新疆维吾尔自治区和田地区规模化羊场腹泻羔羊源大肠杆菌的分离鉴定及毒力基因和耐药基因分析

[目的]了解新疆维吾尔自治区和田地区规模化羊场腹泻羔羊源大肠杆菌的毒力基因和耐药基因携带情况。[方法]从和田地区3个规模化羊场收集70份腹泻羔羊肛拭子,采用传统的细菌分离培养、染色镜检、生化鉴定以及细菌16S rDNA序列PCR扩增、测序等方法对样本进行大肠杆菌的分离鉴定,利用PCR法对分离菌株进行大肠杆菌系统发育群分型以及毒力基因、耐药基因检测。[结果]经形态学观察、生化鉴定、16S rDNA序列分析,从70份腹泻羔羊肛拭子中分离鉴定出38株大肠杆菌,分离率为54.3%(38/70)。系统发育群分型鉴定分析显示,分离菌株以B1群为优势群（68.4%,26/38）,其次是A群（26.3%,10/38）和D群（5.3%,2/38）,未检测出B2群。毒力基因检测结果显示,在8种大肠杆菌毒力基因中检测出4种,携带fimC基因的菌株比例最高,为92.1%(35/38);其次是irp2基因47.4%(18/38)、hlyF基因36.8%(14/38)和fyuA基因34.2%(13/38),未检测出eaeA、ST、LT和Stx1基因。耐药基因检测结果显示,在8种大肠杆菌耐药基因中检测到6种,以磺胺...     

致羔羊腹泻大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

正以陕北白绒山羊为主的羊产业已经成为陕北地区农业发展和农牧民增收的主导产业,对区域经济发展具有不可替代的重要作用~([1])。但是,羔羊和成年羊只的大面积群体性死亡一直是困扰陕北白绒山羊养殖的一个重要问题。其中,致病性大肠杆菌可以诱导山羊多种致死性疾病,病理复杂多样,导致包括以败血症和剧烈腹泻为特征的急性传染病和乳房炎,不仅危害泌乳期母羊自身健康,而且严重危害羔羊健康~([2-3])。有效防治山羊大肠杆菌病是促进山羊产业健康、快速、可持续发展的关键。     

鸡致病性大肠杆菌的分离鉴定及耐药基因的检测

从山东省滕州市某种鸡场的19只死胚及出壳弱雏中分离出6株大肠杆菌,平均分离率为36.84%。生化鉴定表明,这些致病菌均符合大肠埃希氏菌的生化特性。本实验用平板稀释法对6株鸡源致病性大肠杆菌进行了药敏实验,结果6株菌对五大类抗生素(氨基糖甙类、四环素类、氯霉素类、磺胺类、硝基呋喃类)的10种药物的耐药性以卡那霉素最高,四环素次之,呋喃妥因最低。设计了4对引物,采用PCR技术,对6株鸡源大肠杆菌的耐药基因进行了检测并对所得耐药基因进行了扩增及序列测定。     

鸽致病性大肠杆菌的分离鉴定及耐药基因的检测

江苏省某鸽场鸽群出现呼吸困难,死亡增多现象,剖检病死鸽,呈现气囊炎、腹膜炎和皮下广泛性出血等病变。无菌采集脾脏、肺脏等脏器进行病毒分离,但未分离到病毒。选取健康鸽和病鸽各10只,测定新城疫抗体,其抗体水平均较高。同时,无菌采集病料分离到2株细菌,经分离培养、染色镜检、生化特性鉴定,确定为大肠杆菌,玻板凝集试验表明C株为O163型,D株为O138型。对分离到的细菌做药敏试验,结果表明,C株对链霉素等8种药物产生了耐药性,对氟苯尼考等4种药物敏感;D株对庆大霉素等5种药物产生耐药性,对链霉素等7种药物敏感。分别设计引物对其耐药基因进行PCR检测。     

致羔羊腹泻大肠杆菌分离培养、药敏试验及鉴定

为了确定引起该羊场羔羊腹泻的致病菌,通过分离培养和细菌鉴定确定致病菌为大肠杆菌,药敏试验结果表明米诺环素、氨曲南、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢他啶和头孢西叮对该菌的抑制和杀灭效果最好。     

