纤维素降解细菌的分离鉴定和筛选方法的研究

[目的]探索有效筛选纤维素降解细菌的方法。[方法]采用CMC-Na平板分离筛选具有高纤维素酶活性的细菌菌株并通过分子生物学手段对其进行鉴定。[结果]从秸秆和土壤中分离筛选获得了2株具有较高纤维素酶活性的细菌菌株xg1和h10,通过总DNA提取、PCR扩增,经16S rDNA测序及序列分析初步鉴定它们分别为枯草芽胞杆菌和蜡状芽胞杆菌。设计了一种根据水解透明圈直径的大小以初步确定菌株产酶活力高低的方法,发现菌株产酶酶活与透明圈直径之间呈现一定的函数关系。[结论]用CMC-Na平板筛选方法,可避免大量的盲目无效劳动,大大提高获得纤维素酶高产菌株的机率,是较好的筛选纤维素分解菌的方法。     

秸秆纤维素降解细菌的筛选及产酶条件优化

从富含腐烂秸秆的土壤中分离、筛选出降解纤维素较为有效的细菌,鉴定其类别,并对其产酶条件进行优化研究.利用羧甲基纤维素钠水解圈法、滤纸崩解法、酶活测定法筛选菌株,并对秸秆液体产酶培养基中不同秸秆长度、培养时间、氮源、氮源投加量和培养基初始pH对酶活性的影响进行了研究.结果筛选出秸秆纤维素降解能力较强的两株菌株XY2和XY6.经鉴定XY2属于伯克霍尔德菌属(Burkholderia mimosarum),XY6属于肠杆菌属(Enterobacter).菌株XY2的最优产酶条件为:温度30℃,培养基初始pH为6.0,碳源为4 cm长度的水稻秸秆或小麦秸秆,氮源为0.5％硫酸铵;菌株XY6的最优产酶条件为:温度30℃,4 cm长度秸秆段为碳源,而在以水稻秸秆为惟一碳源时,最适氮源为0.5％的硫酸铵、培养基初始pH为6.0,以小麦秸秆为惟一碳源时最适氮源为0.5％的硝酸钠、培养基初始pH为8.0,氮源为5‰硝酸钠或硫酸铵,且在一周之内酶活性变化较小.     

秸秆纤维素降解细菌的筛选及其产酶条件的研究

用稀释平板法在羧甲基纤维素平板培养基和纤维素刚果红平板培养基上,从土壤中分离出1株纤维素酶活力较高的耐热细菌H-5,初步鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis).对该菌株的液体发酵产纤维素酶的条件经行了研究,结果表明:菌株H-5产纤维素酶的最适培养温度为40℃,内切酶活力(CMCase)和滤纸酶活力(FPase)最高可达27.14U和22.17U.最佳培养时间为3d,内切酶活力(CMCase)和滤纸酶活力(Fpase)最高可达26.38U和20.14U,最适初始pH值为6～6.5,内切酶活力(CMCase)和滤纸酶活力(FPase)最高可达24.08U和21.96U,最适摇床转速为150 r·min-1,内切酶活力(CMCase)和滤纸酶活力(FPase)最高可达25.34U和20.67U.     

废弃菌渣中纤维素降解细菌的筛选及其降解特性分析

【目的】研究羧甲基纤维素钠（CMC-Na）和纤维素粉对纤维素降解细菌筛选结果的影响,为废弃食用菌菌渣的综合利用提供参考依据。【方法】分别以CMC-Na和纤维素粉为唯一碳源,采用刚果红染色法从废弃菌渣中筛选出具有纤维素降解性能的细菌,利用形态学和分子生物学对其进行鉴定,通过酶活力测定和滤纸崩解试验对各菌株的纤维素降解特性进行对比分析。【结果】从CMC-Na固体培养基分离纯化获得的34株细菌中有7株具有较好的纤维素降解性能,经鉴定主要是芽孢杆菌（Bacillus sp.）、枯草芽孢杆菌（B. subtilis）和解淀粉芽孢杆菌（B. amyloliquefaciens）,而从纤维素粉固体培养基分离纯化获得的36株细菌中有7株具有较好的纤维素降解性能,经鉴定主要是高山芽孢杆菌（B. altitudinis）、甲基营养型芽胞杆菌（B. methylotrophicus）、解淀粉芽孢杆菌、解淀粉芽胞杆菌植物亚种（B. amyloliquefaciens subsp.plantarum）、沼泽芽孢杆菌（B. vallismortis）、贝莱斯芽孢杆菌（B. velezensis）和芽孢杆菌。通过酶活力测定试验和滤纸条崩解试验发现,g31菌株在7 d内能将滤纸崩解成糊状,该菌株具有最高的滤纸酶（FPase）和内切葡聚糖酶（CMCase）活力,分别为33.14和394.41 U/mL,而C23菌株具有较高的β-葡萄糖苷酶（β-Gase）活力,为118.12 U/mL,g29菌株具有较高的外切葡聚糖酶（Cex）活力,为1.22 U/mL。【结论】以纤维素粉为碳源分离筛选得到的纤维素降解细菌种类更丰富,具有更好的滤纸崩解效果和更高的酶活性能,可为纤维素降解提供优质的菌种资源。     

