d时其多糖含量为对照的1.59倍,同时SS活性显著升高。综合多糖产量来看,0.50 mmol·L-1SNP效果最佳,在处理期间显著高于其他处理,且对其干质量、叶绿素含量、SS活性和多糖积累均有促进作用。添加NO清除剂（cPTIO）后,铁皮石斛原球茎的生长、SS活性和多糖合成受到抑制。     

铁皮石斛原球茎的增殖培养研究

为探索最适宜铁皮石斛原球茎增殖的固体培养基配方,以获得高质量的组培苗,为工厂化育苗提供技术支撑,在相同的实验室培养条件下,把同一阶段的原球茎接种于不同激素比的4种培养基中,培养周期为60 d,每隔15 d取样检测1次,对不同生长状况的试验结果进行分析研究.结果表明,在基本培养基1/2 MS中加入浓度为1.0 mg/L的6-BA、0.5 mg/L的NAA和浓度为20%的马铃薯提取液进行固体培养,铁皮石斛原球茎的增殖效果好.     

培养基渗透压对铁皮石斛原球茎生长和多糖含量的影响

以无菌铁皮石斛原球茎为材料,于培养液中分别添加不同浓度的甘露醇以调节其渗透压,研究不同甘露醇浓度对铁皮石斛原球茎生长及多糖含量的影响。结果表明:添加低浓度的甘露醇可促进铁皮石斛原球茎生长及增加多糖含量,添加高浓度的甘露醇能明显抑制铁皮石斛原球茎生长及降低多糖含量。在不同的培养时间,当甘露醇质量浓度为0~20g·L~(-1)时,原球茎活力、生长量、多糖含量和多糖产量总体呈上升趋势,当甘露醇质量浓度超过20g·L~(-1),原球茎活力、生长量、多糖含量和多糖产量呈下降趋势。培养后35d,各处理的原球茎干重、多糖含量和多糖产量均达最大值,且甘露醇质量浓度为20g·L~(-1)的处理其干重、多糖含量和多糖产量均高于对照和其他处理,分别为17.30g·L~(-1)、361.52mg·g~(-1)和6 255.38mg·L~(-1)。     

铁皮石斛类原球茎液体悬浮培养增殖体系构建

以铁皮石斛(Dendrobium officinale)类圆球茎为研究材料,系统地研究了影响其液体悬浮培养增殖的诸多因素,如不同质量浓度的MS基本培养基、NAA、蔗糖、椰乳以及培养基pH值和接种量,旨在构建铁皮石斛类圆球茎液体悬浮培养增殖体系。研究结果表明:在液体悬浮培养条件下,最有利于铁皮石斛类原球茎的生长增殖的培养基为1/2MS基本培养基中添加1.0 mg/L NAA,50 g/L椰乳,蔗糖30 g/L;接种量为40 g/L。     

铁皮石斛类原球茎增殖和分化的研究

通过单因素浓度试验和正交试验研究了5种金属离子、不同激素组合及不同天然附加物对铁皮石斛类原球茎增殖、分化的影响。试验结果表明,5种金属离子对类原球茎增殖影响的主次顺序为Mg2+(Fe2+(Ca2+(Mn2+(Zn2+,类原球茎增殖的最佳培养基为1/2MS+NAA 0.5mg/L+10%马铃薯汁+3%蔗糖(含Mg2+1.0 mmol/L、Ca2+2.0 mmol/L、Fe2+0.1mmol/L、Mn2+0.1mmol/L和Zn2+0.03 mmol/L)。培养基1/2MS+NAA 0.5mg/L+20%马铃薯汁+蔗糖20g/L+琼脂0.8g/L最适于铁皮石斛类原球茎的分化。     

