水貂源肺炎克雷伯杆菌分离、鉴定及疫苗潜能分析

水貂在夏季养殖时常出现出血性肺炎症状,病原大部分为铜绿假单胞菌。然而近10 a来采自河北、山东、辽宁等地水貂部分出血性肺炎病例中没有分离到铜绿假单胞菌,为探清病原,针对以上病料进行其他病原的分离鉴定。通过病料的细菌分离、常规鉴定,16S rRNA基因测序,动物回归试验、毒力试验、免疫原性试验及攻毒保护试验等,确定6株分离菌株有致病性,并被鉴定为肺炎克雷伯杆菌,分别命名为FY1、FY2、FY3、FY4、FY5、FY6,其中FY3为毒性最强的肺炎克雷伯氏菌(ZC1108株)。以该毒株对10月龄健康水貂进行肌肉注射,结果显示其致死率为100%(5/5);以该菌株制备的灭活疫苗免疫水貂后攻毒保护率达100%(5/5),试验水貂全部健活。表明肺炎克雷伯氏菌(ZC1108株)灭活疫苗免疫原性良好。     

水貂出血性肺炎二联四价灭活疫苗的研制

为预防水貂出血性肺炎的发生,制备了水貂二联四价灭活疫苗,并进行了评估。对强致病性E、G和D型铜绿假单胞菌及H11基因型大肠杆菌进行了菌株的灭活,制备疫苗,对疫苗进行安全性检查、超剂量检查、最小免疫剂量确定、水貂攻毒保护试验及初步临床应用。结果表明,菌株灭活完全,平板上未见单一菌落出现,疫苗初步制备完成且安全检查试验中试管内未出现浑浊,超剂量检查试验中接种水貂未见不良反应。最小免疫剂量为0.5mL(5.0×108CFU)时对水貂起到完全保护,此时感染剂量为10 LD50个细菌,初步临床应用效果较好。本研究针对由铜绿假单胞菌和大肠杆菌感染引起的水貂出血性肺炎的预防和二联四价灭活疫苗的使用提供参考依据。     

黄连提取物对五种致病菌腹腔感染小鼠血清TNF-α和IL-6含量的影响

考察黄连(Coptis chinensis Franch)提取物灌胃对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌和肺炎克雷伯氏菌5种常见细菌所致体内急性腹腔感染小鼠血清TNF-α和IL-6含量的影响。结果表明,黄连提取物高、中、低剂量组对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、肺炎克雷伯氏菌所致的腹腔感染小鼠有保护作用,可使小鼠血清中TNF-α和IL-6含量显著减少;黄连提取物有一定抗菌作用,其机制与TNF-α和IL-6有关。     

重组铜绿假单胞菌外毒素A的原核表达和多克隆抗体制备及免疫保护功能分析

为探索铜绿假单胞菌ETA蛋白的免疫保护功能,采用分子克隆方法获得铜绿假单胞菌ETA表达菌株;利用切胶纯化获得ETA蛋白并免疫小鼠,制备ETA蛋白多克隆抗体;用ELISA方法,检测出ETA抗血清滴度达1∶8 000;蛋白质印迹分析结果表明,抗血清具有很好的特异性;小鼠免疫保护试验结果表明,ETA对铜绿假单胞菌感染的保护率达50%,显著高于对照组的免疫保护率。用DNAman软件对ETA序列同源性进行分析,发现革兰氏阴性菌的同源性高于革兰氏阳性菌,铜绿假单胞菌种间的同源性高于其他种类细菌的同源性;用MEGA软件对ETA的进化分析结果表明,不同血清型铜绿假单胞菌的亲缘关系高于其他细菌,据此可推测ETA免疫动物产生的特异性抗体可能为不同种类铜绿假单胞菌的感染提供交叉免疫保护。     

貂源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及胞外分泌蛋白的核酸酶活性分析

为确定引起水貂肺炎的病原菌,对从临床死亡病例中分离到的1株疑似肺炎克雷伯菌进行鉴定,采用琼脂糖凝胶电泳法检测肺炎克雷伯菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性,并探究了温度、pH值、金属离子对核酸酶活性的影响.结果显示,通过病料涂片镜检及PCR鉴定,分离株为1株肺炎克雷伯菌,该肺炎克雷伯菌胞外分泌蛋白表现出降解 λDNA的核酸酶活性...     

