马立克病肿瘤组织内HSP60表达及生物学作用初步研究

本试验旨在研究HSP60与马立克病肿瘤发生、发展之间的相关性。通过人工感染,建立鸡马立克病肿瘤模型,定期剖杀,利用病理组织学和免疫组织化学方法,检测HSP60与肿瘤细胞定位之间的相关性;设计HSP60 RNA干扰序列,构建重组慢病毒,转染MSB-1细胞,利用流式细胞技术,探索降低HSP60转录表达对MSB-1细胞凋亡水平的影响。结果显示：HSP60在肿瘤细胞的细胞质内强表达;成功构建了HSP60 RNA干扰慢病毒,且5147序列干扰效果最佳;5147序列慢病毒转染48 h时,与对照序列组和空白对照组相比,HSP60转录、表达水平极显著降低（P<0.01）,MSB-1细胞凋亡水平极显著升高（P<0.01）。在马立克病肿瘤发生、发展过程中,HSP60组织细胞定位与肿瘤细胞具有明显的相关性,降低HSP60表达水平能够导致MSB-1细胞凋亡升高,说明HSP60对肿瘤细胞的存活具有重要的生物学作用。     

急性热应激条件下肉鸡组织器官中HSP70表达定位

通过观察热应激条件下肉鸡各组织中的HSP70阳性表达部位分布特点,探讨HSP70对不同组织器官的保护作用。分别在肉鸡40日龄时(选择体重差异不显著健康鸡)进行急性热应激处理,温度处理如下33℃±0.5℃、35℃±0.5℃、38℃±0.5℃各30min,修复2h分别取各处理组鸡只的法式囊、胸腺、心脏、肝脏作HSP70的免疫组织化学染色。各组织的HSP70表达时间及强度为(由强到弱):肝脏、心脏、胸腺、法氏囊。结果表明HSP70具有同源性,抗兔、抗鼠的HSP抗体可以抗肉鸡的抗原。HSP70在各组织器官中的表达定位有时间差异,不同的细胞具有不同的反应性,反应面积由大到小:肝脏、心脏、法氏囊、胸腺。HSP70的定位:肝脏、心脏定位在细胞质中。法式囊、胸腺定位在细胞质与细胞核中。     

马立克病毒感染对鸡体液免疫的影响

为了验证和探讨马立克病毒(MDV)对肉鸡的免疫抑制作用,同时对比研究MDV疫苗和强毒株对机体免疫力的影响,试验通过人工攻毒MDV,建立MD模型,各组SPF鸡于2日龄注射NDV+H9N2 AIV灭活苗,7日龄时以LaSota株NDV弱毒疫苗饮水免疫,在SPF鸡14,21,28,35,42日龄时,各组无菌采血25份,分离血清,利用血凝/血凝抑制试验研究各组ND和H9N2的体液抗体水平。结果表明:在整个试验周期,疫苗对照组和空白对照组NDV和H9N2 AIV抗体水平差异不显著;攻毒组SPF鸡在21~42日龄时,NDV和H9N2 AIV抗体水平显著或极显著低于对照组。     

断奶日龄对仔猪肾脏热休克蛋白基因表达的影响

为研究不同断奶日龄对仔猪肾脏热休克蛋白70(HSP70 mRNA)、热休克蛋白90(HSP90 mRNA)和热休克蛋白27(HSP27 mRNA)基因表达的影响,将24头体重相近的健康的杜长大仔猪按断奶日龄随机分为4组,依次于14日龄、21日龄、28日龄和35日龄断奶,所有试验仔猪于42日龄处死,取样,通过RT-PCR方法检测肾脏中上述三种热休克蛋白基因的相对表达水平。结果表明:14日龄和21日龄断奶组仔猪肾脏HSP70 mRNA的相对表达量显著高于35日龄断奶组(P0.05);14,21日龄断奶组HSP90 mRNA相对表达量显著高于28日龄和35日龄断奶组(P0.05),21日龄断奶组显著低于14日龄断奶组(P0.05);35日龄断奶组HSP27 mRNA相对表达量低于其他日龄断奶组,但差异不显著(P0.05)。说明断奶日龄显著影响仔猪肾脏热休克蛋白mRNA的表达,且随着断奶日龄的推迟肾脏中的HSPs mRNA的相对表达量呈下降趋势。     

