富含亮氨酸和精氨酸的抗菌肽设计

通过构建亮氨酸疏水面和精氨酸亲水面来设计全新的抗菌肽,并评估利用这种螺旋轮投影模型设计出的抗菌肽的生物学活性.检测了设计得到的新型抗菌肽LGR16的最小抑菌浓度(MICs)、对于红细胞和哺乳动物细胞的细胞毒性以及杀菌动力学.结果表明,新型抗菌肽LGR16具有很强的抗菌活性,其对于革兰氏阴性菌和阳性菌的最小抑菌浓度分别为8和4 μg·mL-1.LGR16杀菌速度快,在10 min内能杀死细菌.在最小抑菌浓度该抗菌肽只表现出很弱的溶血活性和对哺乳动物细胞的细胞毒性.综上可见,抗菌肽能够通过在螺旋轮中聚集疏水性或者碱性氨基酸残基来设计,而且本研究得到的抗菌肽LGR16具有替代抗生素的潜质.     

不同动物源抗菌肽对沙门氏菌杀菌机制比较研究

研究旨在比较4种动物源抗菌肽对沙门氏菌的杀菌机制差异.试验将浓度分别为0、1/2MIC、MIC和2MIC的抗菌肽与试验菌株猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌共同孵育,破碎后测定该2种血清型沙门氏菌的蛋白质含量.利用DNA提取试剂盒提取细菌DNA,依照抗菌肽与DNA质量比为1∶2、1∶1、2∶1、4∶1与试验菌株孵育,通过凝胶...     

黄芩提取物抑制金黄色葡萄球菌α-溶血素溶血活性的研究

α-溶血素(αHL)是金黄色葡萄球菌(S.aureus)重要的毒力因子,为研究黄芩醇提物对αHL溶血活性的抑制作用,本研究通过乙醇回流提取法获得黄芩醇提取物,测定其对S.aureus的最小抑菌浓度(MIC)、对αHL表达和生物学活性的影响以及对αHL介导的A549细胞损伤的保护性作用.试验结果显示,黄芩醇提取物对所测试的S.aureus的MIC均高于2048 μg/mL;黄芩醇提取物能够抑制S.aureus培养物上清中的αHL的溶血活性,并呈浓度依赖关系,但对αHL的表达并无抑制作用;而且黄芩醇提取物也能够呈剂量依赖关系缓解S.aureus αHL介导的对A549细胞损伤作用.该结果表明黄芩醇提取物能够以某种形式导致αHL丧失生物活性,并提示黄芩醇提取物是一种潜在的抗S.aureus感染的复合物.     

奶牛α-干扰素克隆表达和生物学活性分析

提取经植物血凝素诱导培养的我国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛α-干扰素(BoIFN-α)成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为牛α-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌BL21中实现了高效表达,表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性。重组奶牛α-干扰素对VSV的抗病毒活性为4.26×105U/mL,对IBRV的抗病毒活性为8.91×104U/mL。结果表明,重组奶牛α-干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定。     

中草药连翘提取物抑制金黄色葡萄球菌α-溶血素分泌活性研究

通过乙醇回流提取获得中草药连翘粗提物,利用MIC值测定、溶血活性测定、免疫印迹、RT-PCR、LDH及live/dead等试验方法研究连翘提取物对金黄色葡萄球菌α-溶血素分泌的影响.结果表明:连翘提取物对金黄色葡萄球菌的最小抑菌质量浓度(MIC)均大于2 048 mg/L,表明连翘提取物不影响金黄色葡萄球菌生长.连翘提取物在16～128 mg/L时,抑制了金黄色葡萄球菌α-溶血素的分泌,而且这种抑制作用呈剂量依赖性.研究结果提示连翘提取物可作为一种潜在的抗金黄色葡萄球菌感染药物,可进一步开发.     

