HSP27和HSP90在猫不同发育时期子宫的表达规律研究

为了探讨热休克蛋白(HSP) 27和HSP90在不同发育时期猫子宫中的表达情况,试验采用免疫组织化学技术分别检测HSP27和HSP90蛋白在5月龄、10月龄、1岁龄、1. 5岁龄、1. 5岁龄(妊娠20 d)猫子宫中的分布与表达情况。结果表明:HSP27在5月龄和10月龄猫子宫中不表达,在1岁龄、1. 5岁龄和1. 5岁龄(妊娠20 d)猫子宫中表达,不同强度阳性区域出现在腔上皮、腺上皮、固有层、血管内皮和子宫肌层中,妊娠期尿囊绒毛膜弱表达; HSP90在10月龄、1岁龄和1. 5岁龄子宫中未见表达,在5月龄和1. 5岁龄(妊娠20 d)猫子宫中表达,5月龄猫子宫腔上皮和腺上皮呈弱表达,1. 5岁龄(妊娠20 d)猫子宫腔上皮呈强表达,浅层腺上皮中等表达,深层腺上皮和尿囊绒毛膜弱表达,在子宫固有层、肌层和血管内皮未见表达。说明HSP27和HSP90蛋白在猫不同发育时期子宫中的表达具有差异性,提示两种热休克蛋白参与子宫重塑过程中子宫细胞凋亡和细胞增殖等过程。     

HSP90、HSP70、HSP27在不同发育时期猫卵巢的表达规律研究

为了探究HSP90、HSP70、HSP27在不同发育时期猫卵巢的表达规律,试验运用免疫组织化学方法检测了5月龄、10月龄、1岁龄、1.5岁龄(未妊娠)和1.5岁龄(妊娠20 d)猫卵巢的HSP90、HSP70、HSP27蛋白表达情况。结果表明:HSP90在5月龄猫卵巢上为强表达,在10月龄猫成熟卵泡、1岁龄猫初级卵泡、1.5岁龄(未妊娠)猫初级卵泡、1.5岁龄(妊娠20 d)猫黄体与原始卵泡、初级卵泡上弱表达,在1岁龄猫原始卵泡表达较强;HSP70在5月龄、10月龄、1岁龄猫的卵巢各级卵泡和1.5岁龄猫的黄体强表达;HSP27在10月龄猫卵巢中未见表达,在5月龄猫卵巢中各级卵泡呈弱表达,在1岁龄、1.5岁龄(未妊娠)、1.5岁龄(妊娠20 d)猫卵巢中强表达。说明HSP90、HSP70、HSP27在猫卵巢不同发育时期都有不同程度的表达,提示其在卵巢卵泡发育、卵母细胞成熟、黄体形成和退化等过程发挥重要作用。     

Th17细胞和IL-17在小鼠寄生虫免疫中的作用

Th17细胞（T helper 17 cells,Th17）是CD4~＋T细胞分化的亚群细胞之一,能够特异性地分泌细胞因子IL-17（interleukin-17,IL-17）,通过IL-17、IL-21、IL-23等细胞因子介导炎症反应和针对细菌的抗感染免疫,同时在寄生虫免疫中发挥重要作用。     

运输应激对山羊血清和空肠中HSP27、HSP70和HSP90含量的影响

为探讨运输应激对山羊血清和空肠中HSP27、HSP70和HSP90 3种热休克蛋白含量的影响,试验选取12只赣西山羊,随机分为对照组、运输应激2 h组和运输应激6 h组,应用双抗体夹心ELISA法测定山羊血清和空肠中3种热休克蛋白浓度。结果表明:与对照组相比,运输2 h山羊血清中HSP70和HSP90极显著升高(P<0.01),空肠中HSP70和HSP90显著升高(P<0.05),血清和空肠中HSP27有升高趋势(P>0.05);与对照组相比,运输6 h后血清中HSP70和HSP90分别极显著和显著升高(P<0.05和P<0.01),血清中HSP27含量以及空肠中3种蛋白含量均无显著变化(P>0.05);与运输2 h相比,运输6 h后3种蛋白含量都极显著降低(P<0.01)。结果显示,山羊对运输应激在细胞水平的适应性调节与血清中HSP70和HSP90蛋白水平升高有密切联系,运输2 h山羊通过上调HSP70和HSP90对应激导致的空肠损伤发挥细胞保护作用。     