运输应激对山羊心的病理损伤及HSP27、HSP70和HSP90表达的影响

运用HE染色法、透射电镜技术、免疫组织化学、免疫印迹和ELISA等方法,探讨不同运输时间对山羊(Capra hircus)心的病理损伤及对热休克蛋白表达的影响,分析公路运输应激2、6 h条件下山羊心的显微结构、超微结构及HSP27、HSP70、HSP90的定位和表达量的变化情况。结果表明运输应激组山羊心肌纤维有程度不一的弥漫性颗粒变性,细胞内线粒体肿胀、破裂,间质水肿、出血、炎性细胞浸润,毛细血管扩张、充血,运输6 h组的病变更严重。HSP27、HSP70、HSP90主要在心肌细胞的细胞质中表达,HSP27和HSP90在细胞核中也有表达,三种蛋白在不同区域的心肌纤维和心肌细胞中分布不均。与对照组相比,运输应激2 h组山羊心HSP27蛋白表达量显著升高,运输应激6 h组HSP27表达量下降;与对照组相比,运输应激2和6 h组HSP70、HSP90蛋白表达量均显著或极显著升高。总之,运输应激山羊心组织细胞发生了病理损伤,心肌细胞急性变性十分明显,运输应激6 h组心肌细胞变性更严重,运输后HSP27、HSP70和HSP90蛋白表达量发生了明显变化,与心的应激损伤存在一定的关联。     

鸡马立克氏病免疫失败的原因及防制对策

马立克氏病是由马立克氏病毒(MDV)引起的鸡的一种淋巴组织增生性疾病,是具有高度接触性和传染性的肿瘤性疾病。未经免疫或免疫失败的鸡群患病后死亡率一般在25%～30%不等,最高可达70%～80%,严重时甚至全群覆灭。自20世纪70年代广泛使用火鸡疱疹病毒(HVT)疫苗以来,本病造成的损失已大大下降。近年来世界各地相继发现毒力极强的马立克氏病病毒,疫苗免疫失败屡有发生,给本病的防制带来了新的问题。本人现将对MD的一些新认识提供给同行,以供参考。1MD免疫失败的原因1.1MDV的早期感染鸡的日龄越小,对MDV敏感性越高。据测定,1日龄雏鸡对MD…     

MDV Meq基因簇miRNAs基因缺失株的致病性

为了探讨Meq基因簇microRNAs(Meq-clustered miRNAs)对马立克氏病病毒(Mareks disease virus,MDV)致病性的影响,本研究将MDV Meq-clustered miRNAs基因缺失株GX0101ΔMeq-miRNAs感染1日龄SPF鸡,并于感染后90d内进行毒株致死率、致肿瘤率、鸡体质量、免疫器官指数和鸡血液中病毒含量等方面的检测。结果显示:1日龄SPF鸡在接种GX0101ΔMeq-miRNAs后90d内累计死亡率和眼观肿瘤发生率分别为4%和8%,与亲本株GX0101BAC相比分别下降了23.5倍和2.5倍;与鸡胚成纤维细胞(chicken fibroblast cells,CEF)阴性对照相比,GX0101△Meq-miRNAs感染鸡在整个试验期间体质量差异均不显著(P0.05);在感染后14~21d,GX0101△Meq-miRNAs组的法氏囊指数和胸腺指数均显著降低(P0.05);与亲本株相比,GX0101△Meq-miRNAs在血液中的含量及导致的显微肿瘤发生率均下降。结果表明:MDV Meq-clustered miRNAs基因的缺失降低了MDV的致病性,Meq-clustered miRNAs具有调控MDV致病性的功能。     

