抑制素基因免疫对母羊生殖内分泌的影响

用抑制素基因重组质粒（pCIS）免疫生产母羊,剂量分别为每只0．2mg、0．4mg和0．8mg,以生理盐水为对照。结果表明：免疫组抗抑制素抗体阳性率达46．7％。加强免疫后第45天,免疫组的促卵泡素（FSH）水平显著高于对照组（P〈0．05）。首次免疫后第20天与加强免疫后第45天抗体阳性羊的促卵泡素水平显著高于抗体阴性羊（P〈0．05）。与对照组相比,免疫组的雌激素（E2）与孕激素（P）水平无显著变化（P〉0．05）。抑制素基因免疫能调节绵羊的促卵泡素水平,但对雌激素与孕激素的水平无显著影响。     

抑制素基因免疫诱导单胎绵羊孪生的研究

应用抑制素基因免疫重组质粒 (PCIS)免疫绵羊 ,首次免疫后 ,绵羊能够产生抗抑制素抗体 ,加强免疫后抗体增加显著 (P <0 0 5 ) ,免疫羊的抗体阳性率可达 4 6 7%。免疫组与对照组促卵泡素 (folliclestimutatinghormone ,FSH)的含量在加强免疫第 4 5天时差异显著 (P <0 0 5 )。在首次免疫第 2 0天与加强免疫第 4 5天 ,抗体阳性羊的促卵泡素含量显著高于抗体阴性羊 (P <0 0 5 )。免疫羊的双羔率达 39 2 % ,显著高于对照组 (P <0 0 5 ) ,比对照组提高 2 9 2 %。     

抑制素基因免疫对南阳黄牛生殖激素的影响

选择40头南阳黄牛,用3.0 mg抑制素基因重组质粒(pCIS,免疫组,n=30)或同剂量的生理盐水(对照组,n=10)间隔21 d注射2次,分别在首次免疫当天、首次免疫后第10天和第21天、加强免疫后第10天和第45天收集血清,应用放射免疫法(RIA)测定处理后不同时期血清中激素水平.结果表明:在5个采血时间点内,加强免疫后第10天抗体阳性牛比率最高,为37.5%,与其他采血时间点有显著差异.免疫组促卵泡素(FSH)平均含量比对照组高,但差异不显著;17-β雌二醇(E2)和孕酮(P4)水平在加强免疫后2组有显著性差异.另外.抑制素抗体阳性牛的FSH、E2和P4比阴性牛高,但差异不显著.这些结果说明抑制素基因重组质粒可促进肉牛产生特异性抗体,且对FSH、E2和P4水平有影响.     

主动免疫抑制素对山羊繁殖性能的影响

选取24头健康母雷州山羊平分成两组,分别在试验第1 d、第25 d和第49 d主动免疫抑制素重组蛋白,免疫原含量分别为2.0、1.5、1.5 mg/只,对照组用等量小牛血清蛋白(BSA)替代。免疫前两周用孕酮阴道海绵栓处理,免疫前一天撤去。最后1次免疫后20 d和30 d分别对山羊注射氯前列烯醇0.5 mg/只。在试验第0 d、第20 d、第40 d和第60 d进行颈静脉采血,在母羊第1次发情后摘取两侧卵巢计黄体数和各类型卵泡数,并称卵巢重。试验结果显示,经过初次免疫和两次加强免疫,山羊体内快速产生高水平抗抑制素抗体,伴随抗体水平的升高,血浆促卵泡激素(FSH)水平也逐渐升高,在加强免疫后显著高于对照组(P0.05),并且免疫组的黄体数显著和卵泡总数(P0.01)极显著高于对照组。结果表明疫抑制素基因工程苗可有效提高山羊排卵率。     

