不同发育阶段牦牛睾丸组织miRNA的分析及鉴定

选取胎儿期(4～5月龄)、犊牛期(1岁)、性成熟期(3岁)的健康雄性牦牛各2头,分离其睾丸组织,利用Illumina平台对各样本miRNA进行测序,其中同一年龄段的2个样本被视为生物学重复;分析各阶段样本的miRNA数量、碱基偏好性和表达水平,对新miRNA进行预测,对显著差异表达的miRNA的靶基因进行gene ontology(GO)富集分析。结果显示,胎儿期miRNA占smallRNA(sRNA)的比例显著多于犊牛期和性成熟期(P<0.05)。共发现新miRNA成熟体77个,新miRNA前体共80个,已知miRNA的首位具有尿嘧啶(U)碱基偏好性,新miRNA的首位具有胞嘧啶(C)碱基偏好性。差异表达分析发现胎儿期与犊牛期间显著差异表达miRNA共224个,犊牛期与性成熟期间显著差异表达miRNA共36个,胎儿期与性成熟期间显著差异表达miRNA共239个。GO分析发现显著差异表达的miRNA其靶基因的数目在生物学过程排首位的是代谢过程,并从显著差异表达的miRNA的靶基因中筛选出了与精子发生及与精子功能相关的靶基因20个。结果表明,牦牛睾丸发育过程中,胎儿期的miRNA的...     

卵巢miRNA研究进展

卵巢是雌性动物最重要的生殖器官,了解卵巢卵泡发育、激素分泌的分子调控机制,对于畜牧生产以及人类卵巢疾病的诊断和治疗具有重大意义。miRNA是一类长度约22nt、在物种间广泛分布并高度保守的非编码小分子RNA,其作用形式包括介导靶mRNA降解或翻译抑制。众多研究表明,miRNA参与了卵子发生,卵泡发育、闭锁和黄体形成、退化等多个生物学过程,对卵巢miRNA的研究有助于从转录后水平揭示调控卵巢功能的分子机制。本文综述了近年来卵巢miRNA的研究进展,特别关注了卵泡发育和卵巢疾病相关miRNA的研究。     

湖羊不同发育阶段卵泡内代谢产物和激素含量的比较研究

本试验旨在研究代谢产物、代谢激素和生殖激素在湖羊黄体期不同发育卵泡内的变化。选用体质量40kg左右的湖羊11头,同期发情结束后第12天屠宰,按不同大小卵泡分离卵泡液。试验结果表明,与≤2.5mm卵泡相比,>2.5mm卵泡内的葡萄糖浓度显著提高(P<0.05),胰高血糖素浓度显著降低(P<0.05),乳酸脱氢酶(LDH)活性和睾酮浓度极显著降低(P<0.01),雌二醇浓度极显著提高(P<0.01),而血氨、游离脂肪酸、尿素、胰岛素和孕酮浓度差异不显著。雌二醇浓度与LDH活性呈极显著负相关(P<0.01),与葡萄糖浓度呈显著正相关(P<0.05),与胰高血糖素浓度呈显著负相关(P<0.05),与睾酮浓度呈极显著负相关(P<0.01),与孕酮浓度接近正相关(P=0.051)。试验结果表明代谢产物和激素共同参与调节卵泡发育。     

发情期湖羊卵巢组织差异表达基因的筛选与分析

为了筛选与湖羊发情相关的候选功能基因,试验以发情期湖羊卵巢组织cDNA为试验组,乏情期的湖羊卵巢组织cDNA为对照组,采用抑制性消减杂交(SSH)技术构建湖羊卵巢组织消减cDNA文库,并对筛选获得的功能基因进行生物信息学分析。结果表明:应用SSH技术成功构建了湖羊发情期卵巢组织消减cDNA文库;共挑取89个克隆进行测序分析,获得27个已知物种的同源基因序列和3个Novel序列;随机挑取16个阳性克隆进行PCR扩增,插入片段主要分布在150~750 bp之间;对27个已知同源基因进行功能分类,其中酶功能相关基因5个、核糖核酸结合功能相关基因10个、载体运输功能相关基因2个、调节功能相关基因3个、转运功能相关基因3个、未分类基因4个。说明试验成功筛选获得湖羊发情相关候选功能基因。     