腹泻仔猪中奇异变形杆菌分离鉴定与耐药基因分析

从腹泻仔猪中分离奇异变形杆菌,并对其耐药性和14种常用抗生素的耐药基因进行检测和分析。采用分离培养、攻毒试验、药敏试验和PCR特异性扩增等方法对分离菌进行鉴定和耐药基因的检测。结果显示,共分离到15株奇异变形杆菌,发现部分分离菌可以导致仔猪腹泻,所有分离菌均有多重耐药性,86.67%(13/15)的分离菌含有3种以上的耐药基因;四环素类、磺胺类、氯霉素类抗生素对分离菌无抑制作用,而β-内酰胺类和氨基糖胺类的部分抗生素对分离菌有抑制作用,喹诺酮类的抑菌效果较好;对β-内酰胺类抗生素、磺胺类抗生素、四环素类抗生素、氨基糖苷类抗生素和氯霉素类抗生素的耐药性主要是由cmy、sul-2、 tetA、aadA和floR耐药基因所导致的。结果表明,腹泻仔猪中分离的奇异变形杆菌含有大量的耐药基因和多重耐药性,可以引起仔猪腹泻症状,导致抗生素在临床治疗时不能发挥作用。     

腹泻羔羊中大肠杆菌耐药性分析

从青海省达日县3个藏羊养殖场中采集到羔羊腹泻的粪便10份,将分离得到的细菌纯化培养后进行进一步的生化鉴定和药敏试验。研究结果表明,在10份粪便中共检测出大肠杆菌10株,发现分离得到的大肠杆菌对小鼠具有致病性。药敏试验发现分离得到的致病原对恩诺沙星、氟苯尼考2种抗生素高敏,对复方新诺明、头孢唑林、丁胺卡那霉素中敏,对常用的抗生素普遍具有耐药性,在疾病防治过程中,应指导养殖户科学用药,筛选出敏感抗生素对症治疗。该次所筛选的大肠杆菌具有致病性,筛选的敏感抗生素种类较少,对大多数抗生素都产生耐药性,在今后防控过程中需要指导养殖户科学用药、合理用药。     

羔羊致病性大肠杆菌的分离鉴定

从互助县台子乡送检的2份病死羔羊病料中分离到1株病原菌,经病原菌的分离、生化实验、动物致死实验、药物敏感性实验和PCR扩增,对分纯菌株进行了生物学鉴定。结果显示:该株分离菌株为致病性大肠杆菌。体外药敏实验证实了分离株该菌对杆菌肽、多粘菌素E、呋喃妥因等药物敏感;对氯霉素、强力霉素等药物中敏;对青霉素、红霉素、卡那霉素等药物耐药。实验结果表明,此次引发绵羊死亡的主要病原菌是大肠杆菌。     

犊牛肺源致病性大肠杆菌分离鉴定、耐药性及耐药基因检测

本试验旨在确定新疆石河子地区某牛场因呼吸系统疾病导致犊牛死亡的细菌性病原,并对分离病原进行系统进化分类、耐药表型和耐药基因分析。采用细菌常规分离结合全自动生化分析系统对分离株进行分离鉴定,采用纸片法和PCR方法对分离株进行系统分群、药敏表型及耐药基因的分析。从患病犊牛肺脏、肝脏及淋巴结组织分离鉴定出6株致病性大肠杆菌,6株分离株均呈多重耐药现象,其中对青霉素、阿莫西林、头孢唑啉、头孢拉定、链霉素、庆大霉素、氟苯尼考、替考拉宁、克林霉素、美罗培南、四环素和妥布霉素的耐药率高达100%。氨基糖苷类耐药基因aacC2、β-内酰胺类耐药基因bla_CTX-M和bla_TEM、四环素类耐药基因tetA、喹诺酮类耐药基因gyrA、磺胺类耐药基因sul2携带率分别为66.67%、83.3%、66.7%、100%、100%和100%。结果表明,新疆石河子某牛场发生呼吸道感染死亡犊牛细菌性病原是大肠杆菌,且表现较强的多重耐药现象,分离株携带更为丰富的耐药基因。     