水貂防疫注射应注意的问题

在水貂养殖过程中,每隔半年对种用水貂注射犬瘟热疫苗和传染性胃肠炎疫苗,使其产生抗体以保护怀孕期的母貂和仔貂不受犬瘟热和病毒性肠炎的感染,此种行为又称防疫或免疫接种。防疫用的疫苗就是免疫原,又称为抗原,是刺激水貂免疫系统产生抗体因子进入血液对抗犬瘟热病毒的蛋     

规模化水貂场中多种病毒和细菌感染状况的PCR调查研究

当前水貂场存在多种病毒、细菌感染的情况,导致众多病原体混合感染、潜伏感染,临床上往往呈现慢性经过,并不表现出典型症状,给水貂养殖产业带来巨大经济损失。为了了解目前规模化水貂养殖场疫病感染情况,研究人员从2015年6月~2015年9月,对内蒙古的某个规模化貂场的所有仔貂进行了随机采样,通过PCR方法,分别对诺如病毒(Norovirus)、轮状病毒(Rotavirus)、腺病毒(Adenovirus)、细小病毒(Parvovirus)、沙门氏菌属(Salmonella)、志贺氏菌属(Shigella)、小肠耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)、气单胞菌属(Aeromonas)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)和产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)进行检测。结果显示,在192个粪便样品DNA中,气单胞菌属阳性样本16个(8.30%)、产气荚膜梭菌阳性样本11个(5.73%)、沙门氏菌属阳性样本38个(19.79%)、志贺氏菌属阳性样本6个(3.13%)、铜绿假单胞阳性样本1个(0.52%)、轮状病毒阳性样本2个(1.04%)。对疫病防控意义较大的铜绿假单胞菌PCR产物进行了序列测定和系统发育树分析,结果显示,该菌株与Gen Bank其他铜绿假单胞菌距离较远,显示以水貂为宿主的铜绿假单胞菌有着独特的拓扑分类地位。     

貂源铜绿假单胞菌耐药性及生物学特性

为了解貂源铜绿假单胞菌流行株基本特性,对分离的20株铜绿假单胞菌进行药物敏感性试验、血清型鉴定、ToxA基因检测、强毒株筛选及绝对致死量(LD_(100))测定。结果表明,铜绿假单胞菌分离株耐药现象比较严重,对氨苄西林、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻吩、头孢噻肟、头孢西丁、头孢唑林和四环素不敏感,对妥布霉素敏感率为95%;铜绿假单胞菌分离株的血清型为G型和B型,分别占85%和15%;20株铜绿假单胞菌均能检测出毒素基因ToxA;小鼠致死性试验表明,铜绿假单胞菌分离株之间毒力差异很大,少数菌株如ZHDL9、ZHDL6等均表现出较强的毒力。以菌株ZHDL9为代表株建立小鼠鼻腔感染模型,采用建立的感染模型测定得菌株ZHDL9对小鼠的LD_(100)为5×10~7 cfu。由此可见,分离的20株铜绿假单胞菌对临床常用抗生素耐药严重,对妥布霉素的敏感率为95%,提示该种抗生素可用于临床治疗水貂出血性肺炎,而菌株ZHDL9可作为生物制品研发的候选菌株。     

鸡大肠杆菌荚膜多糖——蛋白质抗原免疫原性的研究

用碳化二亚胺作为交联剂将荚膜多糖与载体蛋白质交联后加入蜂胶佐剂制成疫苗免疫鸡只。７周龄同源菌株攻毒结果表明，荚膜多糖－破伤风类毒素苗组鸡有很好的保护效果且试验重复性好；在免疫后３个月的同源攻毒保护指数也达１３／２０以上。但对异源菌株的攻毒没有明显保护效果。该研究采用微量法间接血凝试验检测了免疫鸡抗体水平。     

水貂出血性肺炎的发病特点及防治措施

水貂出血性肺炎是由铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)感染引起的一种水貂急性败血性传染病。笔者结合临床病例从症状、病原特点、区别诊断、药物治疗和预防措施5个方面介绍水貂出血性肺炎,为该病的防控提供参考。     