湖羊与杂交羊的区别鉴定

湖羊杂交历史长达60余年,目前纯种资源濒临灭绝,几乎被杂种羊取而代之,血缘关系错综复杂。如何识别纯种与杂种,是湖羊保种和杂种资源的开发利用技术工作中遇到的最大难题之一。本文简要介绍从外形特征如何区别鉴定纯种与杂种,以避免指鹿为马的现象发生。     

湖羊乳腺上皮细胞的分离培养与鉴定

乳腺上皮细胞是哺乳动物特有的具有分泌功能的细胞,也是研究乳腺发育的细胞基础,是研究乳腺发育和功能不可缺少的理想实验材料.试验通过组织块贴壁培养法获得的羊乳腺上皮细胞,采用免疫荧光染色的方法对细胞进行鉴定,可以确定所获得的细胞为湖羊乳腺上皮细胞.     

五指山猪肌肉和脂肪组织miRNA的鉴定与分析

为了鉴定和分析五指山猪不同部位肌肉和脂肪组织中差异表达的微小RNA (miRNA),采用高通量测序和生物信息学方法对五指山猪肌肉和脂肪组织中的miRNA进行分析筛选,运用DESeq分别鉴定背最长肌和半腱肌、背部和腹部皮下脂肪组织间差异表达的miRNA,并对miRNA进行靶基因预测分析。结果:在五指山猪肌肉组织中共鉴定出344个miRNA,其中已知miRNA 256个、新预测miRNA 88个,肌肉组织中预测到靶基因9 712个;在五指山猪皮下脂肪组织中共鉴定出447个miRNA,其中已知miRNA 279个、新预测miRNA 168个,脂肪组织中预测到靶基因11 510个;五指山猪背最长肌与半腱肌间存在41个差异表达的miRNA,腹部皮下脂肪与背部皮下脂肪间存在83个差异表达的miRNA。本试验为进一步研究miRNA调控猪骨骼肌和皮下脂肪发育的分子机制提供科学依据。     

日本血吸虫Wnt1基因的鉴定及在不同发育阶段表达水平分析

为研究Wnt信号通路对血吸虫发育的调节作用,本研究克隆鉴定了日本血吸虫的Wnt1基因(SjWnt1).序列分析显示,SjWnt1蛋白具有Wnt信号蛋白家族的结构功能域,但比高等生物的Wnt1少一个保守的Cys.mRNA和蛋白的定量分析结果显示,SjWnt1表达于血吸虫的整个发育过程,而在虫卵和早期童虫中呈高表达水平,提示SjWnt1对卵胚发育和早期童虫的细胞分化具有调节作用.来源于非适宜宿主及单性感染的发育不良虫体中SjWnt1 mRNA水平比发育正常的虫体高,表明不良发育的虫体相应的Wnt信号阻滞.SjWnt1表达下调后则引起Wnt/β-catenin、Wnt/PCP及Wnt/Ca2+通路的相应下游基因的mRNA水平下降,推测SjWnt1可能通过这3种传递途径行使信号传递的功能.     

湖羊不同胎次与产羔数之间的关系分析

通过对江苏西来原羊场20016—2019年湖羊母羊的产羔数据进行统计分析,研究了湖羊不同胎次与母羊产羔数之间的关系.结果表明,该养殖场湖羊平均窝产羔数2.23只,窝产羔数与窝产活羔数随着胎次增加呈先增加后下降的特征,窝产羔数的峰值在第四胎与第五胎之间.湖羊的平均窝产羔数回归方程为Y1=0.326X-0.036X2+1....     

不同月龄湖羊体重与体尺的多元回归分析

实验旨在建立湖羊不同月龄体重-体尺最优回归模型,并探讨湖羊不同月龄选择的主要因素。随机选取苏州市种羊场生长发育良好、健康的湖羊公羊96头、母羊118头,在相同饲养条件下测定初生、2月龄及6月龄体重及体尺指标,利用相关分析、通径分析、多元回归分析建立湖羊体重-体尺最优回归模型。结果表明：体长、体高、胸围和管围与公羊(初生和2月龄)、母羊(初生和6月龄)体重呈正相关关系(P<0.01),体长、体高和胸围与公羊(6月龄)呈正相关关系(P<0.01),体长、胸围和管围与母羊(6月龄)呈正相关关系(P<0.01)。体重与体尺多元回归分析,建立湖羊不同月龄体重-体尺最优回归模型：初生公羊为Y=-6.914+0.080X1+0.051X2+0.114X₃+0.353X₄,R²=0.851;2月龄公羊为Y=-30.07+0.203X1+0.172X₂+0.241X₃+1.833X4,R²=0.807;6月龄公羊为Y=-43.801+0.381X_...     

