非洲猪瘟病毒检测试剂盒的研制

针对非洲猪瘟病毒（ASFV）P54基因建立荧光PCR检测方法,通过优化引物、TaqMan探针浓度及反应温度,研发了ASFV检测的荧光PCR检测试剂盒。经灵敏度的重复性试验及3种不同型号荧光PCR仪使用验证,所研发的试剂盒灵敏度为101copy/μL,适用于不同型号荧光PCR仪使用,可用于对非洲猪瘟病毒的快速检测。     

非洲猪瘟病毒检测方法研究进展

文章对非洲猪瘟病毒的结构特征及各种检测方法的应用情况进行阐述,比较各种方法的优缺点和适用性,为非洲猪瘟的诊断及防控提供参考。     

2019—2021年浙江省兽医实验室非洲猪瘟检测能力比对

为了解兽医实验室非洲猪瘟病毒检测能力,2019—2021年,浙江省按年度分别组织了地（市）、县（市、区）级系统兽医实验室和116家生猪屠宰企业参加了非洲猪瘟检测能力系列比对工作。结果显示：兽医系统实验室2019—2021年样品正确率分别为100%、98.78%、98.90%,实验室正确率分别为100%、94.55%、96.00%。2019年屠宰企业检测室样品检测正确率为83.45%。系统内实验室整体正确率较高,但部分县区级实验室检测水平还有待提高。屠宰企业检测室检测能力亟待提升,存在生物安全设施不完善,生物安全意识不强等问题。这提示浙江省兽医实验室还需提升管理规范化水平,提高人员检测能力。     

多重荧光PCR鉴别诊断猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒

为了建立一种快速、灵敏、特异的能够同时检测猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒的多重荧光PCR方法。根据GenBank中公布的猪瘟病毒基因序列,设计一套特异性的引物和探针,对猪瘟病料提取RNA,经RT—PCR扩增后将产物回收,克隆至pMDl8-T构建pMDl8-T—CSFV阳性质粒;非洲猪瘟的目的片段序列采用化学合成,构建pMDl8-T—ASFV阳性质粒。以两种阳性质粒为模板时建立的多重荧光PCR方法做特异性、灵敏度和重复性试验,结果表明该方法可以将猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒同口蹄疫病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪水泡病病毒、猪圆环病毒2型区分开,灵敏度可以达到10拷贝的数量级．而且方法稳定。对2份已知猪瘟阳性血清样品和120份猪内脏、猪鼻腔拭子及血清样品检测后．发现对已知阳性样品的检测结果符合预期目标。未知样品检出猪瘟病毒3份阳性,未检出非洲猪瘟病毒阳性。     

如何保证猪场实验室非洲猪瘟荧光PCR检测结果的准确性

非洲猪瘟在我国已经暴发近3年零5个月了,病毒已经形成一定的污染面.为精准防控非洲猪瘟,国家鼓励猪场实验室开展非洲猪瘟自检工作,非洲猪瘟病毒荧光PCR检测为猪场实验室常规检测项目.荧光PCR检测是一种技术含量很高的工作,要想做好并不容易,为保证检测结果的准确性和可靠性,笔者结合自身工作对检测环节的一些常见问题进行总结,供...     

不同产地待宰生猪的非洲猪瘟病毒检测

2019年广西玉林地区报告首例非洲猪瘟疫情,为探明当地防控政策措施实施以来对非洲猪瘟的阻断效果,本研究对辖区内某屠宰企业不同产地的待宰生猪采集全血制成混合血液样本,应用荧光PCR技术检测样本中是否含有非洲猪瘟病毒。检测结果得出均为阴性,说明当地有关政策的贯彻落实对防控非洲猪瘟起到了积极作用。     

非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测方法的建立

依据非洲猪瘟病毒(ASFV)的vp73基因保守序列,设计了特异性引物与TaqMan探针,扩增片段69bp,建立了ASFV实时荧光PCR检测方法。与OIE推荐用于检测ASFV的实时荧光PCR和普通PCR方法进行比对,结果显示,本文建立的方法与OIE两种检测方法的特异性相当,灵敏度与OIE荧光PCR方法相当,但比普通PCR方法高出至少10倍。标准定量曲线显示,本文方法最低检测限可达10 copies/μL病毒DNA(相关系数为0.993046)。重复性试验的批内CV值为0.61%～1.14%,批间CV值为1.37%～3.14%,表明本文方法的重复性和稳定性良好。可见,本文建立的基于vp73基因的ASFV实时荧光PCR检测方法具备快速、准确、灵敏的特点,将为检验检疫部门防御ASFV传入我国提供更多技术支持。     