铁皮石斛组培技术研究

[目的]为铁皮石斛的产业化发展提供依据。[方法]以铁皮石斛组培幼苗为试材,接种于不同培养基和培养条件下,培养60 d后分别取出全部小苗称重;组培苗移栽后统计成活率。[结果]4种不同基本培养基中,以N6对铁皮石斛幼苗的增殖效果最好,增产率达1619.0%,MS最差;以椰子汁为附加物时,对铁皮石斛苗的增殖促进作用最大,香蕉泥和马铃薯泥的增殖效果相近;日光灯照下的铁皮石斛苗较高,自然光照下培养的铁皮石斛苗粗壮,叶色浓绿,增殖率高。当苗高为(6.0±1.0)cm时,经1周炼苗后,洗净根部培养基移栽至石灰石碎石滤水层5 cm+锯末8 cm+活苔藓2 cm的基质,成活率在95%以上,植株生长良好。[结论]得到了优质、高效、低成本、规模化培育铁皮石斛组培苗的方法。     

微生物发酵法制备铁皮石斛多糖及抗氧化活性的研究

采用微生物发酵法提取铁皮石斛中的多糖,探讨料液比和pH对多糖提取率的影响,并评价多糖的体外抗氧化活性。2因素3水平正交法优化的铁皮石斛多糖提取,料液比为1∶90(g/mL),pH为5,在此条件下的多糖提取率为42.86%;探究微生物发酵铁皮石斛多糖对羟自由基和DPPH自由基的清除作用,结果显示,微生物发酵法制备的铁皮石斛粗多糖具有一定的抗氧化性,且自由基清除率在一定范围内随浓度增加而增强。     

磷限制培养中霍山石斛类原球茎增殖和多糖合成的动力学研究

[目的]研究在不同起始磷浓度中,霍山石斛类原球茎增殖、主要营养物质消耗和多糖积累的动力学特性。[方法]以霍山石斛类原球茎为试材,将类原球茎分别接种于含有不同磷浓度的改良MS液体培养基中进行悬浮培养,30d后收获称重,测定类原球茎的多糖含量和培养基中总糖和磷酸根离子含量,并建立原球茎增殖和多糖合成模型。[结果]类原球茎在不合磷的培养基中生长受抑制,生物量、细胞生长速率随磷酸盐浓度的增大而增大;不同磷浓度下,多糖产率随类原球茎的生长而增加;随着磷浓度的增大,胞外各种营养成分的吸收利用速率提高。细胞的比生长速率与磷浓度的关系符合Monod方程,最大比生长速率为0．032d^-1。[结论]磷是霍山石斛原球茎增殖的限制性元素,类原球茎的生长与多糖的合成呈正相关。     

两种石斛多糖的抑菌作用研究

[目的]探讨铁皮石斛多糖和金耳石斛多糖在体外对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用。[方法]采用滤纸片抑菌圈法研究2种石斛多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用。[结果]铁皮石斛多糖对大肠杆菌抑制作用最强,最小抑菌浓度（MIC）为0.5%,抑菌圈直径为15.8 mm;金耳石斛多糖对枯草芽孢杆菌抑制作用最强,MIC为0.5%,抑菌圈直径为12.8 mm。[结论]体外条件下,铁皮石斛多糖对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌有抑制作用,但对金黄色葡萄球菌无抑制作用;金耳石斛多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌以及枯草芽孢杆菌均有抑制作用。     

铁皮石斛圆球茎增殖影响因素的研究

[目的]探讨培养基的不同组成对铁皮石斛圆球茎增殖的效果及影响,为提高其组培种苗的商业化生产效率提供技术参考。[方法]以无菌播种获得的铁皮石斛圆球茎为材料,对影响铁皮石斛圆球茎增殖的几种因素进行了研究。[结果]铁皮石斛圆球茎在1/2MS培养基中增殖效果较好;在1/2 MS＋NAA 0.5 mg/L培养基中加入BA 2.0 mg/L可促进铁皮石斛圆球茎增殖;培养基中加入天然物质有利于铁皮石斛圆球茎的增殖生长,以加入椰子汁100 ml/L为最佳。[结论]铁皮石斛圆球茎在1/2 MS＋NAA 0.5 mg/L＋BA 2.0mg/L＋椰子汁100 ml/L培养基上增殖效果最佳,增殖系数达到4.8。