鸡毒支原体特异膜抗原的制备

采用 Ｓ Ｄ Ｓ聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化鸡毒支原体膜蛋白。选择切取１１０ Ｋ Ｄ、９８ Ｋ Ｄ、６６～６２ Ｋ Ｄ 和５６ Ｋ Ｄ 特异蛋白条带，以 Ｐ Ｂ Ｓ（ｐ Ｈ７．４）浸泡过夜，浸出液置于透析袋封口，透析袋外散布 Ｐ Ｅ Ｇ（ Ｍ ＝ ６ ０００）浓缩膜抗原后获得特异膜抗原，为鸡毒支原体特异诊断方法的建立和单克隆抗体的制备奠定了基础。     

临床分离鸡毒支原体结构蛋白比较及抗原性分析

应用SDS-PAGE对分离自广东、四川和北京等地区鸡毒支原体及抗生素压力下诱导的耐药鸡毒支原体进行了结构蛋白比较分析.结果显示不同地区分离的鸡毒支原体结构蛋白存在差异,而共同之处是在75KD、55KD、29KD和26KD处都出现了高表达的蛋白条带,与诱导耐药株结果一致.用自制的2株特异性兔抗MG多克隆抗血清对鸡毒支原体临床分离株及实验室诱导的耐药鸡毒支原体进行Western-Blot分析,印迹结果显示所有临床分离鸡毒支原体在分子量大小约75KD和55KD均出现特异条带.     

用ELISA检测传染性囊病病毒诱导的细胞凋亡

用５株传染性囊病病毒（ＩＢＤＶ）分别感染鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）,于感染后不同时间收集接毒组与对照组的细胞进行检测,试验结果显示,接毒组与对照组细胞的ＤＮＡ在琼脂糖凝胶电泳谱上均呈现梯状条带,用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测各组细胞中降解ＤＮＡ量,发现感染ＩＢＤＶ７ｈ后,接毒组细胞降解ＤＮＡ量比对照组明显增加,且各接毒组间降解ＤＮＡ量有一定的差异,试验结果表明：各株ＩＢＤＶ均诱导ＣＥＦ发生细胞     

鸡毒支原体感染的诊断和防控

鸡毒支原体感染又称鸡败血支原体感染或鸡慢性呼吸道病,是有鸡毒支原体引起的鸡和火鸡的一种慢性呼吸道传染病。鸡主要表现为呼吸道症状,如气管炎、气囊炎等,以咳嗽、气喘、流鼻液和呼吸啰音为特征。该病程缓慢、病程长,成年鸡多呈隐性感染,可在鸡群中长期存在和蔓延。鸡毒支原体感染显现世界性分布．国内也很普遍。     

棉花DNA的快速提纯

棉花ＤＮＡ的快速提纯陈翠霞，于元杰，王洪刚（山东农业大学农学系）关键词：棉花ＤＮＡ；提取；纯化ＡＭＥＴＨＯＤＦＯＲＩＳＯＬＡＴＩＯＮＯＦＣＯＴＩＯＮＤＮＡ￥Ｃｈｅｎｃｕｉｘｉａ；ＹｕＹｕａｎｊｉｅ；ＷａｎｇＨｏｎｇｇａｎｇ（Ｄｅｐｔ．ｏｆＡｇｒｏｎｏ...     

鸡毒支原体诊断研究新进展

鸡毒支原体感染是近年来严重危害养鸡业的重要传染病,呈慢性经过,复发率很高,常给养鸡,3k带来严重的经济损失。本文就鸡毒支原体感染诊断方法和防制措施的研究进展作一概述,供临床参考。     

RAPD技术对部分地方鸡种的肤色伴遗传群体遗传结构的分析

试验结果表明,泰和鸡,固始鸡,狼山鸡（Ｎ系）３个鸡种性染色体上含有隐性伴性基因ｉｄ,萧山鸡性染色体上含有显性和抑制基因Ｉｄ。经ＲＡＰＤ技术对２种基因型鸡种分析,ＯＰＨ－１６引种,在含有ｉｄ３个鸡种中产生１条共显性条带８６４,而含有Ｉｄ的鸡种则缺少此种条带;ＯＰＨ－０２引物;在含有Ｉｄ３个鸡种中,除狼山鸡仅发生单态外,其余鸡种均末产生条带。     