橙皮素对金黄葡萄球菌α-溶血素表达的抑制作用

α-溶血素在金黄葡萄球菌的致病过程中发挥着不可或缺的作用。本研究采用最小抑茵浓度测定、茵液上清溶血活性以及α-溶血素含量测定、荧光定量PCR及细胞毒性的测定等相关试验验证了橙皮素对金黄葡萄球菌α-溶血素表达的影响。结果显示,无抗茵活性的橙皮素在较低质量浓度下即可抑制金黄葡萄球菌α-溶血素的表达及其编码基因的转录,是-种潜在的以毒力因子为靶标的前导化合物,并可进一步开发用于抗金黄葡萄球茵感染。     

蜂胶对金黄色葡萄球菌α-溶血素的抑制作用

通过吸光度测量和荧光定量PCR的方法,在体外检测亚抑菌浓度的蜂胶作用下金黄色葡萄球菌α-溶血素活力变化及agrA、hla的mRNA表达量。结果显示,不同浓度蜂胶对金黄色葡萄球菌α-溶血素有不同程度的抑制作用（P〈0.05）;同时荧光定量PCR检测agrA和hla基因表明,蜂胶能够显著减少agrA和hla mRNA的相对表达量,进而抑制α-溶血素的表达。     

亚抑菌浓度穿心莲提取物对减缓金黄色葡萄球菌α-溶血素介导的A549细胞损伤作用的影响

金黄色葡萄球菌是一种广泛存在的重要致病菌,可引起人类和动物许多严重的感染。另外,α-溶血素是金黄色葡萄球菌最重要的毒力因子之一。本研究通过乙醇回流提取方法,获得中草药穿心莲提取物,然后通过最低抑制浓度(MIC)值测定、溶血活性测定、Western blotting、RT-PCR、LDH及Live/dead等方法研究分析穿心莲提取物对金黄色葡萄球菌α-溶血素分泌的影响及对A549细胞的保护作用。试验结果表明,穿心莲提取物对金黄色葡萄球菌的MIC值为2048 μg/mL,且呈剂量依赖性地抑制金黄色葡萄球菌α-溶血素分泌,并能有效减缓金黄色葡萄球菌菌液上清对A549细胞的损伤。提示,穿心莲提取物是一种潜在的抗金黄色葡萄球菌感染的药物。     

α-淀粉酶对不同NSC含量稻草青贮品质的影响

适时收获的新鲜稻草中含有相当数量的非结构性碳水化合物(NSC),其中淀粉占有相当比例。淀粉在青贮中需水解成可溶性糖(WSC)才能被大部分乳酸菌利用。本研究选用两个稻草中NSC含量差异显著的水稻品种(杂交籼稻两优培九和常规粳稻武香粳14),设置0.5,1.0和1.5g/kg的3个α-淀粉酶添加浓度和对照(无添加)进行试验,研究不同的α-淀粉酶添加浓度对稻草青贮品质的影响,为改善稻草饲用品质提供依据。结果表明,两优培九稻草中的NSC含量为6.89%,淀粉含量为3.68%,显著低于武香粳14稻草中的NSC(16.51%)和淀粉(10.63%)含量(P0.05);添加不同浓度的α-淀粉酶后青贮稻草的饲用品质和发酵品质间存在显著差异(P0.05),两优培九以1.5g/kg的α-淀粉酶添加浓度效果最好,武香粳14以1.0g/kg的添加浓度效果最好;武香粳14稻草添加α-淀粉酶的青贮效果显著优于两优培九。添加α-淀粉酶后两优培九稻草中的NSC、WSC和淀粉含量,以及武香粳14稻草中的NSC和淀粉含量均呈持续下降趋势,而武香粳14稻草中的WSC含量则呈"降-升-降"变化趋势;添加α-淀粉酶处理组的WSC含量在青贮第3天时较青贮第2天均有不同程度上升,并显著高于对照;但在青贮第5~14天期间,WSC含量大幅下降,与对照组差异减小。     