双拷贝抑制素基因免疫对肉牛卵泡和黄体的影响

 【目的】探讨不同剂量的双拷贝抑制素pcISI基因免疫对肉牛生殖能力的影响。【方法】将58头同期发情肉牛随机分为6组, 每组肉牛分别注射0.75（T1）、1.5（T2）、2.25（T3）、3.0 mg/头（T4）pcISI质粒、3.0 mg/头 pcMV-S空质粒（C1）和3 mL/头 生理盐水（Ｃ2）,初次免疫21d后进行加强免疫,以探讨抑制素pcISI基因疫苗对肉牛卵泡和黄体发育的影响。【结果】4个剂量组的大卵泡数均高于对照组,除了T1外,其它3个剂量组均与对照组差异显著（P＜0.05）;T3和T4的中卵泡数均高于对照组,且差异显著（P＜0.05）;T3和T4的小卵泡数均高于对照组,且差异显著（P＜0.05）。无论左侧还是右侧,各剂量组成熟卵泡直径均高于对照组,除了T1外,其它3组两侧成熟卵泡均与对照组差异显著（P＜0.05）。无论左侧还是右侧,4个剂量组黄体直径均高于对照组,且均与对照组差异显著（P＜0.05）;T3黄体最大,T1最小,且T3与T1差异显著（P＜0.05）。加强免疫后10 d（BM10）抑制素抗体与成熟卵泡大小相关显著（r＝0.629,P＜0.05）,与黄体大小相关极显著（r＝0.651,P＜0.01）。【结论】双拷贝抑制素pcISI基因免疫可促进肉牛卵泡和黄体发育,2.25mg为最佳免疫剂量,抑制素抗体水平与卵泡和黄体发育有一定的相关性。     

抑制素α(1～32)基因免疫对大鼠卵泡发育和生殖激素的影响

 选择 40只 3 0日龄雌性大鼠分为 4组 ,分别用含重组抑制素α(1～ 3 2 )基因真核表达质粒pcINH 0 μg(对照组 )、15μg(试验组 1)、2 5μg(试验组 2 )、40 μg(试验组 3 )的脂质体进行主动免疫 ,间隔 2 0d后用不含脂质体的重组基因质粒加强免疫 1次。结果发现 ,抗体阳性鼠占 50 % (13 / 2 6) ,但加强免疫 10d后的抗体P/N值没有升高 ,而且免疫剂量的增加并没有提高阳性鼠的比例 ;抗体阳性鼠卵巢上的成熟卵泡数比阴性鼠多 2 .3 ,但统计差异不显著 (P >0 .0 5)。首次免疫 10d后阳性鼠血浆FSH浓度显著升高 (P <0 .0 5) ;但血浆雌二醇水平无显著差异 (P >0 .0 5)。加强免疫 10d后血中促卵泡素水平没有升高。本试验结果证明 ,应用重组抑制素真核表达质粒免疫动物可以产生抗抑制素抗体。     

生长抑素DNA疫苗对湖羊羔羊生长和相关激素的作用——佐剂效应

选择60只断奶湖羊母羔羊,分为6组,1～5组为免疫组,分别用pES/2SS pE-CpG、pES/2SS 细菌DNA、pES/2SS-GMCSF、pES/2SS脂质体和pES/2SS免疫,第6组为对照组.结果显示,首次免疫4周和加强免疫2周后,细菌DNA佐剂组的抗生长抑素抗体水平显著高于pES/2SS单独免疫组(P＜0.05),其抗体阳性率也最高,达50%.比较全期14周免疫羊的体质量增加情况,最优为pE-CpG佐剂组,其次为细菌DNA佐剂组,分别比对照组高33.0%和31.6%(P＜0.01),且显著高于pES/2SS单独免疫组(P＜0.05).加强免疫2周后,免疫组GH和IGF-Ⅰ水平显著高于对照组(P＜0.05),抗体阳性羊的GH和IGF-Ⅰ水平极显著高于抗体阴性羊(P＜0.01).结果表明:几种佐剂配合pES/2SS免疫,产生了免疫佐剂效应,能增强生长抑素DNA疫苗的免疫效果.     