不同发育阶段湖羊生殖器官脂联素受体与睾酮分泌关键基因表达模式及相关性研究

旨在探究不同发育阶段湖羊生殖器官中脂联素受体(adiponectin receptor,AdpR)及睾酮(testosterone,T)分泌相关基因mRNA的表达变化及相关性分析。选取3、9、24月龄(M)湖羊各5只,颈静脉采血并收集血清,屠宰后,采集下丘脑、垂体、睾丸、附睾头、体、尾组织;ELISA技术检测各月龄湖羊血清中脂联素(adiponectin,Adp)、T、促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)、促性腺激素抑制激素(gonadotropin inhibitory hormone,GnIH)浓度;qRT-PCT技术检测不同发育阶段湖羊下丘脑-垂体-性腺轴(hypothalamus-pituitary-gonad axis,HPG)中AdpR1和AdpR2及T分泌关键基因mRNA表达规律;免疫组化技术对AdpR1在湖羊睾丸和附睾中进行定位分析。结果表明:不同发育阶段湖羊血清中Adp、GnRH、GnIH浓度呈现不同的变化趋势,其中Adp含量在性成熟后(9和24月龄)显著高于性成熟前(3月龄)(P0.05)。AdpR1mRNA表达量在各个月龄睾丸和附睾尾中均显著高于AdpR2(P0.05),其中AdpR1mRNA表达量在二者中呈上升趋势,且差异显著(P0.05),而在附睾头、体差异不显著(P0.05)。AdpR1存在于睾丸间质细胞、生精细胞、曲精细管管壁肌样细胞、精子细胞以及附睾头、体、尾的上皮细胞。血清中Adp与T含量呈显著正相关(P0.05);Adp含量与GnIH负相关以及与GnRH正相关,但差异不显著(P0.05);AdpR1mRNA表达水平与StAR、3β-HSD mRNA表达水平呈显著正相关(P0.05)。综上表明,在湖羊生殖器官发育过程中,Adp通过与其受体AdpR1结合,促进T的产生,进而影响湖羊睾丸发育。     

湖羊的鉴定方法及标准

<正> 湖羊是世界著名的白色羔皮羊。近年来发展较快,但品质却有所下降,这是当前湖羊生产中急待解决的问题。引起湖羊品质下降的原因较多,但长期以来,不进行鉴定分级,缺乏可靠的选种手段,也是其重要原因之一。尽管一直有商业分级,但这种分级主要看羔羊身上一张皮,而没有根据体质、外貌、生长发育和羔皮品质     

青海血蜱不同发育阶段蛋白分析

考虑到不同发育阶段蛋白多肽及抗原特性方面的差异,本实验利用SDS-PAGE和Westernblotting对青海血蜱的卵、幼蜱、若蜱、成蜱的蛋白进行了分析。SDS-PAGE结果显示,卵出现了7条主带,幼蜱出现了16条主带,若蜱出现了14条主带,成蜱出现了12条主带。它们的蛋白多肽在数量、含量和分子量上存在差异,共同带只有4条,但相邻发育阶段之间的共同带较多。用感染羊血清和免疫羊血清作免疫印迹时,感染羊血清在分子量5.6万处有明显的反应带,免疫羊血清在分子量9.7万处有明显的反应带。     

基于微卫星标记鉴定湖羊家系

试验旨在基于微卫星（simple sequence repeats,SSR）多态性探索一种鉴定与划分湖羊家系的方法,通过查阅文献筛选出9个分布于多个常染色体、具有高多态性信息、高杂合度的湖羊微卫星位点BM3051、HH64、TGLA137、MAF33、FCB48、VH72、INRA023、ETH152和MCM527。采集30只湖羊种公羊血液,使用试剂盒提取血液基因组DNA,合成筛选出的9个微卫星引物并使用荧光基团标记,利用降落式PCR进行扩增,扩增产物在基因分型后使用CERVUS3.0.7进行基因型分析,使用POPGENE1.32基于Nei氏遗传距离构建树状聚类图,根据图示的亲缘关系远近划分湖羊家系。结果显示,当双亲基因型未知时,9个微卫星位点的单亲累积排除概率为99.2094%;当单亲基因型已知时,9个微卫星位点的累积排除概率为99.9688%;当双亲基因型未知时9个微卫星位点的双亲累积排除概率为99.9999%,排除概率能够满足遗传育种中亲子鉴定和系谱分析的要求。根据Nei氏遗传距离构建UPGMA聚类图,将30只种公羊划分为6个家系,为育种工作提供了一定参考。本方法能够进行湖羊家系的鉴定与划分,对湖羊育种工作具有一定的应用价值。     