运输应激牛不同组织HSPs mRNA和蛋白表达研究

为了研究运输应激对牛不同组织热休克蛋白HSPs表达量的影响,试验采用实时荧光定量PCR和Western-blot技术,检测短途公路运输3 h后牛外周血淋巴细胞、心脏、肝脏和背最长肌中HSP27、HSP70和HSP90的表达情况。结果表明:3 h短途运输后,与对照组相比,运输应激组HSPs在不同组织中的表达量显著增加(P0.05)。说明HSPs表达量可以作为牛运输应激性状的候选分子指标。     

香苇二石口服液对大鼠试验性热应激的影响

本试验通过检测大鼠肠道中热休克蛋白基因的表达,探究不同剂量香苇二石口服液对热应激的预防和治疗作用。45只健康雄性大鼠随机分为对照组、热应激组、自然恢复组、高剂量预防组、中剂量预防组、低剂量预防组、高剂量治疗组、中剂量治疗组、低剂量治疗组,建立高温应激模型,利用Real time-PCR技术检测大鼠小肠中HSP27、HSP70、HSP90 m RNA的表达变化。结果表明,高温刺激能极显著增加HSPs m RNA的表达量(P<0.01);香苇二石口服液能显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)抑制HSPs m RNA的高表达。表明香苇二石口服液高剂量有极显著预防作用,中剂量有极显著治疗作用。     

IL-17和HSP90在不同牛肝中的定位和定量研究

本试验旨在比较研究不同牛肝组织中IL-17和HSP90的分布及表达差异。分别选取5例健康成年牦牛、犏牛及黄牛,取肝组织,采用HE染色、免疫组织化学染色及实时荧光定量研究肝组织学结构特点、蛋白阳性定位及基因定量表达。HE染色结果显示,肝细胞呈索状排列,肝索之间的肝血窦中有少量的淋巴细胞和枯否细胞;免疫组织化学染色结果显示,IL-17和HSP90在牦牛、犏牛及黄牛肝细胞的细胞质中表达;免疫组化半定量和实时荧光定量的结果一致,在犏牛肝表达量最高,牦牛次之,黄牛最低(P0.01)。IL-17和HSP90基因在牦牛、犏牛和黄牛肝中表达的差异说明具有种属特异性;IL-17和HSP90蛋白半定量阳性结果说明相对于黄牛肝,犏牛和牦牛肝对温差变化等刺激具有更好的适应性。     

温度、渗透度和pH对反刍动物饲料总可溶氮组成及含量的影响

本研究通过两个试验来评估不同饲料原料氮溶解度。试验1评估了豆科植物、油类植物、谷物、黑麦草和青贮类等14个原料。溶解温度为18和38℃,缓冲液pH为6.8和5.0。试验2在38℃添加下采用4个pH(5.0、5.6、6.2和6.8)以及2个渗透度(300和400 mol/L)评估豆饼、豆粕、豌豆、蚕豆和羽扇豆氮溶解度。结果显示:水溶温度由18℃升高至38℃显著提高了大多数原料氮溶解度(P<0.05),显著影响羽扇豆氮溶解度,使可溶性氮占总氮比例由0.53降低至0.17(P<0.05)。pH由6.8降低至5.0,青贮黑麦草和青贮玉米氮溶解度显著升高(P<0.05)。渗透度由300升高至400 mol/L时,豆粕和豆饼氮溶解度显著升高(P<0.05),同时渗透度和pH对其他原料氮溶解度的影响具有显著交互作用(P<0.05)。溶解pH对豆饼、豌豆、蚕豆和羽扇豆蛋白结构具有显著影响(P<0.05),其中pH=6.2~6.8时,7S和11S蛋白比例最高,而11S可溶氮含量降低。结论:溶解pH由6.8将至5.0时降低了大多数饲料原料氮溶解度。这个pH范围显著提高了羽扇豆、蚕豆、豌豆和豆饼非蛋白氮比例,降低了11S蛋白的比例。     