生长抑素DNA疫苗对湖羊羔羊生长和相关激素的作用——佐剂效应

选择60只断奶湖羊母羔羊,分为6组,1～5组为免疫组,分别用pES/2SS+pE-CpG、pES/2SS+细菌DNA、pES/2SS-GMCSF、pES/2SS脂质体和pES/2SS免疫,第6组为对照组.结果显示,首次免疫4周和加强免疫2周后,细菌DNA佐剂组的抗生长抑素抗体水平显著高于pES/2SS单独免疫组(P＜0.05),其抗体阳性率也最高,达50%.比较全期14周免疫羊的体质量增加情况,最优为pE-CpG佐剂组,其次为细菌DNA佐剂组,分别比对照组高33.0%和31.6%(P＜0.01),且显著高于pES/2SS单独免疫组(P＜0.05).加强免疫2周后,免疫组GH和IGF-Ⅰ水平显著高于对照组(P＜0.05),抗体阳性羊的GH和IGF-Ⅰ水平极显著高于抗体阴性羊(P＜0.01).结果表明:几种佐剂配合pES/2SS免疫,产生了免疫佐剂效应,能增强生长抑素DNA疫苗的免疫效果.     

抑制素免疫对崇明白山羊公羔羊生殖发育的影响

利用重组抑制素对崇明白山羊雄性断奶羔羊(n=6)在第0天、第21天、第42天、第63天共进行4次免疫,探讨抑制素免疫对其睾丸发育、激素水平及生殖相关基因表达量的影响。结果表明:试验期间,免疫组抑制素抗体水平均显著高于对照组;在试验的第84天阉割时,免疫组和对照组试验羊在体重[(21.87±2.19)kg vs(23.58±5.13)kg]、阴囊周长[(20.95±0.74) cm vs (21.57±1.65) cm]、睾丸质量[(56.88±4.96) g vs(62.99±4.17)g]方面无显著差异;睾丸组织石蜡切片分析表明,免疫组和对照组试验羊在睾丸组织学上没有显著差异;血清卵泡刺激素(FSH)及睾酮(T)水平在二免后7 d免疫组显著高于对照组,其余采样时间无显著差异;血清促黄体生成素(LH)水平免疫组和对照组无显著差异;qRT-PCR检测结果表明,免疫组睾丸组织染色体联会相关基因Dmrtc2表达量极显著高于对照组(3.04 vs 1.00),性腺发育相关基因SOX30基因表达量显著高于对照组(1.48 vs 1.00),雄激素受体基因AR表达量显著低于对照组(0.59 vs 1.00),而FSH受体基因FSHR、LH受体基因LHR、精子发生相关基因GPx4以及减数分裂相关基因DDX4基因表达量两组之间没有显著差异。综上所述,抑制素免疫能短暂提高崇明白山羊FSH及T水平,提高睾丸Dmrtc2、SOX30基因的相对表达量,但对体重、LH激素水平、睾丸质量、睾丸组织学形态、睾丸FSHR、LHR等基因水平无显著影响。     

人抑制素合成肽与猪精液抑制素提取物主动免疫对母羊生殖激素妊娠及产羔的影响

研究了抑制素主动免疫对母羊促卵泡素（ＦＳＨ）、促黄体素（ＬＨ）、孕酮（Ｐ）、雌二醇（Ｅ２）以及妊娠、产羔的影响。１５只发情季节考力代母羊平均分成３组：人抑制素α亚基（１－２６）Ｔｙｒ·Ｇｌｙ合成肽免疫组（Ｈ组）、猪精液抑制素免疫组（Ｓ组）和对照组（Ｃ组）。Ｈ组在初次免疫后即产生了抑制素抗体,第２次加强免疫后抗体滴度最高可达１∶６４０００。Ｓ组和Ｃ组均未产生可与人抑制素合成肽结合的抗体。Ｈ组母羊在第一次加强免疫后,血清ＦＳＨ和Ｐ的水平显著高于Ｃ组（Ｐ＜０．０５）。Ｓ组母羊Ｅ２浓度在初次和第一次加强免疫后显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）。各组血清ＬＨ水平未有显著变化。Ｈ组和Ｓ组母羊妊娠期分别为１４８．６±１．６７ｄ和１５０．４±１．５２ｄ,受胎率１００％,与Ｃ组无显著差异。Ｈ组产羔率比Ｃ组增加４０％。结果提示,抑制素主动免疫在一定程度上免疫中和了抑制素的某些旁分泌或自分泌作用。     