MDV感染鸡羽毛根病毒抗原和DNA的动态检测

１０羽１４日龄鸡分别以马立克氏病毒（ＭＤＶ）ＢＪ－１株接毒，采集羽毛根作为ＭＤＶ琼扩抗原和ＭＤＶＤＮＡｄｏｔ－ｂｌｏｔ杂交的动态检测样品。接毒后第１０ｄ至第８周的检测结果显示，鸡羽毛根ＭＤＶ琼扩抗原及ＭＤＶＤＮＡ可分别在接毒后第１４ｄ（３７．５％，３／８）和第１２ｄ（３３．３％，３／９）检出；接毒后第１７ｄ至第５周，鸡羽毛根ＭＤＶ琼扩抗原的阳性检出率均大于８０％；第６，７和８周时，则分别降至６６．７％（４／６），５０％（３／６）和４０％（２／５）。而ＭＤＶＤＮＡ的检测，除１只鸡直到第４周才呈阳性外，其余在接毒后第１４ｄ至第８周中均保持１００％的阳性检出率。     

福建稻瘟菌群体遗传多样性RAPD分析

以ＯＰＧ、ＯＰＨ、ＯＰＫ等３个系列６０个引物对福建稻瘟菌进行了ＤＮＡ随机扩增多态性（ＲＡＰＤ）分析,６０个引物中有２１１个扩增出多态性条带,表明福建省曙菌群体有丰富的ＲＡＰＤ多态性,可为该菌的遗传分析提供大量的遗传标记,对ＲＡＰＤ条带多样性分析发现龙岩江山病圃稻瘟菌群体遗传多样性较简单,有明显优势种群可能影响其抗瘟评定的代表性较说明多点进行品种抗性理必要的。     

鸡毒支原体病研究进展

鸡毒支原体( Mycoplasma Gallisepticum , MG )是危害禽类的常见疾病之一,呈世界性流行,严重影响着养禽业的健康发展。因此,防控鸡毒支原体病,净化种鸡群对养禽业的发展意义重大。本文通过对MG 的病因、病原、流行特点、症状以及防治措施等的研究进展进行综述,以期为防控 MG 提供参考。     

油梨果肉DNA提取方法的比较

为了获取高质量的油梨果肉DNA,以油梨果肉为试材,比较改良SDS法、改良CTAB法和试剂盒法对油梨果肉DNA的提取效果。结果表明:上述3种方法均可从油梨果肉中提取DNA,但改良SDS法与改良CTAB法所获得的DNA浓度都在600μg/m L以上,纯度(OD260nm/OD280nm)均在1.8左右,纯度高且完整性较好,可用于未来分子标记分析。     

基于磁性微球的基因组核酸提取及其在中药材真伪鉴别和亲缘关系分析中的应用

为从分子水平上对中药材质量进行控制,基于磁性微球对中药材核酸进行纯化及后续生物鉴定,采用磁分离技术提取高纯度的核酸模板,以高磁响应性、粒径均一的超顺磁性四氧化三铁微球为固相载体,在聚乙二醇和氯化钠等的协同作用下,对根、茎、叶、花、果实、种子类中药材基因组核酸进行提取;分别提取丹参和柴胡的基因组核酸,并对其进行聚合酶链式反应扩增(PCR)和随机扩增多态性分析(RAPD),用于对丹参的真伪鉴别和对柴胡进行亲缘关系分析.结果表明:经提取,获得了纯度较高(OD260 nm/OD280 nm介于1.6~2.0)的中药材核酸模板;通过扩增叶绿素rpl16基因片段,可有效鉴别丹参及其伪品牛蒡;采用3个有效随机引物,可从基因水平上分析4个柴胡品种的亲缘关系远近     

几个杏李品种成熟叶片基因组DNA的提取

用改良的CTAB法提取几个杏李品种成熟叶片的基因组DNA,裂解细胞核前先用洗液排除细胞质中的部分多糖、多酚、丹宁和果胶等物质的干扰;裂解细胞核时,在提取液中加入乙醇进一步去除多糖,结果表明,提取的基因组总DNA的纯度和完整性都较好,OD260/OD280值在1.70-1.93之间,DNA无降解现象,没有多糖污染,可被限制性内切酶消化,所提取的基因组DNA的SRAP扩增条带清晰,多态性好。说明用此方法提取到了质量合格的杏李基因组DNA,可以用于PCR和限制性内切酶分析。     