饲料脂肪源对大菱鲆生长、体组成及血清生化指标的影响

本试验以不同脂肪源配制成等氮等脂的7种饲料,对大菱鲆[(27.31±0.10)g]进行40 d的饲养试验,旨在探讨不同饲料脂肪源对大菱鲆生长、体组成、血清生化指标的影响。7种饲料分别添加6%的鱼油(FO)、大豆油(SO)、菜籽油(RO)、花生油(PO)、猪油(L)、鱼油-豆油(1∶1)(FSO)和鱼油-豆油-猪油(3∶4∶3)的混合油(MIX)。每组饲料设3个重复,每个重复12尾鱼。研究结果表明:(1)鱼油-豆油组特定生长率显著高于其他各组,较鱼油组(基础饲料组)提高了10.42%(P < 0.05),猪油组特定生长率最低,较鱼油组降低了19.79%(P < 0.05)。猪油、混合油、花生油组饲料系数分别较鱼油组提高了36.36%、33.33%、25.25%(P < 0.05),其余各组间无显著差异(P > 0.05);(2)饲料脂肪源对大菱鲆鱼体水分、粗脂肪和粗灰分含量影响不显著(P > 0.05),猪油组粗蛋白质含量显著低于鱼油组、菜籽油组和花生油组,其中较鱼油组降低了4.47%(P < 0.05)。摄食不同脂肪源饲料的大菱鲆空壳、内脏和背肌的脂肪含量差异不显著(P > 0.05),猪油组空壳的水分显著高于菜籽油组和混合油组(P < 0.05);(3)各试验组总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇和碱性磷酸酶含量无显著差异(P > 0.05)。猪油组和混合油组的谷丙转氨酶含量显著高于其他各组,较鱼油组分别升高了124.89%和119.94%(P < 0.05),混合油组的谷草转氨酶含量显著高于其他各组,较鱼油组提高了352.51%(P < 0.05),表明猪油组和混合油组鱼体肝脏受到一定程度的损伤。综合以上7种饲料脂肪源对鱼体生长性能、体组成及血清生化指标的影响,鱼油-豆油(1∶1)、豆油和菜籽油可作为大菱鲆饲料合适的脂肪源,而猪油、混合油不适宜作为大菱鲆的饲料脂肪源。     

一株鸡大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及治疗试验

为探究大肠杆菌噬菌体的生物学特性及其治疗效果,本研究采用双层平板法分离纯化大肠杆菌噬菌体,并测定噬菌体的效价、温度稳定性、p H稳定性、感染复数(MOI)、一步生长曲线等生物学特性,以及噬菌体治疗大肠杆菌病的效果。结果显示分离的噬菌体Bp1805最佳MOI为1时,其效价可达2.4×10^10 pfu/m L;噬菌体Bp1805对温度的耐受范围较广,在p H5~p H10范围内非常稳定,该噬菌体潜伏期为20 min,裂解期为50 min。大肠杆菌病治疗试验结果显示,注射噬菌体比口服噬菌体治疗效果好,大肠杆菌病的防治效果与噬菌体治疗方式和治疗时间有关;噬菌体治疗大肠杆菌病效果优于恩诺沙星和硫酸庆大霉素。噬菌体Bp1805能够裂解致病性大肠杆菌,为临床大肠杆菌病的噬菌体防治提供参考依据。     