含佐剂蛋白的鸡新城疫冻干疫苗对雏鸡免疫效力的研究

研究了佐剂蛋白大肠杆菌热敏性肠毒素LTRG与鸡新城疫疫苗(NDV)联合冻干制品的免疫效果。选择不同剂量的佐剂蛋白与鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)LaSota抗原配比,按生产程序制备冻干疫苗。经滴鼻途径免疫雏鸡,检测血清抗体、粘膜抗体水平,分析不同配伍疫苗的免疫效果。结果表明:含4μg LTRG佐剂蛋白的NDV冻干疫苗,免疫雏鸡血清IgG抗体水平明显高于其他添加组及NDV疫苗组,差异显著;粘膜IgA抗体与NDV疫苗组比较,差异极显著。LTRG佐剂蛋白与鸡新城疫疫苗配伍制备冻干疫苗,能增强免疫雏鸡的免疫应答能力,尤其是可产生较好的粘膜抗体水平。     

鸡病原性大肠杆菌（O2）亚单位疫苗的研究

试验提取并纯化了鸡病原性大肠杆菌血清型（Ｏ２）的菌毛，并电镜观察了菌毛及菌毛表达。提取了鸡病原性大肠杆菌血清型（Ｏ２）荚膜多糖及菌体可溶性蛋白质，电镜观察了提取过程中荚膜、细胞壁以及胞内物质等细菌结构变化。将提取的菌毛、荚膜多糖和灭活的菌体作为抗原、蜂胶作佐剂，制成蜂胶疫苗，免疫鸡只，于７周龄进行同尖毒保护试验，从保护指数、细菌分离和病变级数三方面比较了３种疫苗的免疫效果，试验结果表明：荚膜疫苗效     

景天三七对多重耐药铜绿假单胞菌的抑菌作用

目的研究景天三七醇提物和水提物对多重耐药铜绿假单胞菌的体外抗菌作用。方法采用试管稀释法测定景天三七醇提物和水提物对20株临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果景天三七醇提物和水提物对20株临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌有不同程度的抗菌作用,醇提物对铜绿假单胞菌的MIC50为0.125g.mL-1,水提物对铜绿假单胞菌的MIC50大于0.5g.mL-1。结论景天三七醇提物体外对铜绿假单胞菌有较强的抗菌作用。     

生姜活性提取物对铜绿假单胞菌的抑制机理研究

[目的]探究生姜的活性提取物对铜绿假单胞菌抑制作用的机理。[方法]采用有机溶剂浸提法提取生姜中的活性物质,探讨生姜在不同条件下的活性提取物对铜绿假单胞菌的抑制效果及抑菌机理。[结果]生姜提取物对铜绿假单胞菌有明显的抑制作用,且生姜提取物的稳定性较好,不同因素处理下仍具有较强的抑菌性。通过对微生物的生长曲线和电导率的测定,进一步证明生姜的活性提取物抑制了铜绿假单胞菌的生长。[结论]生姜的活性提取物对铜绿假单胞菌有较好的抑制作用。     

贵州金雀花抑菌活性主要成分测定

为研究贵州金雀花不同提取物抑菌活性成分,以金黄色葡萄球菌耐药菌、金黄色葡萄球菌敏感菌、肺炎克雷伯氏菌耐药菌、肺炎克雷伯氏菌敏感菌、大肠杆菌、白色念株菌、鼠伤寒沙门氏杆菌、铜绿假单胞菌为受试菌,采用体外抑菌圈法测定抑菌活性,通过气相色谱/质谱联(GC/MS法)测定活性部位成分,结果:金雀花的石油醚提取物在3mg/mL浓度下对金黄色葡萄球菌耐药菌、金黄色葡萄球菌敏感菌、肺炎克雷伯氏菌耐药菌、肺炎克雷伯氏菌敏感菌、大肠杆菌均具有抑菌作用,平均抑菌圈直径分别为10mm、12mm、10mm、8mm、9mm。GC/MS鉴定出9个化合物,脂肪酸及其酯和黄葵内酯为石油醚提取物的主要成分,它们的相对含量分别为46.92%和22.37%。表明,脂肪酸及其酯和黄葵内酯可能是金雀花抑菌活性的主要成分。     

一例由肺炎克雷伯氏菌引起的水貂肺炎的诊治

<正>近年来,我国水貂养殖业不断发展,养殖规模和集约化程度明显提高,随之而来的动物疾病也越来越多,其中水貂肺炎成为影响水貂养殖的重要疾病,由肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella peneumoniae)引起的肺炎对水貂的危害日益严重。肺炎克雷伯氏菌属肠杆菌科肠道杆菌属克雷伯氏菌种,在自然界中分布广泛,是一种可引起多种动物患病的条件性致病菌。由于各种抗菌药物的滥用,导致该菌的耐药性增强,     