HSP70在小鼠睾丸中定位与表达研究

1974年，Tissiers利用SDS凝胶电泳技术首次证明，热应激能诱导果蝇体内产生一组蛋白质，他把因环境温度升高诱导细胞合成的这组蛋白质，称为热激蛋白(HSPs)。HSPs是动物在不良因素作用下所产生的一组特殊蛋白质，任何应激均可诱导机体的HSPs合成增加，它能使动物迅速适应环境的变化，保护机体不受或少受损害。有研究表明，HSPs在正常细胞内也有表达。HSP70家族成员众多，它们在进化上高度保守，种属间同源性高，可分为热诱导型和非热诱导型。     

IL-17的生物学功能和相关疾病研究

白细胞介素17(Interleukin 17, IL-17)是免疫反应的中枢蛋白,既是免疫反应关键的炎性细胞因子,也是调控细胞凋亡的关键细胞因子。本文从白介素17生物学功能及相关疾病来阐明其在动物体内发挥的作用,为IL-17的研究提供简明扼要的参考资料。     

急性冷应激对阿勒泰羊HSP60、HSP70和HSP90基因mRNA表达的影响

为研究急性冷应激通过影响热休克蛋白含量的变化对阿勒泰羊抗寒性能、生产性能及抗病性能等的影响,试验设置常温组(15℃±2℃)与冷应激组(-25℃±2℃),每组各5只羊,屠宰后分别采集急性冷应激组(冷应激24 h后)和常温组的心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织。采用实时荧光定量PCR技术对HSP60、HSP70和HSP90 mRNA含量变化进行检测,并对HSP60、HSP70和HSP90基因进行同源性分析。结果显示,HSP70和HSP90基因与已有绵羊序列同源性高于99%,而HSP60基因与已有波斯金牛序列同源性高于99%;冷刺激后HSP60基因在心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织中的表达较常温组均升高,且在肾脏中的表达量差异极显著(P0.01);冷刺激后HSP70基因在心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织中的表达较常温组均升高,且在肝脏和肾脏组织中的表达量差异极显著(P0.01);冷刺激后HSP90基因在心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织中的表达较常温组均升高,且在肝脏组织中表达量差异显著(P0.05),而在脾脏和肾脏组织中的表达量差异极显著(P0.01)。表明急性冷应激极大程度地刺激了机体的产热机能,通过通路中的产热相关基因的相互调节使其能量代谢发生改变,从而提高细胞生存率,增强机体对环境胁迫的耐受力,能更好地适应环境温度的变化。试验结果为进一步深入研究急性冷应激对阿勒泰羊机体的影响提供一定理论依据。     

急性冷应激对阿勒泰羊HSP60、HSP70和HSP90基因mRNA表达的影响

为研究急性冷应激通过影响热休克蛋白含量的变化对阿勒泰羊抗寒性能、生产性能及抗病性能等的影响,试验设置常温组（15 ℃±2 ℃）与冷应激组（-25 ℃±2 ℃）,每组各5只羊,屠宰后分别采集急性冷应激组（冷应激24 h后）和常温组的心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织。采用实时荧光定量PCR技术对HSP60、HSP70和HSP90 mRNA含量变化进行检测,并对HSP60、HSP70和HSP90基因进行同源性分析。结果显示,HSP70和HSP90基因与已有绵羊序列同源性高于99%,而HSP60基因与已有波斯金牛序列同源性高于99%;冷刺激后HSP60基因在心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织中的表达较常温组均升高,且在肾脏中的表达量差异极显著（P<0.01）;冷刺激后HSP70基因在心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织中的表达较常温组均升高,且在肝脏和肾脏组织中的表达量差异极显著（P<0.01）;冷刺激后HSP90基因在心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织中的表达较常温组均升高,且在肝脏组织中表达量差异显著（P<0.05）,而在脾脏和肾脏组织中的表达量差异极显著（P<0.01）。表明急性冷应激极大程度地刺激了机体的产热机能,通过通路中的产热相关基因的相互调节使其能量代谢发生改变,从而提高细胞生存率,增强机体对环境胁迫的耐受力,能更好地适应环境温度的变化。试验结果为进一步深入研究急性冷应激对阿勒泰羊机体的影响提供一定理论依据。     