生长抑素基因免疫对湖羊羔羊生长及GH和IGF-Ⅰ的影响

为探讨生长抑素DNA疫苗免疫湖羊的效果,将生长抑素(SS)与乙肝表面抗原(S)基因融合构建真核表达质粒pES/2SS,分别与pE-CpG质粒、细菌DNA、脂质体粗品配合及重新构建的pES/2SS-GMCSF免疫断奶母羔羊,4周后以相同剂量加强免疫1次。结果显示,免疫组的抗体水平高于对照组(P<0.05),首次免疫4周和加强免疫2周后,细菌DNA佐剂组的抗体水平高于生长抑素单独免疫组(P<0.05),其抗体阳性率也为各免疫组最高。全期免疫组抗生长抑素抗体阳性率达36.0%;免疫羊的增重比对照组高18.82%(P<0.01)。加强免疫后2周,免疫组的GH和IGF-Ⅰ水平显著高于对照组(P<0.05),抗体阳性羊的GH和IGF-Ⅰ水平显著高于抗体阴性羊(P<0.01)。分析第2、4、6和10周所检测的各免疫组湖羊生长抑素抗体P/N值、GH、IGF-Ⅰ及周增重之间的相关性,发现生长抑素抗体与GH、IGF-Ⅰ、周增重显著相关(P<0.01),周增重与生长抑素抗体(P<0.01)、GH(P<0.01)、IGF-Ⅰ(P<0.05)显著相关。结果表明:SS基因免疫产生SS抗体,有效中和了内源性SS,影响了相关激素的分泌,促进羔羊生长。     

非抗性筛选抑制素基因疫苗免疫对奶牛产后子宫复旧的影响

将24头产后7 d的荷斯坦奶牛随机分为4组,高、中、低剂量免疫组(记为T1、T2、T3)分别注射1010、109、108 CFU/mL无抗性基因的抑制素真核表达质粒基因疫苗(重组菌C500(pXAIS))各3 mL,对照组(CK)注射10%生理盐水3 mL。初次免疫28 d后进行加强免疫。用B超诊断仪检测产后奶牛子宫恢复情况。结果表明:加强免疫能提高抗抑制素抗体P/N值,各免疫组P/N值均高于对照组,其中T1和T2组均与对照组差异显著(P0.05),加强免疫7 d,后T1组抗体阳性率最高,达83.33%;抑制素基因疫苗免疫30 d内,前21 d子宫颈和子宫孕角恢复较快,后7 d恢复较慢,各免疫组奶牛产后子宫颈恢复时间短于对照组,但差异不显著(P0.05);各免疫组产后子宫孕角恢复时间比对照组短,且T1组的恢复时间(28.75±1.92)d)与对照组((33.75±1.09)d)差异显著(P0.05)。以上结果表明,在本试验条件下,非抗性筛选的抑制素真核表达质粒基因疫苗免疫产后奶牛,加强免疫后能引起较好的免疫应答,且能促进奶牛产后子宫复旧。     

细菌DNA和gm-csf基因对抑制素基因免疫的作用

40只小鼠分为4组,分别注射pC ISI(抑制素质粒)、pC ISI+细菌DNA、pC ISI+pGM-CSF和生理盐水(8.5 g.L-1)。pC ISI剂量为20μg,与佐剂等量混合,2周后加强免疫1次。试验结果表明,细菌DNA佐剂组诱导77.8%(7/9)的个体产生了抑制素阳性抗体,抗体以IgG2α型为主,gm-csf佐剂组产生的抗体以IgG1型为主;基因佐剂联合抑制素基因免疫激发的淋巴细胞增殖能力显著高于抑制素基因单独免疫组(P<0.05);细菌DNA佐剂组阳性鼠的动情期血浆雌二醇高于阴性鼠(P<0.05),免疫对动情期孕酮水平无显著影响(P>0.05)。上述结果表明,细菌DNA和gm-csf能增强抑制素基因的免疫效果。     

