CpG寡脱氧核苷酸的免疫刺激特性及应用研究进展

CpG基序是指含有非甲基化的胞嘧啶（C）和鸟嘌呤（G）二核苷酸为核心序列的基序为5′-R-D-CpG-Y-Y-3′的DNA或寡脱氧核苷酸序列,是DNA具有免疫刺激活性的结构基础。随着对CpG特性研究的不断深入,CpG寡脱氧核苷酸在激活先天性免疫、作为疫苗佐剂、对变态反应进行免疫治疗、抗肿瘤应用及基因治疗等方面均显示出较广阔的应用前景。现就CpG寡脱氧核苷酸的免疫激活作用、细胞识别及结构特征、治疗疾病方面的应用及毒理作用加以探讨。     

新型免疫佐剂--CpG寡脱氧核苷酸

含未甲基化CpG基序的寡脱氧核苷酸能够直接刺激B细胞等抗原递呈细胞,提高Th1产量并促进细胞因子的产生及抗原递呈细胞的成熟和活化.这使CpG 寡核苷酸具有良好的免疫佐剂活性,能够促进和提高抗原特异性免疫应答.本篇着重介绍了CpG寡核苷酸作为免疫佐剂的研究进展.     

疫苗佐剂胞嘧啶-鸟嘌呤寡脱氧核苷酸的研究进展

胞嘧啶-鸟嘌呤寡脱氧核苷酸(cytosine phosphate guanidine oligodeoxynucleotide,CpG ODN)是指含有非甲基化的胞嘧啶和鸟嘌呤二核苷酸为核心序列的核苷酸序列,近年来,CpG ODN作为一种新型免疫佐剂的研究越来越多,可诱发机体产生多种免疫学效应,提高系统免疫和黏膜免疫水平,具有安全性高,耐受性强等特点。     

长链CpG寡脱氧核苷酸DNA重组质粒对禽流感灭活疫苗免疫应答的影响

为明确导入长链CpG寡脱氧核苷酸3个DNA重组质粒对禽流感H5亚型灭活疫苗的免疫应答的影响,将21日龄试验雏鸡随机分为6组,即健康对照组(A组)、疫苗对照组(B组)、空载体对照组(C组)、pUC26免疫促进组(D组)、pUC30免疫促进组(E组)及pUC44免疫促进组(F组),对6组雏鸡在首免后1～8周(WPI)检测其HI抗体水平并在1、4及8 WPI测定脾脏、法氏囊及胸腺免疫器官指数.研究结果表明:在2WPI,D(P<0.01)、F(P<0.01)及E组(P<0.05)HI抗体水平极显著或显著高于C组;在3WPI,F组HI抗体水平分别显著高于B(P<0.05)、C(P<0.05)及E组(P<0.05);在5WPI,F(P<0.01)和D(P<0.05)组HI抗体水平极显著或显著高于C组;在6 WPI,F组HI抗体水平显著高于C组(P<0.05);在8 WPI,F组HI抗体水平极显著高于B(P<0.01)或C组(P<0.01).在4WPI,A组胸腺指数极显著或显著高于C(P<0.05)及D组(P<0.01),E组胸腺指数显著高于D组(P<0.05);在8WPI,E组脾脏指数显著高于A组(P<0.05).     

体外筛选对犬具有免疫刺激活性的CpG寡脱氧核苷酸

建立并优化犬特异性寡脱氧核苷酸(CpGODN)的体外筛选条件,筛选自行设计的对犬具有免疫刺激活性的CpGODN。用CpGODN2006对犬的免疫细胞进行刺激,测定细胞增殖能力。对免疫细胞的来源、细胞铺板浓度、CpGODN的刺激时间和浓度及增值能力的测定方法等条件进行优化。并对自行设计的CpGODN进行了初步筛选。结果显示,犬脾细胞对CpGODN的反应性比外周血单个核细胞好。在犬脾细胞为6×105个/孔,37℃5%CO2条件下,经10mg/LCpGODN2006刺激48h,使脾细胞明显增生。3H-TdR掺入法测得的结果比MTT法更敏感。自行设计的CpGODNR008能显著地刺激犬脾细胞增生,且优于CpGODN2006(P0.05)。结果表明,优化了犬特异性CpGODN的体外筛选条件,并筛选出了对犬具有免疫刺激活性的CpGODN。     