黔北一新鱼种遵义小钝吻鮠线粒体DNA的分离纯化

用差速离心法和改进的碱裂解法分离纯化遵义小钝吻鮠线粒体DNA,紫外检测其OD260/OD280在1.78～1.85,并计算出该鱼肝组织线粒体DNA的含量为0.613μg/g。纯化样品经紫外分析仪在200～290 nm波长范围内扫描,呈现典型的DNA吸收峰,其最大吸收峰在259～260 nm。以λDNA/HindⅢ的完全酶切片段作为相对分子量标准,利用电泳迁移率与分子量的对数的线性关系,由已知片段大小推算出遵义小钝吻鮠mtDNA分子大小为(15.44±0.16)kb。     

大赖草总DNA转化小麦叶片mRNA差异显示技术中总RNA提取和反转录活性研究

[目的]研究大赖草总DNA转化小麦叶片mRNA差异显示技术中总RNA的质量及反转录活性。[方法]在大赖草总DNA转化小麦幼苗叶片mRNA差异显示相关试验中,利用改进的TRIzol法,从幼苗叶片中提取总RNA,紫外光谱分析,1.2%琼脂糖电泳检测,并进行随机引物RT-PCR扩增。[结果]OD260 nm/OD280 nm比值为1.95～1.98;总RNA和RT-PCR电泳条带均表现出整齐、清晰。[结论]获得的总RNA质量好、纯度高,有很高的反转录活性,完全适合于进一步的分子生物学研究。     

腰果叶片DNA的提取

以CTAB法为基础,设计了一种快速分离和纯化腰果叶片总DNA的方法。研究结果表明,该改良方法简便、快速、经济、有效。分光光度法测定与电泳检测分析表明,采用该方法提取腰果叶片总DNA的纯度和完整性良好,OD260/OD230平均值为1.91、OD260/OD280平均值为1.86,可以进行PCR扩增、Southern杂交等分子生物学研究。     

TENP-PBS预处理在提取土壤DNA中的应用

以一种土壤DNA直接提取法为基础,比较了TENP-PBS预处理在土壤DNA提取中的应用效果。OD260/OD230和OD260/OD280以及PCR扩增结果表明,在提取DNA之前用TENP-PBS对土壤进行预处理可以有效去除腐殖酸污染,提高DNA纯度。     

雷公藤叶片基因组DNA不同提取方法比较

[目的]比较雷公藤叶片中基因组DNA的提取方法。[方法]采用常规CTAB法、改良CTAB法、常规SDS法、高盐低pH值法和一步法分别提取雷公藤叶片基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法测定样品OD260与OD280的比值以及RAPD扩增结果,判断所得DNA样品的纯度,并根据OD260值计算不同提取方法的DNA得率。[结果]改良CTAB法提取效果最佳,所提DNA的平均得率为219.3μg/g,OD260/OD280比值在1.869～1.903,用于RAPD-PCR均有较好的扩增结果。[结论]改良CTAB法是雷公藤叶片基因组DNA提取的最佳方法。     

凉粉草基因组DNA提取与分析

[目的]为分子生物学研究提供高质量、高产量的凉粉草总DNA。[方法]采用改良CTAB法提取总DNA,通过测定OD260/OD280值、琼脂糖凝胶电泳和RAPD扩增对所得DNA的浓度和质量进行检测,考察该方法对DNA的提取效果。[结果]改良CTAB法提取的总DNAOD260/OD280值为1.6～2.0;电泳条带清晰,完整性好,纯度高,总DNA分子量与λDNA相近;以所提DNA为模板进行RAPD扩增时,可得到稳定的扩增条带。[结论]改良CTAB法适合凉粉草基因组DNA的提取。     

槟榔基因组DNA的高效提取方法

以槟榔叶片为植物材料,采用改良的SDS-CTAB方法提取其基因组DNA。结果表明,以水饱和酚代替Tris饱和酚对样品进行抽提的SDS-CTAB法可以获得纯度高(OD260/OD280在1.7~1.9、OD260/OD230大于2)、一级结构完整、分子量大于23 kb的DNA,产率在50~120μg/g。该法所提DNA成功用于后续的分子生物学研究,并在花生、香蕉等植物上得到应用。