嗜碱纤维素分解细菌的筛选·鉴定及酶活分析

[目的]从新疆某棉浆废水生化处理系统中分离具有纤维素分解能力的耐碱细菌,分析其物种多样性及纤维素分解酶活性,为生物法处理碱性、纤维素含量高的废水提供菌株。[方法]采用4种特异性碱性培养基分离耐碱细菌,采用刚果红染色法对其中纤维素分解菌进行筛选,通过16S rRNA基因序列分析和生理生化试验对纤维素分解细菌进行初步分类鉴定,采用DNS法对其进行酶活测定。[结果]从各类样品中分离出50株耐碱细菌,筛选出12株纤维素分解细菌,其中有7株芽孢杆菌(Bacillus)、2株涅斯捷连科氏菌(Nesterenkonia)、1株耐盐短杆菌(Brevibacterium halotolerans)、1株假单胞菌(Pseudomonas)、1株另类希灭氏菌(Alishewanella),大部分菌株的最适pH为11～12,且具有良好的耐盐性和纤维素分解酶活力。菌株49228和49239分别与Nesterenkonia flava CAAS 251(T)、Pseudomonas indoloxydans IPL-1(T)的最大相似性为97.71%和98.5%,疑似为潜在的新物种。[结论]该结果初步明确了棉浆废...     

1株纤维素降解细菌的筛选及产酶条件研究

从长期富含枯枝落叶的土壤中筛选出1株纤维素降解细菌B3,经测定,该菌产纤维素酶最适宜的pH值是8,温度是37 ℃;玉米秸秆、牛肉膏可明显促进纤维素酶的合成.     

高温纤维素降解菌的筛选和酶活性测定及鉴定

以滤纸条和羧甲基纤维素钠为碳源,从牛粪堆肥中分离出6株能降解纤维素的高温细菌,对其进行了简单染色和革兰氏染色,对各菌株进行了透明圈测定、纤维素酶活性测定和滤纸条崩解试验.结果表明:大部分菌株可以在纤维素-刚果红平板上快速生长,透明圈形成速度达到8～10 mm·d-1.酶活性最高的菌株A-3在接种后16 h酶活性为1.21 mg·mL-1(30 min).部分优良菌株能在3 d内将滤纸条完全降解.为确定菌株A-3的分类学地位,PCR扩增后测定其16S rDNA基因序列,在GenBank中进行同源性比较,并与一些相关细菌构建系统发育树,结合其形态特征和生理生化特征,初步鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).整体来看,筛选到的菌株分解纤维素的能力强,环境适应能力高,在纤维素类物质污染的治理中具有潜在的应用前景.     

一株纤维素降解菌的筛选与鉴定

从落叶覆盖的腐殖层土壤中富集、分离得到12株纤维素降解菌,从中筛选出一株高效降解菌(X10),研究其最适宜的培养条件为:配制以葡萄糖+微晶纤维素(1∶1)为碳源、以蛋白胨+牛肉膏(1∶1)为氮源的培养基,pH值7.5,30℃下培养40 h,测得纤维素降解酶酶活可达到67.44 U。通过对其16s rRNA测序鉴定,该菌与氧化微杆菌(Microbacterium oxydans)有99%的同源性。纤维素降解菌的选育可为高效生产纤维素酶提供新的菌种来源。     