新型疫苗佐剂研究进展

佐剂是增强和调节疫苗抗原免疫反应的免疫刺激物,与抗原一起使用能产生更强的免疫反应。佐剂能激活机体的天然免疫系统,当佐剂和抗原同时或预先注射到机体内,可改变抗原的形态并延长抗原在体内的滞留时间,促进单核吞噬细胞对抗原的递呈能力及刺激淋巴细胞增殖分化,从而增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。佐剂的发展史长达一百多年,目前使用最广泛的疫苗佐剂是铝佐剂,传统的灭活疫苗在很大程度上依靠以铝盐为主的复合物作为主要佐剂。但近年来,随着基因工程技术和生物技术的飞速发展,重组疫苗、基因工程载体疫苗、核酸疫苗等新型疫苗逐步被开发出来,这些新型疫苗与传统疫苗相比往往存在免疫应答能力差等问题,早期的抗原不纯导致传统的铝盐佐剂已无法满足需要。为解决新型疫苗免疫原性差的问题,科研人员致力于开发广谱且高效的新型疫苗佐剂用来增强新型疫苗的作用。新型疫苗佐剂种类繁多,功能各不相同且机制较为复杂,可分为新型油乳佐剂、脂质体佐剂、CpG寡核苷酸佐剂、细胞因子佐剂、纳米佐剂、多糖佐剂及复合系统类佐剂等。笔者对疫苗佐剂的发展史、作用机制及新型疫苗佐剂的分类进行分析和评述,以期为新型疫苗佐剂的研制及开发提供参考。     

兽用疫苗佐剂的研究进展

兽用疫苗免疫佐剂可以辅助兽用疫苗进入动物机体,增强疫苗的免疫效力,维持疫苗的稳定性,帮助疫苗更加有效地预防、控制动物传染病,减少损失,保障安全的生态环境。用作兽用疫苗免疫佐剂的物质越来越多,有水性疫苗佐剂和油性疫苗佐剂等,各种佐剂的有效成分和作用方式各不相同。本文就兽用疫苗佐剂的特点做了概述,以期为疫苗研发过程中佐剂的筛选提供参考。     

DNA疫苗佐剂研究进展

DNA疫苗是近年来发展较为迅速的一类生物制剂,它能诱导动物机体产生持久的体液免疫和细胞免疫,其在抗病毒、细菌和寄生虫的感染方面起到了重要作用。但与传统的灭活疫苗相比,其免疫效果并不理想。为了攻克DNA疫苗免疫效力低下的难题,一些学者已经研制了多种佐剂制品,以提高DNA疫苗对动物疾病免疫保护的能力。文章对使用佐剂提高DNA疫苗免疫效力进行了综述。     

新型兽用疫苗佐剂的研究进展

综述了细胞因子、脂质体、CpG及单磷酰基脂质A四种新型佐剂的特点及其国内外的研究进展。传统佐剂存在的一些缺点致使其不适合在新型疫苗中使用,因此寻找理想的新型佐剂已经成为兽用疫苗研发的关键问题之一;新型疫苗具有传统疫苗不具备的优点,但其抗原高度纯化、免疫原性较弱的不足也需要有理想的疫苗佐剂与之配合使用以增强其作用。     

CpG-ODN佐剂在猪口蹄疫疫苗免疫增强的应用

本研究将CpG佐剂同高端口蹄疫疫苗混合后免疫生长猪,经过液相阻断法对抗免疫后的体效价进行评估。结果表明,CpG佐剂同高端口蹄疫疫苗同时使用可以提高免疫抗体水平和免疫合格率。     

佐剂在水产疫苗中的研究进展

疫苗接种是控制养殖鱼类病害最为安全有效的方法。但疫苗通常需要佐剂的辅助来提高免疫效力,传统佐剂(如矿物油)已广泛应用于商业化鱼类细菌疫苗中,但这类佐剂可能产生明显的副作用,且对细胞内病原疫苗作用不大。随着鱼类免疫学和免疫机制研究的深入,免疫反应中细胞及细胞因子的功能也逐步明确,为新型疫苗及佐剂的研发提供了基础和前提。为降低鱼类疫苗的副作用,同时确保免疫保护水平,研究人员致力于针对特定宿主细胞反应和特定病原体,开发无副作用或轻微副作用的疫苗佐剂。文章总结了目前水产疫苗常用佐剂以及新一代佐剂(Toll受体配体或细胞因子)的研究进展,重点关注佐剂的免疫保护功效及其在体内对免疫系统的调节作用,为理想水产疫苗佐剂的研发提供参考。     