犊牛肺源致病性大肠杆菌分离鉴定、耐药性及耐药基因检测

本试验旨在确定新疆石河子地区某牛场因呼吸系统疾病导致犊牛死亡的细菌性病原,并对分离病原进行系统进化分类、耐药表型和耐药基因分析。采用细菌常规分离结合全自动生化分析系统对分离株进行分离鉴定,采用纸片法和PCR方法对分离株进行系统分群、药敏表型及耐药基因的分析。从患病犊牛肺脏、肝脏及淋巴结组织分离鉴定出6株致病性大肠杆菌,6株分离株均呈多重耐药现象,其中对青霉素、阿莫西林、头孢唑啉、头孢拉定、链霉素、庆大霉素、氟苯尼考、替考拉宁、克林霉素、美罗培南、四环素和妥布霉素的耐药率高达100%。氨基糖苷类耐药基因aacC2、β-内酰胺类耐药基因bla_(CTX-M)和bla_(TEM)、四环素类耐药基因tetA、喹诺酮类耐药基因gyrA、磺胺类耐药基因sul2携带率分别为66.67%、83.3%、66.7%、100%、100%和100%。结果表明,新疆石河子某牛场发生呼吸道感染死亡犊牛细菌性病原是大肠杆菌,且表现较强的多重耐药现象,分离株携带更为丰富的耐药基因。     

仔猪腹泻源大肠杆菌耐药性调查及耐药基因检测

对泰州地区分离的仔猪腹泻源大肠杆菌的耐药性及其携带的相关耐药基因情况进行检测,为养殖场今后合理用药提供科学依据。采用微量肉汤稀释法对分离的49株大肠杆菌进行8种抗菌药物的药敏试验;采用PCR方法对多黏菌素耐药基因mcr-1及超广谱β-内酰胺酶(ESBL)耐药基因blaCTX-M、blaSHV和blaTEM进行检测。药敏试验结果显示:大肠杆菌对氯霉素、氟苯尼考、氨苄西林、四环素、庆大霉素和恩诺沙星等的耐药率分别达到100%、97.96%、95.92%、89.80%、59.18%和51.02%;而对多黏菌素E和头孢噻呋的耐药率也达到44.90%和32.65%。进一步耐药基因检测结果显示:ESBL耐药基因中blaCTX-M的检出率最高,达到12.24%(6/49);其次为blaSHV,8.16%(4/49);有一株大肠杆菌携带blaTEM基因。其中一株同时携带blaCTX-M和blaSHV。多黏菌素耐药基因mcr-1的检出率达到30.61%(15/49),其中4株同时携带blaCTX-M基因。泰州地区分离大肠杆菌耐药情况和多重耐药现象较为严重,多黏菌素耐药基因mcr-1及ESBL耐药基因blaCTX-M、blaSHV和blaTEM的广泛分布表明这些耐药基因存在快速传播的风险。因此,有必要加强猪场细菌耐药性监测。     

犊牛腹泻大肠杆菌的分离及鉴定

本实验从犊牛腹泻粪便中分离出来的疑似菌株经过分离培养、染色、镜检、多重PCR和小鼠致病性试验等方法分离出致病大肠杆菌,以确定牛群的发病原因,为减少疫病的发生提出恰当的防治措施,并给予牛场合理的用药建议。     

犊牛腹泻大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为确定引起湘西北地区某肉牛养殖场犊牛腹泻发生的致病菌种类并分析其耐药性,采用常规培养、革兰染色镜检和生化试验等方法对致病菌进行分离鉴定,利用药物纸片琼脂扩散法(Kirby-Bauer)对分离菌进行药敏试验。结果表明,引起犊牛腹泻的主要致病菌为大肠杆菌;临床分离的大肠杆菌对头孢哌酮、头孢唑林、米诺环素、头孢曲松4种抗生素敏感;对头孢呋辛和头孢他啶2种抗生素中度敏感;对头孢氨苄、哌拉西林、红霉素、万古霉素、强力霉素、青霉素、氨苄西林、羧苄西林、麦迪霉素、环丙沙星、链霉素、丁胺卡那霉素、头孢拉定、庆大霉素、卡那霉素、苯唑西林、复方新诺明、诺氟沙星、奥复酸、四环素、多西环素、林可霉素22种抗菌药物产生耐药性。分离出的大肠杆菌对多种抗菌药物产生耐药性,研究结果为养殖场科学诊断和治疗犊牛腹泻提供了有效依据。     