德州驴NCAPG-DCAF16基因区域多态性与生长性状的关联分析

旨在探讨NCAPG-DCAF16基因区域在德州驴群体中的遗传多态性以及与生长性状的关联性,进而得到显著相关的遗传标记,为德州驴的分子标记辅助选择提供理论基础。本研究采用DNA混池测序技术对NCAPG-DCAF16基因区域的多态性进行检测;基于DNA混池测序结果,运用质谱分型技术对227头德州驴群体中的SNPs位点进行基因型检测,分析基因型与初生、3月龄、6月龄3个时期相关生长性状的关联性。结果表明:1)通过DNA混池测序发现,NCAPG基因上的SNPs位点包括第9内含子上rs1(T>C),第11内含子上rs2(A>G),第19内含子上rs4(C>G),第8内含子上rs5(C>G);DCAF16基因第2外显子发现一个同义突变,即位点rs008(A>G)。2)初生时期的关联分析显示,rs1位点基因型CC个体的平均尻长显著高于CT型个体(P<0.05);3月龄时期各基因型的表型平均值无显著差异(P>0.05);在6月龄阶段,基因型为TT个体的平均胸宽与CC个体相比差异极显著(P<0.01),TT和CT基因型个体的平均管围均显著高于CC个体(P<0.05)。3)rs4位点的关联分析揭示了GG基因型个体在初生时期的平均胸深显著高于GC基因型(P<0.05),3月龄时期各基因型之间的平均表型值无显著差异(P>0.05);CC基因型个体6月龄时期的平均胸宽和管围显著高于GG基因型(P<0.05)。4)rs008位点关联分析结果表明,各基因型之间初生时期的表型值无显著差异(P>0.05);AA、GA基因型个体3月龄时期的体重、体高和尻高都显著高于GG基因型(P<0.05);AA、GA基因型个体6月龄时期的体高和胸围都极显著高于GG基因型个体(P<0.01),GA基因型与GG基因型个体间的胸深、尻高的差异达到极显著水平(P<0.01),GA基因型个体的尻宽显著高于GG和AA基因型(P<0.05)。5)根据连锁不平衡分析结果,rs1、rs2、rs4和rs5的组合基因型在德州驴群体中有5种。关联分析结果揭示了TTAACCCC组合基因型个体6月龄时期的平均胸宽显著高于CCGGGGGG组合基因型(P<0.05)。综上,德州驴群体中NCAPG-DCAF16基因区域5个SNPs位点对生长性状均有显著影响,特别是rs008位点与德州驴体重、体高等重要生长性状极显著相关,可用于德州驴的分子标记辅助选择,提高德州驴育种效率。     

驴源马流产沙门菌的耐药表型及毒力基因检测

为了解驴源马流产沙门菌临床分离株的耐药表型及毒力基因的携带情况,本试验通过K-B药敏纸片扩散法对9株马流产沙门菌进行11种临床常用抗菌药物的敏感性测试,采用PCR方法检测与沙门菌致病性相关的10种毒力基因。结果显示:9株驴源马流产沙门菌存在2种耐药表型,对链霉素耐药率达100%,对阿莫西林耐药率为33%;10种毒力基因中仅traT未被检出,invA、avrA、ssaQ、mgtC、sopB、spvC、spvR、pefA和misL的检出率均为100%。结果表明,驴源马流产沙门菌耐药谱较为单一,但携带的毒力基因为多样性组合。     

蜂胶抗炎功效成分研究

为确定中国杨属型蜂胶的抗炎功效成分,用100ng/ml脂多糖(LPS)和40μg/ml氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)分别诱导脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)损伤。通过SRB法分别检测蜂胶水提物中分离的11种组分和蜂胶乙酸乙酯提取物中分离的8段组分对2种炎症细胞模型细胞存活率的影响。结果表明:蜂胶水提物中的11种组分不同程度的促进2种炎症细胞的细胞存活率,乙酸乙酯提取物中的8段组分也是不同程度的提高2种炎症细胞的细胞存活率。由此可知,蜂胶的抗炎功效成分十分复杂,很可能是多种成分协同功效的结果,而且酚酸类物质发挥了一定的作用。     