非洲猪瘟的防控现状及相关改进防控措施

非洲猪瘟属烈性、传染性疾病,传播速度较快,具有一定的出血性特征,家猪、野猪均可能发病。一旦感染非洲猪瘟病毒极难治愈,可导致感染猪死亡。非洲猪瘟病毒虽不会对其他动物或人类造成影响,但可对生猪养殖业产生严重威胁,影响生猪制品品质,导致生猪制品供应不足,猪肉价格上涨,不利于社会食品供应的稳定性保持。生猪养殖人员应明确认识非洲猪瘟防控工作的重要性,文章就非洲猪瘟的防控现状展开简述,完善相关防治措施,以期为相关工作提供参考。     

2019年辽宁省生猪屠宰企业非洲猪瘟病毒检测能力比对

为客观评价生猪屠宰企业非洲猪瘟病毒检测能力水平,辽宁省首次组织全省生猪屠宰企业实验室进行非洲猪瘟病毒检测能力比对试验。334家生猪屠宰企业实验室领取了比对样品,326家在规定时限内上报了检测结果,结果合格率为77.30%（252/326）、样品检测合格率为91.66%（1 494/1 630）;A类和B类屠宰企业实验室比对结果合格率分别为88.89%（64/72）和74.02%（188/254）;74家比对结果不合格的实验室中：5份样品中分别有1~4个样品检测结果错误的实验室个数分别为30、29、12、3,占比分别为9.2%、8.9%、3.7%、0.9%;结果表明：辽宁省生猪屠宰企业非洲猪瘟检测能力整体水平亟待提升,但A类生猪屠宰企业检测能力明显高于B类企业。比对结果为政府部门优化管理措施提供了信息支持,提示应加强对生猪屠宰企业的监管水平,注重专业人员检测能力培训,强化政策及资金扶持力度,进一步推进生猪屠宰企业非洲猪瘟检测能力提升。本次比对试验对辽宁省乃至全国有效防控非洲猪瘟疫情具有积极意义。     

2022年湖南省兽医实验室检测能力比对及非洲猪瘟检测能力验证

实验室检测能力比对与能力验证是评估实验室检测质量的重要手段。2022年4月,按照农业农村部关于检测能力比对的工作部署和要求,湖南省组织全省14个市级77个县级兽医系统实验室开展了检测能力比对,267个实验室开展了非洲猪瘟能力验证。市级开展禽流感病毒H5/H7亚型核酸鉴别检测、非洲猪瘟病毒核酸检测、O型口蹄疫病毒抗体检测3个项目,县级开展非洲猪瘟病毒核酸、O型口蹄疫病毒抗体以及布鲁氏菌抗体检测3个项目,非洲猪瘟检测实验室开展非洲猪瘟病毒核酸检测项目,每个项目各5份盲样。结果显示:12个市级和59个县级系统实验室所有比对项目检测结果全部准确,实验室整体准确率为78.02%,1 355份样品中1 317份样品检测结果准确,样品整体准确率为97.20%;267个参加非洲猪瘟能力验证的实验室中,224个实验室核酸检测结果准确,实验室整体准确率为83.90%,1 335份样品中1 265份样品结果准确,样品整体准确率为94.76%,其中屠宰企业样品准确率最低(93.30%)。结果表明:湖南省兽医实验室检测能力整体良好,但部分县级兽医系统实验室及屠宰企业实验室检测能力有待加强。各地应继续加强实验室检...     

2019年黑龙江省兽医实验室检测能力比对

2019年黑龙江省动物疫病预防与控制中心对全省13个市（地）、67个县（市、区）的80个兽医实验室开展了检测能力比对，比对项目包括禽流感抗体检测、猪瘟抗体检测、布鲁氏菌抗体检测、非洲猪瘟病毒核酸检测。结果显示，6个市级实验室和14个县级实验室比对结果正确率为100%，禽流感抗体、猪瘟抗体、布鲁氏菌抗体、非洲猪瘟病毒核酸检测项目结果正确率分别为71.2%、97.3%、73.3%、97.0%。比对结果客观反映了全省兽医系统实验室检测能力，提示应进一步加强实验室建设，加大资金投入，提升技术人员业务能力，规范实验室检测流程。     

非洲猪瘟病毒PCR检测方法的建立

根据GenBank公布的非洲猪瘟病毒(ASFV)结构蛋白基因vp73的序列,设计一对特异性检测引物,扩增片段251 bp,建立了检测ASFV的PCR方法。与OIE推荐使用的2组PCR引物进行比对试验,结果表明,3组引物的检测特异性相当,但本研究设计的引物灵敏度至少高出100倍。表明所建立的PCR方法能敏感、快速地检测非洲猪瘟病毒。     

2021年北京市兽医实验室非洲猪瘟病毒核酸检测能力比对

为客观评价北京市兽医实验室非洲猪瘟病毒核酸检测能力水平,2021年北京市动物疫病预防控制中心组织10家区级兽医实验室和7家非洲猪瘟第三方授权实验室开展了非洲猪瘟病毒核酸检测能力比对试验,并利用箱线图、稳健统计Z比分数、尧敦图等统计方法,对各实验室非洲猪瘟病原学检测结果进行统计分析。结果显示,18家兽医实验室（含北京市动物疫病预防控制中心）中有17家检测结果正确,只有1家实验室的1份盲样检测结果不合格,但部分实验室仍存在检测结果预警情况。建议各实验室持续加强质量控制,提高检测能力和水平。     