致羔羊腹泻大肠杆菌血清型鉴定与耐药性分析

为了分析白城地区致羔羊腹泻大肠杆菌流行的血清型与耐药性,从采集的腹泻羔羊粪便样品127份中分离鉴定得到了56株为致病性大肠杆菌。采用玻板凝集法和K-B药敏纸片法分别检测56株致病性大肠杆菌分离株的血清型分布和耐药性情况。结果显示,56株致病性大肠杆菌分离株属于9个血清型,致病性大肠杆菌分离株以O119、O101、O24为流行的优势血清型;56株致病性大肠杆菌分离株且呈现多重耐药性,对头孢克肟、头孢曲松两种药物的耐药率最低,在12.4%~28.6%之间;对阿米卡星、新霉素、多西环素等7种药物的耐药率在50.0%~78.6%之间;对大观霉素、环丙沙星、氧氟沙星等5种药物的耐药率在82.1%~96.4%之间。     

犊牛腹泻大肠杆菌的分离鉴定和耐药性检测

为了分析南京地区奶牛场犊牛腹泻的原因,对犊牛腹泻病料进行细菌分离培养,获得了27株细菌。本试验对这些细菌进行了培养特性、染色特性、生化特性、血清型鉴定、药敏试验和TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-9型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）基因的检测。结果显示27株细菌均为大肠杆菌,只有1株细菌对头孢噻吩、头孢唑啉和头孢呋辛耐药,且此菌株检测出CTX-M-1型超广谱β-内酰胺酶基因。试验结果表明犊牛腹泻是由大肠杆菌引起的,犊牛腹泻大肠杆菌能产生CTX-M-1型超广谱β-内酰胺酶,导致对头孢类抗生素耐药性的发生。     

江西省猪链球菌的分离鉴定及耐药基因、毒力基因检测分析

为了解猪链球菌临床分离株的生物学特性、耐药基因与毒力基因的携带情况。采集疑似链球菌感染病死的猪肺脏和关节液,用常规方法分离细菌,通过镜检、16S rRNA序列测定分析、分子分型、动物实验鉴定分离菌的生物学特性,用药敏试验进行药物敏感度测定,并利用PCR检测耐药基因及毒力基因。结果可知,从8个养猪场的10份肺脏和关节液中共分离到10株菌,经16S rRNA序列比对和血清分型,10株分离株均为猪链球菌,其中9型7株,1型1株,其余2株为猪豕链球菌和猪生殖道链球菌;小鼠致病性试验结果显示,分离株JXNC1906、JXJJ1904和JXNC1904的毒力较强;毒力基因检测显示,JXNC2103可检出6种毒力基因,JXNC2011株只检出mrp毒力基因,毒力型mrp⁺ef^-gdh⁺sly⁺mmum⁺Orf2⁺2株、mrp^-ef⁺gdh⁺sly^-mmum⁺Or...     

羔羊腹泻的细菌分离与鉴定

2006年12月～2007年1月,新疆阿拉尔市出现3～4次大风,突下几场小雪,气温剧变,在阿拉尔市周围部分团场暴发了以2～7日龄羔羊出现剧烈腹泻,引起大批死亡.病羊低头拱背,不吃奶,持续性腹泻,开始是糊状后为水样稀粪,带有黏液,并有恶臭味.     

泰安及周边地区禽大肠杆菌分离鉴定及耐药分析

对泰安及周边地区鸡大肠杆菌病的流行情况和致病性大肠杆菌的耐药性状况进行了比较系统的调查分析：对25株鸡源性大肠杆菌进行了分离纯化、生化试验，同时对所分离的菌株进行了耐药性测定及β内酰胺药物耐药基因TEM的检测等研究。结果表明：大肠杆菌对多种抗生素均产生了耐药性，对β－内酰胺类药物的耐药性也相当严重，对在药敏试验中检测出对头孢菌素类药物不敏感的菌株进行TEM基因检测，发现这些菌株均含有耐β-内酰胺酶耐药基因，与Genebank上登录的其他耐β-内酰胺酶耐药基因序列的同源性达到97％以上，仅存在个别的碱基突变。通过研究以期探明地区鸡源性大肠杆菌病的流行情况和细菌的耐药现状．从而为有效控制鸡大肠杆菌病的发生流行提供可靠的理论依据，以便制订出较为科学合理的预防和治疗措施，以提高养殖效益。