β-折叠抗菌肽的研发及应用策略

抗生素的滥用导致全球细菌耐药性问题愈发严重,严重威胁人类、畜禽健康及畜牧业发展,功能多样且不易导致细菌产生耐药性突变的抗菌肽（antimicrobial peptides,AMPs）逐渐发展为抗生素的潜在替代品。β-折叠是抗菌肽一个主要的二级结构分类,该类肽通常由一个或多个二硫键来维系结构的稳定,现已发现许多抗菌肽具有此类结构。相比于目前研究广泛的α-螺旋AMP,它们被认为拥有更强的抗酶解能力和更高的细胞选择性。本篇综述介绍了β-折叠抗菌肽的来源和抗细菌机理,并梳理了一些常见的分子设计方法和应用策略,以期为β-折叠抗菌肽的研发应用提供新思路。     

蝇蛆抗菌肽的诱导及其抗菌性能研究

为了探究灭活沙门氏菌对蝇蛆抗菌肽的诱导效果,试验用灭活沙门氏菌和沙门氏菌培养蝇蛆,粗提蝇蛆抗菌肽,分时间点测定其浓度及抗菌性能,同时对蝇蛆体内细菌含量进行计数。结果显示,诱导组抗菌肽浓度均高于未诱导组(P<0.05),且在24 h时浓度最高;诱导组对沙门氏菌的抑菌圈直径显著大于未诱导组(P<0.05),显著小于抗生素组(P<0.05),最低抑菌浓度(MIC)值为0.5 mg/mL;蝇蛆体内细菌含量为1.6×10⁵ CFU/g,低于国家规定标准饲料中细菌总数最低值2×10⁶ CFU/g。提示,用灭活沙门氏菌诱导蝇蛆能提高抗菌肽的表达量,且具有较强的抗菌性能及安全性。     

十二指肠灌注大豆小肽和氨基酸对奶山羊小肠肽吸收的影响

本试验探讨了十二指肠灌注大豆小肽和氨基酸对奶山羊小肠肽结合氨基酸和游离氨基酸吸收的影响.选取4只体况良好,体重(38.38±3.09)kg的泌乳奶山羊,安装永久性十二指肠近端瘘管和门静脉、肠系膜静脉以及颈动脉慢性血管插管进行试验.采用交叉试验设计,分别向十二指肠灌注60 g/d大豆小肽以及与60g大豆小肽总氨基酸含量相同的氨基酸.结果表明,与灌注氨基酸相比,灌注大豆小肽显著增加肠系膜排流组织(MDV)总肽结合氨基酸净流量(P<0.05),门静脉排流组织(PDV)总肽结合氨基酸净流量高于灌注氨基酸组,但2组间差异不显著(P>0.05).而灌注氨基酸显著增加奶山羊MDV和PDV总游离氨基酸净流量(P<0.05).研究表明,小肠中肽含量的增加可以促使其在小肠的吸收.     

鳄龟血液抗菌肽生物活性研究

为探讨鳄龟血液抗菌肽初提物的生物活性,采用纸片法和固体培养基连续稀释法对其进行抗菌效果检验,结果表明:分离纯化的血液抗菌肽对G-细菌和G+细菌均有不同程度的抑制或杀灭作用,但不同的微生物对其敏感性不同。其对致病性嗜水气单胞菌、葡萄球菌、枯草杆菌、蜡样芽孢杆菌和沙门氏菌的最小抑菌质量浓度分别为12.5,25,50,50,200μg/mL。鳄龟血液抗菌肽具有①耐热性:将其沸水浴5 min后仍然具有极强的抗菌活性,沸水浴10 min后其抗菌活性减弱;②耐酸性和不溶血性:pH值为6.0,5.0,4.0,2.5时,鳄龟血液抗菌肽对嗜水气单胞菌均有抑菌活性,当pH值下降至2.5时其抑菌圈最小。     