新疆乌鲁木齐市基层兽医实验室检测能力比对

为了解新疆乌鲁木齐市目前的基层兽医实验室检测能力,利用样品比对方法,对辖区内8个区县实验室进行了布鲁氏菌病虎红平板凝集试验、布鲁氏菌病试管凝集试验,以及H5亚型禽流感、猪瘟、口蹄疫抗体检测等5个比对项目考核。结果显示,上述5个比对项目的样品检测符合率分别为100.0%、80.7%、86.2%、88.3%和88.4%,平均符合率为88.0%。比对结果表明,新疆乌鲁木齐市基层兽医实验室已基本掌握了常用的动物疫病血清学检测技术,其中对布鲁氏菌病虎红平板凝集试验检测技术掌握较好,而对其他4个比对项目,尤其是布鲁氏菌病试管凝集试验检测技术,还需进一步提高检测水平。比对发现,2012—2015年的样品检测符合率均在90%以上,而在2016和2017年分别降至76.4%和84.9%,表明乌鲁木齐市基层兽医实验室检测水平还不稳定。这可能是实验室技术人员减少,且岗位不固定引起的。为此,应进一步加强基层实验室专项技能培训,稳固与提升基层兽医实验室检测能力。     

2018年河南省兽医系统实验室检测能力比对结果分析

为评价和提高实验室检测能力和水平,建立省市县三级动物疫情监测预警机制和风险评估模型,2018年河南省组织开展了兽医实验室检测能力比对,共有18个省辖市、10个省直管县/市和117个县/区级实验室参加,其检测结果平均正确率分别为97.30%、93.68%、91.97%。结果表明,全省大部分兽医实验室均已具备相应的检测能力,能够为河南省动物疫情风险评估提供技术支撑,但市、县两级实验室检测水平存在一定差距,县级兽医实验室检测诊断能力和水平有待提高。这提示应进一步加大实验室资金投入与实验室建设,增强实验室内外管理水平,提升技术人员业务能力,加强技术支撑,完善检测标准体系等。     

非洲猪瘟病毒核酸定性检测方法比对

为提升兽医实验室非洲猪瘟病毒核酸检测能力和质量控制水平,积累检测经验,以更好地开展非洲猪瘟检测,2020年7月,参加了北京市农业农村局组织的"非洲猪瘟实验室检测能力比对"项目.本次比对同时选用《非洲猪瘟检疫技术规范》(SNT 1559—2010标准)中的普通PCR方法、荧光定量PCR方法以及商品化试剂盒,对5份验证样品...     

2018—2020年河南省兽医系统实验室检测能力比对

为了解河南省兽医系统实验室检测能力和水平,科学评价各级实验室监测预警和风险评估能力,2018—2020年河南省动物疫病预防控制中心对全省18个省辖市、10个省直管县/市和117个县/区级兽医实验室组织开展了各省辖市、直管县/市和各县/区兽医实验室检测能力比对。结果显示:2018—2020年各省辖市检测结果平均正确率分别为97.30%、96.98%、95.28%,各直管县县/市检测结果平均正确率分别为93.05%、95.37%、84.57%,各县/区检测结果平均正确率分别为91.51%、91.26%、88.54%。结果表明全省大部分兽医实验室均已具备相应的检测能力,能够为河南省动物疫情风险评估及动物疫病预防控制体系提供有力支撑,但市县两级实验室检测水平存在一定差距。这提示基层实验室应完善实验室质量管理体系,强化生物安全管理体系建设,加强检测设备的补充升级,提升技术队伍专业水平。     

非洲猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

为建立一种检测非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体的间接ELISA(iELISA)方法,对构建的ASFV P30基因表达工程菌诱导表达后,将获取的重组ASFV P30蛋白进行纯化和Western-blot检测,然后以纯化的重组蛋白为抗原,建立了ASFV抗体iELISA检测方法,并进行了特异性、灵敏性、重复性试验;同时与基于AS...     

兽医实验室质量管理体系与生物安全管理体系的融合探索

建立融合型质量与生物安全管理体系是实现实验室质量与生物安全目标的重要举措。当前,部分第三方兽医实验室、养殖企业实验室建立的生物安全管理体系,编制的生物安全管理体系文件并不完善。部分兽医实验室以质量管理体系为主框架,补充生物安全相关内容编制而成的质量与生物安全管理体系文件系统性较差,不能满足生物安全的全部要求。本文从质量管理体系与生物安全管理体系运行对象、要素重叠情况出发,深入分析两者的关系,以内部审核要素为实例,探讨质量管理体系与生物安全管理体系融合的方法,以期为兽医实验室建立适宜且符合标准要求的融合型质量与生物安全管理体系提供参考。