主动免疫抑制素提高奶牛超数排卵胚胎产量的研究

 【目的】研究免疫抑制素提高奶牛超数排卵的效率以提高胚胎产量。【方法】免疫组首次免疫抑制素α亚基融合蛋白（1 mg?头-1）与白油佐剂混合乳液,首免后第28、56 d分别进行2次加强免疫,剂量为0.5 mg?头-1。对照组同时注射生理盐水与白油佐剂的混合乳液。在第二次加强免疫后10 d,采用FSH四日递减法进行超排处理,并根据母牛发情表现进行人工授精,试验一使用常规冷冻精液输精,试验二使用分离的雌性精子输精,输精后第7天进行冲胚。【结果】主动免疫抑制素能够有效提高血液抗抑制素抗体效价。试验一,免疫抑制素组头均获胚/卵总数为（15.8±2.8）枚,显著高于对照组（8.3±1.5）枚（P＜0.05）;头均可移植胚胎数为（9.6±3.1）枚,稍高于对照组的（5.8±1.6）枚（P＞0.05）。试验二,免疫抑制素组发情时间早于对照组(P＜0.05);输精后第7天血液孕酮浓度显著高于对照组（P＜0.05）;头均获胚胎总数和头均可移植胚胎数分别为（15.4±1.9）枚和（5.7±0.7）枚,显著高于对照组的（9.1±1.2）枚和（3.1±0.5）枚(P＜0.05);免疫组获得的一级胚胎为（3.8±1.0）枚,占总可移植胚数的58%,显著高于对照组的（0.6±0.2）枚或19.8%(P＜0.05)。【结论】主动免疫抑制素能够促进牛卵泡发育、提高超排效率和胚胎产量,在使用性控精液输精时不仅大幅提高雌性胚胎数量,同时大幅提高胚胎质量。     

热应激对不同品种鸡繁殖性能、血液生殖激素及相关基因mRNA表达量的影响

为探讨热应激对我国地方鸡种与国外培育蛋鸡品种繁殖性能、血液生殖激素及相关基因mRNA表达量的影响,试验选择体况相近的112日龄济宁百日鸡和海兰褐鸡各96只,随机分为适温组((25±0.26)℃)和高温组((38±0.26)℃)2个处理,在人工环境气候舱中饲养,每个处理各设8个重复,每个重复6只,试验持续28 d.测定112、119、126和140日龄时的卵巢重量、卵泡总数和血液生殖激素浓度及生殖轴相关基因mRNA相对表达量.结果表明:1)适温条件下海兰褐鸡的卵巢、总卵泡发育好于济宁百日鸡,而热应激第7天济宁百日鸡和海兰褐鸡只出现明显的卵巢发育受阻、总卵泡数量增生缓慢(P＜0.05).2)在整个热应激期高温组卵泡刺激素(FSH)和促黄体生成素(LH)含量显著下降(P＜0.05),热应激7d后雌二醇(E2)含量显著减少(P＜0.05)、孕酮(P4)含量先升高后显著下降(P＜0.05);促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)含量显著高于适温组(P＜0.05),济宁百日鸡高温组各血液生殖激素水平的变异系数高于海兰褐,且差异不显著(P＞0.05).3)适温组的济宁百日鸡促性腺激素释放激素(GnRH)、催乳素(prolactin,PRL)、卵泡刺激素-β(FSH-β)、促卵泡素受体(LHR)、雌激素受体(ESR)、催乳素受体(PRLR)、卵泡刺激素受体(FSHR)的mRNA表达量均高于海兰褐鸡,但无显著差异(P＞0.05);而高温组济宁百日鸡mRNA表达量除PRL以外,均显著高于海兰褐鸡(P＜0.05).结果提示,地方品种在热应激环境条件下卵巢、总卵泡发育和各血液生殖轴相关激素的分泌调控机能强于外来品种;并且生殖轴相关激素mRNA表达量的变化具有品种效应.     

人抑制素合成肽与猪精液抑制素提取物主动免疫对母羊生殖激素 …

研究了抑制素主动免疫对母羊促卵泡素（ＦＳＨ）,促黄体素（ＬＨ）,孕酮（Ｐ）,雌二醇（Ｅ２）以及妊娠,产羔的影响。１５只发情季节考力代母羊平均分成３组;人抑制α亚基（１－２６）Ｔｙｒ．Ｇｌｙ合成肽免疫组（Ｈ组）,猪精液抑制素免疫组（Ｓ组）和对照组（Ｃ组）。Ｈ组在初次免疫后即产生了抑制素抗体,第２次加强免疫后抗体滴度最高可达１．：６２０００。Ｓ组和Ｃ组均未产生可与人抑制素合成肽结合的抗体。     