草原红牛肝配蛋白A5基因克隆及其在不同组织中的表达研究

研究旨在克隆中国草原红牛肝配蛋白A5（ephrin A5,EFNA5）基因,并对其进行生物信息学分析,检测EFNA5基因在中国草原红牛不同组织中表达的差异。以中国草原红牛为研究对象,根据GenBank公布的牛EFNA5基因序列（登录号：NM_001076432.1）设计引物,PCR扩增获得EFNA5基因的完整编码区（CDS）序列后进行测序验证,利用分析软件进行序列相似性比对并构建系统进化树;分析对应的氨基酸序列蛋白理化特性并预测蛋白亚细胞定位、蛋白亲/疏水性和磷酸化位点;预测蛋白二级结构并构建蛋白三级结构模型;以实时荧光定量PCR法检测EFNA5基因在中国草原红牛各组织中的相对表达量。结果显示：中国草原红牛EFNA5基因与普通牛和美洲野牛相似性最高,分别为100%和99.8%,与羊、人的相似性分别为95.6%、97.2%,与海豚、鸡、马、猕猴、小鼠和猪的相似性较低,分别为83.6%、85.8%、84.5%、84.9%、84.1%、82.8%;EFNA5基因CDS大小为687 bp,编码228个氨基酸,EFNA5基因编码蛋白的分子式为C₁₁₈₃H₁₇₉₁N₃₁₅O₃₃₉S₁₃,总原子数为3 641,分子质量为26.266 ku,理论等电点为5.97,不稳定系数为49.66,总平均亲水性为-0.313。磷酸化位点预测分析发现,EFNA5蛋白共有27个磷酸化位点;亚细胞定位结果表明,EFNA5蛋白主要位于细胞质（26.1%）、分泌系统囊泡（27.1%）、细胞核（13.0%）、线粒体（13.0%）、质膜（8.7%）、内质网（4.3%）、高尔基体（4.3%）、细胞骨架（4.3%）及液泡（4.3%）中;二级结构主要由α-螺旋、β-转角、β-折叠和无规则卷曲组成,分别占18.9%、30.2%、26.4%和24.5%,与三级结构预测结果相符;EFNA5基因在中国草原红牛不同组织的相对表达量差异较大,在肾脏和胃组织中表达量较高,在肺脏组织中表达量最少。本研究结果可为进一步筛选草原红牛肉质候选基因提供参考。     

MSTN基因在不同月龄滩羊不同肌肉组织中的定量表达研究

[目的]研究MS删基因在不同月龄滩羊不同肌肉组织中的表达差异。[方法]根据GenBank已发表的绵羊MSTN基因序列（NM001009428．1）设计l对引物,以滩羊肌肉组织cDNA为模板,采用实时荧光定量PCR技术（Real—timePCR）检测MS7Yv基因在不同月龄滩羊的背最长肌、腿肌和胸肌中的表达量。[结果]MS驯基因在背最长肌中的表达量最高,其次为胸肌,腿肌中的表达量最低;随着月龄的增加,滩羊3种肌肉组织中的表达量均呈先升高、后降低、再升高的趋势。[结论]不同月龄滩羊肌肉中的MSTNmRNA表达量存在差异．这些差异可能会影响其生长发育和产肉性能等指标。     

运输应激对山羊心的病理损伤及HSP27、HSP70和HSP90表达的影响

运用HE染色法、透射电镜技术、免疫组织化学、免疫印迹和ELISA等方法,探讨不同运输时间对山羊(Capra hircus)心的病理损伤及对热休克蛋白表达的影响,分析公路运输应激2、6 h条件下山羊心的显微结构、超微结构及HSP27、HSP70、HSP90的定位和表达量的变化情况。结果表明运输应激组山羊心肌纤维有程度不一的弥漫性颗粒变性,细胞内线粒体肿胀、破裂,间质水肿、出血、炎性细胞浸润,毛细血管扩张、充血,运输6 h组的病变更严重。HSP27、HSP70、HSP90主要在心肌细胞的细胞质中表达,HSP27和HSP90在细胞核中也有表达,三种蛋白在不同区域的心肌纤维和心肌细胞中分布不均。与对照组相比,运输应激2 h组山羊心HSP27蛋白表达量显著升高,运输应激6 h组HSP27表达量下降;与对照组相比,运输应激2和6 h组HSP70、HSP90蛋白表达量均显著或极显著升高。总之,运输应激山羊心组织细胞发生了病理损伤,心肌细胞急性变性十分明显,运输应激6 h组心肌细胞变性更严重,运输后HSP27、HSP70和HSP90蛋白表达量发生了明显变化,与心的应激损伤存在一定的关联。     