新型免疫佐剂研究进展

免疫佐剂是一种能促进、延长或加强抗原免疫原性和免疫保护效果的物质。传统佐剂虽然副反应低,对许多抗原具有促进免疫反应的作用,但对某些抗原不表现或仅有很低的免疫增强作用。因此,研制和开发新型佐剂,已成为新疫苗研究中的一个重要领域[1~3]。1细胞因子佐剂细胞因子具有明显的免疫佐剂效应,可增强病毒、细菌和寄生虫疫苗的保护效应,激发对肿瘤抗原的免疫反应。具有佐剂效应的细胞因子有白介素1(IL-1)、白介素2(IL-2)、γ-干扰素和白介素-12(IL-12)。1.1白介素1(IL-1)白介素1是由抗原—抗体复合物、刀豆素A、脂多糖及胞壁酰二肽等诱…     

832例儿童细菌性肺炎病原学及耐药性分析

目的了解肇庆地区近年儿童细菌性肺炎病原学的构成和耐药性变迁。方法对832例肺炎患儿送检的痰标本1072份进行进行鉴定和药敏试验,分析其结果。结果 1 072份标本中,检出141株细菌,总检出率为13.2%,革兰阴性（G-）菌83例,占58.9%,其中前4位为铜绿假单胞菌（16.3%）、肺炎克雷伯菌（13.5%）、大肠埃希菌（12.7%）、流感嗜血杆菌（6.4%）;革兰阳性（G＋）菌58例,占41.1%,主要为肺炎链球菌（28.3%）和金黄色葡萄球菌（10.6%）;≤3岁者细菌检出率较〉3岁者高,两组比较,差异有统计学意义;G-菌对亚胺培南、美罗培南及喹诺酮类的环丙氟哌酸、左旋氧氟沙星耐药率较低,G＋菌对万古霉素、左旋氧氟沙星、氯霉素、亚胺培南耐药率低。结论肺炎链球菌仍是肇庆地区肺炎患儿主要的病原菌,铜绿假单胞菌增多,应根据药敏结果合理使用抗生素。     

不同佐剂的新城疫疫苗免疫效果的研究

为评价不同佐剂的新城疫(newcastle disease,ND)灭活疫苗对鸡的免疫效果,选用铝胶佐剂、国产油佐剂及进口油佐剂与新城疫病毒抗原混合制成疫苗,免疫雏鸡,探讨不同佐剂的疫苗对鸡的安全性、新城疫的HI抗体水平及攻毒保护率。结果表明,3种佐剂的疫苗注射部位无不良反应;28天时HI抗体分别为28.2、28.5和28.8;56天时HI抗体分别为27.4、28.8和29.2,攻毒后的保护率分别为90%、100%和100%,铝胶佐剂、国产油佐剂、进口油佐剂配制的新城疫灭活疫苗以及对照组攻毒后肛棉拭子NDV阳性率分别为10%、0、0及100%。用进口油佐剂配制的疫苗可刺激接种动物产生快速免疫应答反应,抗体产生的效价高、维持的时间长,其效果优于其它佐剂,有望成为ND灭活疫苗的候选佐剂。     

苏北地区某奶牛场乳房炎顽固病原菌的分离鉴定及耐药性分析

从江苏北部某牛场共采集26头经四环素治疗1周的患乳房炎奶牛的奶样31份,从生牛乳中分离鉴定出病原菌12株,其中大肠杆菌3株,肺炎克雷伯菌2株,停乳链球菌、鲍曼不动杆菌、肠球菌、松鼠葡萄球菌、产色葡萄球菌、短小芽孢杆菌和铜绿假单胞菌各1株。药敏试验结果显示:3株大肠杆菌和2株肺炎克雷伯菌对青霉素、氨苄西林和林可霉素均显示出多重耐药性;铜绿假单胞菌菌株W_9对青霉素、氨苄西林、林可霉素、四环素、土霉素和头孢喹肟均表现出多重耐药;产色葡萄球菌菌株W_(12)对林可霉素、四环素和土霉素多重耐药;松鼠葡萄球菌菌株W_(11)对林可霉素、链霉素、卡那霉素、四环素、土霉素、庆大霉素和头孢喹肟均耐药。在9种常用的兽用抗生素中,12株分离菌对林可霉素的耐药率最高,达到83.3%(10/12);对卡那霉素和庆大霉素的耐药率最低,均仅为8.3%(1/12)。