抑制素基因免疫黄牛的黄体发育与免疫纯度及剂量的关系

为探讨双拷贝抑制素pcISI基因疫苗纯度和剂量对肉牛黄体发育的影响,将150头同期发情的南阳黄牛随机分为8个试验组和2个对照组,试验组用pcISI按2种纯度、4种剂量(0.75、1.50、2.25、3.00 mg/头)进行免疫处理,2个对照组分别用空质粒和生理盐水进行处理;初次免疫21 d后进行加强免疫。结果表明:无论用高纯度还是低纯度疫苗免疫,2.25 mg/头剂量处理对黄体的作用效果最明显,且抗体水平与黄体发育密切相关,2.25 mg/头抑制素融合表达质粒组的黄体显著大于0.75 mg/头组(P<0.05),抗体阳性牛两侧黄体显著比抗体阴性牛的大(P<0.05)。     

光照对马岗鹅卵泡发育及相关激素mRNA水平的影响

研究了光照对马岗鹅卵泡发育及相关激素基因表达的影响,试验期对照组接受短光照(11 h光:13 h暗),处理组在接受7 d短光照后接受长光照(16 h光:8 h暗).结果表明在整个试验期,对照组产蛋率维持10%以上,处理组则在接受长光照约15 d后产蛋率快速下降并于试验第55 d停产.在处理组接受长光照17 d(试验第25 d)后,与对照组相比,其下丘脑血管活性肠肽(VIP)和垂体催乳素(PRL)的基因表达稍提高(P＞0.05),血浆PRL水平明显高于对照组(P＜0.05),而促黄体素(LH)水平和卵巢大黄卵泡(LYF)数、小黄卵泡(SYF)数则无差异,仅大白卵泡(LWF)数显著低于后者(P＜0.01);在处理组接受长光照45 d后(试验第53 d),其下丘脑VIP和垂体PRL的基因表达显著提高(P＜0.01),且血浆PRL质量浓度显著高于对照组(P＜0.01),LH水平则明显低于对照组(P＜0.05),卵巢上无任何卵泡,对照组的LYF、SYF和LWF数与试验第25 d时相似.整个试验期,长光照对下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)和垂体LH β的基因表达均无明显影响.表明长光照能促进下丘脑VIP和垂体PRL的基因表达,提高血浆PRL水平和抑制卵泡发育.     

黄牛对抑制素pCISI基因免疫的反应性

为分析抑制素基因免疫对黄牛的影响,优化免疫方法,将3.0 mg抑制素真核融合表达质粒pCISI以不同纯度并配以不同的免疫佐剂分2次导入72头母黄牛体内,采用ELISA法检测血样中抗抑制素抗体效价。结果表明:抗体阳性牛占59.72%(43/72);添加佐剂的重组质粒较空质粒组免疫效果明显(P<0.05),普鲁卡因佐剂显著优于脂质体(P<0.05);高纯度疫苗组阳性牛的比例略高于低纯度组,但差异不明显(P>0.05)。这说明应用抑制素质粒pCISI免疫黄牛后可产生抗抑制素抗体。     

小鼠子宫内膜雌激素受体表达规律的研究

为探讨雌激素对子宫内膜容受性的影响,实现主动干预子宫内膜容受性、提高体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的成功率,本研究利用免疫组化法检测了雌激素受体在小鼠发情周期子宫内膜中的表达规律.结果显示,自然发情受孕组、自然发情假孕组(对照组)和超数排卵组小鼠在见栓后第2天,子宫内膜上雌激素受体(ER)表达量3组之间差异不显著(P＞0.05);之后的第4、6、8天,超数排卵组雌激素受体表达量显著高于其他2组(P＜0.05);自然发情受孕组小鼠子宫内膜中ER的表达在第4、6天时显著高于自然发情假孕组(P＜0.05),在第8天时,自然发情受孕组小鼠子宫内膜中的ER阳性率与自然发情假孕组差异不显著(P＞0.05).与自然发情受孕组相比,自然发情假孕组和超数排卵组小鼠子宫内膜容受性下降,窗口期开放延迟,而自然发情假孕组和超数排卵组差异不明显(P＞0.05).以上结果表明,雌激素通过ER对小鼠胚胎着床及窗口期子宫内膜容受性变化具有调节作用.