HIF-1α和IL-17在牦牛、犏牛及黄牛睾丸中的表达比较研究

本研究旨在比较HIF-1α和IL-17在不同牛睾丸组织中的差异性表达,进一步探究HIF-1α与IL-17在牛睾丸组织中发挥调控功能的关联性。以成年牦牛、犏牛和黄牛的睾丸作为研究对象,采用Western-blot、实时荧光定量PCR法检测HIF-1α及IL-17蛋白和基因在3种牛睾丸组织的表达差异。结果显示,3种牛睾丸组织中HIF-1α与IL-17基因和蛋白表达都存在显著性差异,且在犏牛睾丸组织中的表达均极显著高于牦牛和黄牛(P0.01);此外,牦牛HIF-1α与IL-17蛋白水平表达显著高于黄牛(P0.05,P0.01),而牦牛IL-17基因水平表达与黄牛差异不显著(P0.05)。HIF-1α和IL-17基因和蛋白在不同牛睾丸组织中的表达差异说明其具有种属特异性;而牦牛和犏牛睾丸组织中显著性高表达提示HIF-1α和IL-17对适应低氧环境具有重要的调节作用。     

猪IL-17A荧光定量PCR检测方法的建立及其在PCV2感染检测中的应用

根据GenBank中猪白介素17A(interleukin-17A,IL-17A)的基因序列,设计特异性引物,构建阳性重组质粒,并以重组质粒为模板,建立定量检测猪IL-17A的荧光染料(SYBR GreenⅠ)实时PCR(RT-PCR)检测方法。结果显示:PCR扩增片段大小242 bp,与GenBank已知基因序列同源性100%;建立的RT-PCR检测方法在10~1～10~6拷贝/μL时,标准模板的Ct值与浓度之间有较好的线性关系,扩增曲线呈"S"型,R~2≥0.997 7;熔解曲线分析表明,产物为特异性单峰且重复性较好;仔猪外周血中IL-17A mRNA转录定量检测发现,人工感染猪圆环病毒2型(PCV2)猪外周血中IL-17A mRNA的表达量明显升高,且在第7天达到高峰值。本研究为IL-17A基因转录的定量检测提供了技术支持,同时验证了IL-17A可作为检测PCV2感染的新型标志物。     

HIF-1α和IL-17在牦牛、犏牛及黄牛睾丸中的表达比较研究

本研究旨在比较HIF-1α和IL-17在不同牛睾丸组织中的差异性表达,进一步探究HIF-1α与IL-17在牛睾丸组织中发挥调控功能的关联性。以成年牦牛、犏牛和黄牛的睾丸作为研究对象,采用Western-blot、实时荧光定量PCR法检测HIF-1α及IL-17蛋白和基因在3种牛睾丸组织的表达差异。结果显示,3种牛睾丸组织中HIF-1α与IL-17基因和蛋白表达都存在显著性差异,且在犏牛睾丸组织中的表达均极显著高于牦牛和黄牛（P<0.01）;此外,牦牛HIF-1α与IL-17蛋白水平表达显著高于黄牛（P<0.05,P<0.01）,而牦牛IL-17基因水平表达与黄牛差异不显著（P>0.05）。HIF-1α和IL-17基因和蛋白在不同牛睾丸组织中的表达差异说明其具有种属特异性;而牦牛和犏牛睾丸组织中显著性高表达提示HIF-1α和IL-17对适应低氧环境具有重要的调节作用。     

竞争定量RT-PCR检测不同能量摄入对围产期奶牛肝PCmRNA丰度的影响

建立了奶牛肝PCmRNA丰度的竞争定量RT-PCR检测方法,优化的PCR反应条件(25μL)为:60℃退火、30个循环数、1:1的PC cDNA与PC DNA竞争模板浓度比。同时应用该方法检测不同能量摄入对围产期奶牛肝PCmRNA丰度的影响,结果表明:低能量日粮饲喂干奶期奶牛,肝脏PC mRNA丰度升高,而干奶期高能饲喂奶牛,肝脏PC mRNA丰度降低。说明干奶期低能饲喂奶牛,可以增强围产期奶牛的肝糖异生能力。     