抗菌肽[L6,K11]-IsCT抑菌性能及其稳定性研究

IsCT最初是从蝎子中分离出的一种非细胞选择性线性抗菌肽,为了将其应用于动物饲料,需研究其对常见致病菌的抑制和杀灭作用。本试验采用微量稀释法和琼脂扩散法对ISCT衍生物[L⁶,K¹¹]-IsCT的抗菌活性及其稳定性进行探索。结果显示,相对于金黄色葡萄球菌,[L⁶,K¹¹]-IsCT对大肠杆菌具有更好的抑制作用,其对大肠杆菌的最小抑菌浓度为50 μg/mL。另外,该衍生物对高温表现出很好的稳定性,同时具有很好的酸碱耐受性和人工胃液耐受性。经121 ℃、0.12 MPa处理30 min,以及2.0≤pH≤11.0处理30 min或人工胃液2 h孵育处理后,依然能保持很好的抑菌活性。     

不同时期和方式施用氨基酸硒肥对梨树的影响

摘要：以16年生‘华酥’梨为试材,分别于盛花期和果实发育期,采用叶面喷施和土施两种方式施用氨基酸硒肥,结果表明：氨基酸硒肥可以改善梨果实品质,如极显著提高果肉中硒元素的含量（能够达到对照的8.8～16.3倍）、降低石细胞的含量（比对照降低39.9%～50.2%）,喷施氨基酸硒肥还可以改善叶片质量。综合考虑施肥效果和硒的利用率,盛花期喷施氨基酸硒肥是最经济有效的方法。     

抗菌肽饲料添加剂对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响

对试验小鼠饲喂1‰和3‰抗菌肽饲料添加剂,鸡红细胞吞噬试验检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能,研究抗菌肽饲料添加剂对小鼠免疫功能的影响.结果表明,抗菌肽饲料添加剂可以显著提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数,增强小鼠非特异性免疫功能.     

Research Progress on Biological Mechanism of Epoxyeicosatrienoic Acids

Epoxyeicosatrienoic acids (EETs) are synthesized from arachidonic acid by cytochrome P450 epoxygenases.They modulate ion transport and gene expression,producing vasorelaxation as well as antiinflammatory and cell proliferation effects.Many of the functional effects of EETs occur through activation of signal transduction pathways and modulation of gene expression,events probably initiated by binding to a putative cell surface EETs receptor.However,EETs are rapidly taken up by cells and are incorporated into and released from phospholipids,it suggests that some functional effects may occur through a direct interaction between the EETs and an intracellular effector system.EETs synthesis,metabolism,mechanism of action are reviewed in this paper.     

环氧二十碳三烯酸生物学作用机制的研究进展

花生四烯酸经过细胞色素P450 (cytochrome P450,CYP)表氧化酶途径生成环氧二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acids,EETs)。EETs可以通过调节离子通道和基因表达,从而发挥促进血管舒张、抗炎和细胞增殖等作用。EETs也可通过激活信号转导途径和调节基因表达或与细胞膜受体结合发挥多种生物学功能。EETs也可快速与细胞膜磷脂结合后以共吸收的方式被细胞摄取。文章主要从EETs的来源、去路、作用机制等方面进行讨论。     

日粮中富含限制性必需氨基酸发酵肽对奶牛产奶量和乳品质的影响

研究富含限制性必需氨基酸发酵肽对泌乳中期奶牛产奶量及乳品质的影响。试验选用15头体质量、胎次、产奶量均相近的泌乳180d中国荷斯坦奶牛,采用完全随机区组设计,分为对照组、0．5％和1％发酵肽实验组。结果表明：0．5％和1％发酵肽实验组奶牛产奶量、乳蛋白率、乳脂率及乳干物质率与对照组相比差异均显著升高（P〈0．01）,产奶量分别提高11．0％和13．7％,乳蛋白率分别提高5．6％和6．6％,乳脂率分别提高7．0％和7．5％,乳干物质率分别提高0．25％和0．67％,乳糖率也有一定程度的提高。结果表明：日粮中添加富含限制性必需氨基酸发酵肽可以很好地提高奶牛产奶量、乳蛋白率和乳脂率。