淫羊藿多糖醇沉工艺优化及其对巨噬细胞释放NO的影响

旨在优化淫羊藿多糖醇沉条件并研究不同浓度乙醇醇沉的淫羊藿多糖对巨噬细胞释放NO的影响。采用乙醇沉淀法从淫羊藿多糖提取物中获得淫羊藿多糖,在单因素试验基础上,选择浓缩比、乙醇浓度、乙醇体积倍数、醇沉时间为自变量,采用L9(34)的正交试验设计,优化淫羊藿多糖最佳醇沉条件。用浓度为400、500、600、700、800mL/L乙醇醇沉的淫羊藿多糖,采用体外培养法,测定淫羊藿多糖对巨噬细胞释放NO的影响。结果表明,淫羊藿多糖最佳醇沉条件为浓缩比为1∶2,乙醇浓度为800mL/L,乙醇体积倍数为4倍,醇沉时间为12h;每个乙醇浓度醇沉的淫羊藿多糖均具有良好的活性,500mL/L乙醇醇沉的多糖活性最好。结果显示,淫羊藿多糖对巨噬细胞具有良好的刺激作用。     

生长期公母驴生产性能、血清生化指标、胴体性状和肉品质的比较

本试验旨在比较生长期公母驴生产性能、血清生化指标、胴体性状和肉品质的差异性。选取体重(149.50±7.20)kg、胎次相近的7~8月龄健康的断奶德州改良公母驴各10只,按性别分为2组,每组各2个重复,每个重复5头。试验驴按体重的1.5%饲喂精料,粗饲料均为豆秸,精粗比为4∶6。预试期7d,正试期270d。结果表明:1)母驴干物质采食量和平均日增重略高于公驴,但差异不显著(P>0.05);母驴体长、胸宽、出皮率和皮中胶原蛋白含量显著或极显著低于公驴(P<0.05或P<0.01),但母驴胸围显著高于公驴(P<0.05)。2)母驴血清白球比显著高于公驴(P<0.05),而血清碱性磷酸酶活性极显著低于公驴(P<0.01)。母驴和公驴其他血清生化指标差异不显著(P>0.05)。3)母驴胴体率和腹脂率显著高于公驴(P<0.05),肌肉剪切力、大理石花纹评分和游离脂肪酸含量极显著高于公驴(P<0.01)。母驴和公驴其他胴体性状和肉品质指标均差异不显著(P>0.05)。由此可见,在本试验条件下,母驴生产性能、胴体性状和肉品质均优于公驴,但公驴出皮率和皮中胶原蛋白含量高于母驴。     

七味地藿颗粒黄酮的提取工艺优化研究

采用超声波辅助乙醇提取法提取七味地藿颗粒中的黄酮,通过NaNO_2-AL(NO_3)_3-NaOH显色体系应用紫外分光光度法对该方剂中黄酮的含量进行测定,分析提取时间、料液比、超声波功率、乙醇浓度、提取温度等因素的影响,并在此基础上进行正交试验,优化提取工艺参数。结果表明,提取时间为45min,料液比为1∶25,超声波功率为300W,乙醇浓度为600mL/L,提取温度为60℃时,七味地藿颗粒黄酮提取效果最好,提取率为18.45mg/g。该优化工艺条件稳定、可靠,为工业化生产七味地藿颗粒奠定了技术基础。     

硫酸锰和甘氨酸锰对产蛋后期蛋鸡生产性能和蛋壳颜色的影响

试验旨在研究日粮中添加不同锰源对产蛋后期蛋鸡生产性能、蛋壳颜色的影响。试验1在基础日粮(不含锰)中分别添加60、80、100、125 mg/kg硫酸锰(以锰计),125 mg/kg硫酸锰组蛋鸡蛋重显著高于其他组(P<0.05),100、125 mg/kg组蛋壳颜色指数显著好于60、80 mg/kg组;试验2(基于试验1的试验结果),在基础日粮中,试验组分别添加125 mg/kg硫酸锰、100 mg/kg硫酸锰+25 mg/kg甘氨酸锰、80 mg/kg硫酸锰+45 mg/kg甘氨酸锰(以锰计)。试验结果表明:有机锰组合对改善产蛋鸡后期生产性能无显著影响,蛋壳颜色指数也无显著影响(P>0.05),但有提高蛋壳颜色指数的趋势。