免疫佐剂 CpG—DNA的研究进展

特异性免疫即是含有PAMP的反应物与天然免疫细胞上的PRR相结合,激活天然免疫应答,从而活化抗感染途径,并最终发挥获得性免疫应答的一系列反应过程。CpG—DNA作为一种在进化中高度保守的PAMP,它可以模拟感染过程,克服新型疫苗PAMP不足的缺陷,从而诱导强烈的免疫应答。CpG—DNA可以直接激活B淋巴细胞、单核／巨噬细胞和树突状细胞,上调免疫刺激分子的表达,调节免疫反应,诱导IL-12、IL-1和TNF-等多种细胞因子的分泌,此外,它还能间接刺激NK细胞、T淋巴细胞。由于其独特的优点,CpG—DNA在畜牧兽医临床中显示其极强的使用价值和广阔的应用前景。     

佐剂及其在基因免疫研究中的应用

论述了免疫佐剂的作用机理及细胞因子、CpGDNA、化学佐剂、共刺激信号分子、化学因子、黏附分子等佐剂在基因疫苗中的应用概况，并对免疫佐剂在基因疫苗中的应用前景进行了展望。     

DNA疫苗佐剂研究进展

本文综述了具有载体功能佐剂:脂质体,免疫刺激复合物,减毒的侵袭性胞内细菌和免疫激活作用的佐剂:CpG寡核苷酸免疫调节序列,细胞因子,趋化因子,在DNA疫苗中应用的佐剂机理,相应的优缺点,佐剂应用及现状。     

CpG寡脱氧核苷酸长链DNA的克隆及重组质粒载体的构建

为构建长链CpG ODN DNA,将合成的含有CpG的GTCGTT核心序列以TT间隔开后重复3次,并在3′端添加polyG结构,而后在其两翼人为添加Xba Ⅰ的黏性末端(简称为A链)后合成与其互补的互补链(简称为B链),通过退火形成CpG ODN DNA单体,以DNA连接酶将CpG单体连接为多聚体后再以A链和B链作为引物,利用SOE-PCR技术对poly CpG ODN DNA进行长链扩增,分别将600～700 bp片段克隆到pMD-18T载体中,并获得相应的重组子pUC44、pUC26及pUC30.序列分析结果表明:3个重组子与理论上产生的含有10,11,13个CTAGATCGT(CG)TTTTGT(CG)TTTTGT(CG)TTGAGGGGGGAT拷贝长链CpG ODN DNA标准序列的同源性分别为97.4%、97.9%和97.1%.     

复合佐剂的研究进展

不断开发新型免疫佐剂,尤其是复合佐剂,是目前疫苗佐剂的主要发展趋势。根据疫苗生产应用的需要,将单一佐剂复合搭配使用,既可发挥各个佐剂的优点,又有互相促进的作用,达到明显增强免疫效果的目的。为适应生产和市场的需求,复合佐剂对动物机体应无副作用,安全有效。本文对复合免疫佐剂的研究现状和应用前景进行了综述,以期为开发研制高效、低毒的复合免疫佐剂提供参考。     

几种新狂犬病疫苗佐剂的研究

佐剂又称免疫增强疫，可以增强抗原特异性免疫应答的物质。一种免疫效果确实的疫苗往往需要一种与之相匹配的佐剂才能更好地发挥疫苗抗感染的特性。在我国狂犬病灭活疫苗研制阶段，研制一种种无毒、高效、稳定的理想佐剂是疫苗研制的重要部份。本文主要介绍了免疫刺激佐剂、细胞因子IL-2、角鲨烯佐剂、胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸序列、革兰阴性非致病菌成团泛茵脂多糖等几种新狂犬病疫苗佐剂的研究进展。