低温下降解阿特拉津的细菌菌株的筛选鉴定和降解特性

从吉林市农药厂排污口和长春市裴家垃圾场渗滤液中分离、筛选出2株能够在低温条件下（10℃）高效降解阿特拉津的菌株L1和N8．对其进行鉴定并研究了其降解特性。结果表明：经Biolog细菌鉴定系统鉴定两株菌分别为深红酵母菌（Rhodotomla glutinis）和嗜麦芽糖寡养单胞菌（Burkholderia glumae）;通过室内降解条件优化确定2株菌对10mg·L^-1 AT最佳降解条件：初始pH为7,碳源为葡萄糖,L1的接种量为10mE（1．53×10^8个）,N8的最佳接种量为2mL（2．48×10^8个）,第15d最大降解率L1为80．7％,N8为73．6％。在最佳降解条件下,L1和N8对初始浓度为5、10、15、20、25mg·L^-1阿特拉津的生物降解反应多数符合一级反应动力学方程．半衰期3．10d．从而为生物降解阿特拉津提供了优势菌种。     

纤维素降解菌的筛选、鉴定和糖化水平研究

将前期从木薯生境中分离、保存的298个菌株,通过平板测试,筛选到57个可产纤维素酶活的菌株,其中酶活性效果最好的菌株(水解圈最大,将其赋值得分为3)所占比例为40.9%,酶活性依次减弱的菌株所占比例(赋值得分为2和1)分别占27.9%和24.6%。采用DNS法测定57个菌株的糖化水平和酶活力,结果显示,10株细菌具有较好潜力降解纤维素,其中菌株HWY-3-9的糖化和酶活力最好,产糖量为0.1852 mg/m L,酶活力为0.0012 U/m L,经鉴定为解淀粉芽孢杆菌。     

新疆寒冷地区腐木中产纤维素酶菌株的筛选与低温产酶特性

为筛选出能在低温条件下高效降解纤维素的菌株,提高秸秆在低温条件下纤维素的降解速度,以新疆寒冷地区腐木为试验材料,对低温纤维素降解菌进行筛选,在4℃条件下筛选得到4株可在低温下生长且具有纤维素降解作用的真菌,通过形态学和分子生物学的方法对低温菌进行鉴定,分别为产黄青霉(Penicilli-um chrysogenum)、...     

石油降解菌筛选鉴定及耐受性分析

试验从污泥中筛选3株高效石油烃降解菌m_1,m_2,m_3,对原油最高降解效率达73%,16S rDNA鉴定结果表明,m_1为Citrobacter柠檬酸细菌属,m_2为Tatumella塔特姆菌属,m_3为Kluyvera克吕沃尔氏菌属。分析3株石油降解菌耐受性,结果表明,m_2耐强碱性;m_1、m_2耐较高浓度盐;m_2在高浓度Cr中生长;m_3在高浓度Hg、Cd、Pb中较好生长。     

高效苯胺降解菌筛选方法研究

通过选择性富集、筛选，得到３株可以利用苯胺作为惟一碳源生长的菌株，经初步鉴定，它们分别为黄杆菌属（Ｆｌａｖｏｂａｃｌｅｒｉｕｍ ｓｐ．）、假单胞菌属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ．）和不动细菌属（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）．经过混合菌种处理苯胺，在４８ｈ中２０４ｍｇ．Ｌ＾－１苯胺的去除率达９４．２％，染料废水中的苯胺（１４８ｍｇ．Ｌ＾－１）去除率为８１．６％。效果良好。可以认为，筛选出的     

彩虹明樱蛤的低温保活研究

对彩虹明樱蛤Moerella iridescens在不同温度、不同贮藏方式、不同湿度条件下进行低温保活试验，结果表明：彩虹明樱蛤在1－3℃条件下保活效果最好，保活3d后的存活率为92％；放在塑料筐内的彩虹明樱蛤，堆放比平铺效果好；彩虹明樱蛤低温保活受湿度的影响很大，在100％霜对湿度条件下保活效果最好。     