湖羊乳房炎病原菌的分离鉴定及其耐药性分析

为分析湖羊场临床乳房炎病原菌种类及其耐药特征,对患病湖羊乳样中病原菌进行分离鉴定及耐药性分析.根据形态学和分子生物学鉴定结果,分离得到3种乳房炎病原菌,共计28株,其中金黄色葡萄球菌14株,大肠杆菌10株,粪肠球菌4株;耐药试验结果显示,3种病原菌均对左氟沙星、庆大霉素、氯霉素、环丙沙星、诺氟沙星敏感,对青霉素、红霉素...     

不同猪种初乳外核体中免疫相关miRNA的鉴定

母乳是婴儿最重要的食物来源,对婴儿的健康发育特别是后天免疫的形成有着至关重要的作用,乳质量形成的分子基础已成为当今生物学科领域研究的热点之一。试验采用第2代高通量测序技术(Solexa测序)对大约克夏猪和梅山猪初乳外核体中mi RNA进行了鉴定,结果发现,免疫相关的mi RNA在初乳中呈现富集现象,且梅山猪初乳外核体中的数量极显著高于大约克夏猪(P0.01),而在大约克夏猪个体间差异不显著,说明梅山猪对疾病的抵抗力高于大约克夏猪。此试验可为深入研究母乳在婴儿免疫系统发育过程中的基本功能提供基础数据。     

一株湖羊肺炎克雷伯菌的分离与鉴定

从某湖羊养殖场发病死亡的成年湖羊的肾脏中分离到1株革兰阴性短杆菌,形态特征与生化试验结果基本符合肺炎克雷伯氏菌的特征。药物敏感性试验显示,该分离菌株对氨苄西林、哌拉西林、头孢唑啉、头孢哌酮、卡拉霉素、庆大霉素、诺氟沙星、氧氟沙星高敏,而对氟苯尼考、青霉素、苯唑西林、红霉素、四环素、多西环素、万古霉素、复方新诺明等药物具有耐药性。以细菌16S rRNA基因通用引物进行PCR扩增,将所测序列与GenBank中的序列进行BLAST比对,结果其与肺炎克雷伯菌的同源性高达99.9%以上,进一步确定该分离菌株为肺炎克雷伯菌。     

关中奶山羊睾丸不同发育阶段代谢物的差异分析

【目的】 试验旨在从代谢组学角度探究关中奶山羊睾丸发育代谢机制。【方法】 选择1月龄断奶雄性关中奶山羊和24月龄体成熟的雄性关中奶山羊各6只,采集睾丸组织,使用液相色谱-质谱（LC-MS）技术对睾丸组织进行化学检测,通过多维和单维分析相结合的方式对两组不同代谢物进行化学检测、对比与鉴别,通过富集差异代谢物分析筛选关中奶山羊发育代谢中的潜在关键通路。【结果】 在1和24月龄关中奶山羊睾丸组织中共筛选出334个差异代谢物,其中显著上调137个,显著下调197个。对前36个差异代谢物进行比较鉴定发现,分别为脂质和类脂质分子、有机酸及其衍生物、未分类化合物和苯丙烷和聚酮化合物四大类。经相关性分析发现,在1和24月龄关中奶山羊睾丸发育过程中,脂质和类脂质分子与甘油磷脂呈最大正相关,羧基及其衍生物与甘油磷脂呈最大负相关。对不同的代谢物进行富集分析,筛选出7条潜在的重要代谢通路,分别为肿瘤中的胆碱代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、肿瘤中的中心碳代谢、铁死亡、谷胱甘肽代谢、氨酰-tRNA生物组成以及牛磺酸和亚牛磺酸代谢。【结论】 本试验从代谢组学角度揭示了1和24月龄关中奶山羊睾丸的差异代谢物及代谢机制,为今后哺乳动物睾丸的发育研究奠定了基础。