HSP27在牦牛不同组织器官中的表达差异分析

本试验旨在探究正常生理条件下牦牛热休克蛋白27基因（HSP27）在雄性牦牛心、肝、脾、肺和肾5种脏器中的表达差异。试验采用普通聚合酶链式反应（PCR）和实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-q PCR）检测HSP27基因在雄性牦牛组织器官样本中的表达情况。结果表明,HSP27基因在雄性牦牛5种脏器样本中均有表达,并存在表达差异,在肾脏中的表达量占试验总表达量的比例最低,在脾脏和肺脏中的表达量占试验总表达量的比例较低（分别为肾脏表达量的4倍和7倍）,在肝脏中的表达量占试验总表达量的比例较高（为肾脏表达量的95倍）,在心脏中的表达量占试验总表达量的比例最高（为肾脏表达量的96倍）。通过对HSP27基因在牦牛不同组织器官中的表达差异分析,推测其表达差异性可能与牦牛生活环境有密不可分的关系,为进一步探索牦牛在高原低氧高寒环境下机体内HSP27基因在其生长发育过程中发挥的作用提供了理论依据。     

POMC在不同毛色羊驼皮肤中的表达和定位分析

旨在研究POMC基因对黑色素细胞的形成、发育以及色素生成方面的重要作用。本研究通过qRT-PCR方法比较不同毛色羊驼皮肤中POMC mRNA的表达水平,采用免疫组织化学技术对POMC蛋白的定位和表达进行蛋白水平分析。结果显示:POMC在棕色和白色羊驼皮肤组织中均有表达,且棕色羊驼皮肤中的POMC mRNA相对表达量为白色羊驼皮肤的23倍(P0.01),POMC蛋白表达部位主要在表皮层和毛囊的毛根鞘周围的角质形成细胞内,且POMC在两部分的表达显示棕色羊驼中的表达量高于白色羊驼(P0.05),表明POMC可能参与羊驼毛色的形成。     

Nlrp 9b在小鼠不同组织中的表达和定位

利用RT-PCR、免疫印迹和免疫组化方法研究Nlrp9b基因在小鼠不同组织中的表达和定位。结果Nlrp9b的转录物和蛋白只在小鼠的卵巢和小肠中表达;在卵巢中,NLRP9B蛋白主要在卵母细胞中定位;在小肠中,该蛋白主要定位在小肠的上皮细胞。表明Nlrp9b转录物和蛋白在小鼠中的表达和定位预示着该基因可能在小鼠的生殖系统和免疫系统中发挥一定的生理功能。     

β-catenin在不同毛色羊驼皮肤中的表达和定位

旨在研究β-catenin在不同毛色羊驼皮肤中的表达和定位,探索其与毛色的关系。以成年白色和棕色羊驼为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术、Western blot和免疫组织化学技术,对β-catenin在白色和棕色羊驼皮肤中mRNA、蛋白表达水平和定位进行研究。实时荧光定量PCR结果显示,β-catenin在棕色羊驼皮肤组织中的相对基因表达量是白色羊驼皮肤组织的1.662倍;Western blot结果显示,羊驼皮肤组织粗蛋白提取物中存在分子量约85 ku与兔抗β-catenin多克隆抗体发生免疫阳性反应的蛋白条带,棕色羊驼平均蛋白表达量显著高于白色羊驼;免疫组织化学结果显示,β-catenin在羊驼皮肤的表皮、毛乳头、毛根鞘和皮脂腺中表达,根据光密度值得出,除皮脂腺之外,在表皮、毛乳头和毛根鞘的表达差异极显著(P0.01)。结果提示β-catenin在白色和棕色羊驼皮肤组织中定位以及表达的差异,表明β-catenin参与毛色形成。     

蛋鸡不同产蛋期生殖器官中OC17,OC116和OCX32 mRNA相对定量研究

Ovocleidin-17(OC17),Ovocleidin-116(OC116)和Ovocalyxin-32(OCX32)是蛋壳中的特异性基质蛋白,对蛋壳的钙化有重要的调节作用。本试验采用RT-PCR、RT-QPCR分别检测了蛋鸡在产蛋初期、高峰期和后期的卵巢、输卵管的伞部、膨大部、峡部以及子宫部OC17、OC116和OCX32的表达量变化。结果显示:在不同产蛋期3个基因在输卵管峡部和子宫部的表达量均显著或极显著(P0.05或P0.01)高于其他组织;卵巢和输卵管中OC17、OC116和OCX32在产蛋高峰期,初期和后期的表达量变化存在显著或极显著差异(P0.05或P0.01);3个产蛋期OCX32在5个组织中的表达量均极显著高于OC17和OC116(P0.01)。研究结果揭示了蛋壳特异性基质蛋白基因OC17、OC116和OCX32在不同产蛋期蛋鸡生殖器官中的表达规律,为蛋壳形成的分子机理研究提供了理论依据。