花生化感物质降解菌的筛选、鉴定与降解特性研究

为筛选高效化感物质降解菌,以花生根系分泌物中的化感物质苯甲酸作为唯一碳源,采用富集培养和稀释平板法从连作花生长期定位试验地的健康花生植株根际土壤中筛选高效花生化感物质降解菌,经形态观察、生理生化分析和16S rDNA序列同源性比较以及系统发育分析对降解菌进行鉴定,并通过单因素试验对降解菌进行降解特性研究。结果表明:筛选到的2株高效降解菌分别为木糖氧化无色杆菌(Achromobacter xylosoxidans HJ-2)和硝基还原假单胞菌(Pseudomonas nitroreducens HJ-3)。降解菌HJ-2降解的适宜pH为6.0～9.0,适宜温度为30～45℃,适宜NaCl浓度为0～6%;降解菌HJ-3降解的适宜pH为6.0～8.0,适宜温度为30～35℃,适宜NaCl浓度为0～4%。两株降解菌都能够降解苯乙酮、硬脂酸、棕榈酸、乳酸、3,5-二甲基苯甲醛和丙三醇等化感物质。研究表明,降解菌HJ-2和HJ-3对苯甲酸有显著降解效果,两个菌株均具有广谱降解化感物质的特性,且降解菌HJ-2对不良环境适应能力较强。     

耐低温玉米秸秆降解菌群的优化及其效果

为适应中国东北地区年平均气温低、冻融频繁的气候特点,优化构建能在低温环境下高效降解秸秆的菌群,通过宏基因组测序分析原始耐低温秸秆降解菌群JZ5中鞘氨醇杆菌(Sphingobacter)、节杆菌(Arthrobacter)、黄杆菌(Flavobacterium)、地杆菌(Geobacter)、代尔夫特菌(Delfteia)和鞘氨醇单胞菌(Sphingosphinomonas)共6个菌属间的相关性,简化原始菌群JZ5组成。结果表明,优化后的菌群CJZ1、CJZ2在15 ℃培养12 d后,pH值相较初始值分别提高0.76和0.66,秸秆降解率较原始菌群分别提高0.47和0.25百分点,差异不显著;同时,CJZ1、CJZ2的漆酶、木质素过氧化物酶活性峰值显著下降,但纤维素酶活性峰值分别提高43.66%、37.99%,半纤维素酶活性峰值分别提高21.40%、12.91%,说明优化后的菌群玉米秸秆降解潜力显著升高。试验结果可为菌群的优化构建提供新的思路,并为低温环境下秸秆的高效降解提供优质菌群。     

低温胁迫下小兰屿蝴蝶兰叶片转录组分析

实验研究了不同温度处理下小兰屿蝴蝶兰叶片组织的基因表达水平。取生长状态相同的10株小兰屿蝴蝶兰,实验组4℃处理24h,以室温下处理的小兰屿蝴蝶兰为对照进行转录组测序分析,通过采用GO数据库、KEGG数据库比对,对差异表达基因的功能、以及参与调控路径的分析。结果显示低温胁迫下共分析获得2865个差异基因,其中有471个为上调基因,有2394个为下调基因。GO功能注释分析可以将其分为生物过程、细胞组分、分子功能三大类,61分支;KEGG通路分析结果得知,差异表达基因注释到125个不同代谢通路中,其中比较多的差异基因富集于代谢过程、次级代谢物的生物合成、核糖体的代谢通路中。实验结果对于培育抗冷性蝴蝶兰具有一定的指导意义。     

低温胁迫下番荔枝叶片若干生理生化指标的变化

通过对从台湾省引进的细鳞种和粗鳞种番荔枝叶片在不同低温胁迫下的生理生化指标的测定,来探讨番荔枝的耐寒性与能忍受的临界低温.结果表明:2个品种番荔枝忍受低温的临界温度为1℃;低温持续时间对临界低温有影响,细鳞种番荔枝于3℃处理18 h的相对电渗率与1℃处理6 h的相近;细鳞种番荔枝束缚水和自由水的比值、可溶性蛋白质和可溶性糖含量均高于粗鳞种番荔枝,其耐寒性略强于粗鳞种番荔枝.     

萱草根茎低温胁迫转录组分析

低温胁迫是萱草育种和生产中最严重的非生物胁迫之一.该研究以耐冷型和冷敏感型萱草低温处理前后的根茎为材料,利用转录组测序(RNA-seq)技术,比较了耐冷型和冷敏感型萱草在低温胁迫下的基因表达差异.结果表明,4个样品获得的高质量clean reads均大于35880734条;低温处理后,耐冷型萱草差异表达基因数量多于冷敏...