转基因产品CaMV 35S启动子基因实时荧光PCR检测方法中引物探针序列特征及影响

[目的]分析不同标准方法中CaMV 35S启动子基因筛查方法中引物探针位置关系,讨论以引物探针序列重组为阳性对照样品的可行性。[方法]收集国内标准方法中CaMV 35S启动子基因检测引物探针序列与CaMV参考序列比较,确定其引物探针位置特点。设计不同长度间隔序列的串联引物探针重组序列,检测其结果差别。[结果]CaMV 35S启动子基因实时荧光PCR检测方法中引物与探针区间隔序列对扩增结果影响甚微。[结论]通过将引物探针序列顺序串联合成重组序列可以作为特定实时荧光PCR检测方法的阳性对照。     

CaMV35S启动子驱动的FT基因调控杨树早期开花的初步研究

为了研究CaMV35S启动子驱动的FT基因对转基因杨树Populus早期开花的影响,利用Gateway技术构建了35S::FT基因表达载体,并对杨树进行了遗传转化,从转基因杨树花的发育、花器官变异等方面初步探讨了35S::FT促进杨树早期开花性能。结果表明:35S::FT转基因杨树分生组织属性的改变及初始花结构的形成发生于试管培养阶段;花开始发育后如不及时把开花植株继代培养或转至土壤温室培养,初始花结构会凋谢枯萎,不能继续发育。转基因植株花器官的分化与发育发生于温室培养阶段的3~5周内,能够分化出典型的花器官,但发育不完全,具雌雄蕊、花盘结构,无成熟苞片结构,雄蕊不能成熟发育。35S::FT诱导的花均为单朵花,而非野生型的柔荑花序;多数花属于单性花,但转基因雄性无性系中会出现两性花。转基因植株的开花率随着试管苗继代次数的增加而急剧下降,但两性花比例会上升。     

食品和饲料中转基因植物FMV35S启动子环介导等温扩增检测方法的建立

[目的]建立FMV35S基因启动子环介导等温扩增的检测方法.[方法]建立一种检测食品和饲料中FMV35S转基因成分的环介导恒温扩增（LAMP）检测方法,并利用实时浊度法对该LAMP检测方法进行灵敏度、特异性和稳定性评价.[结果]该方法的检测限为0.5％,特异性和稳定性良好.采用LAMP法与荧光PCR方法进行了实际样品对比检测,结果一致可靠.[结论]可采用LAMP法对食品和饲料中FMV35S转基因成分进行检测.     

植物健壮素对辣椒农艺性状的影响

[目的]为辣椒的长季节优质栽培提供理论依据。[方法]采用不同浓度植物健壮素（稀释500、750、1 000倍）对辣椒进行不同间隔时间（4、7、10 d）的处理,以清水处理为对照,研究不同处理对辣椒生长势、结果性、果实商品性和产量的影响。[结果]植物健壮素稀释1 000倍,间隔用药时间为7 d的处理可提高辣椒株高10.5%、茎粗8.5%和开展度10.2%,同时可提高辣椒的结果率（＋17%）,使辣椒商品率达95.0%,产量达17 976.0 kg/hm2,比对照高18.9%。[结论]植物健壮素对辣椒的最佳使用浓度为稀释1 000倍,最佳间隔用药时间为7 d。     

电化学DNA传感器制备及用于花椰菜花叶病毒35S启动子快速检测

[目的]构建一种新型DNA电化学传感器,并用于花椰菜花叶病毒35S启动子片段检测。[方法]通过使用氨基化多壁碳纳米管对玻碳电极进行修饰,利用氨基化多壁碳纳米管对硫堇-金纳米粒子-DNA纳米复合物的吸附固定得到用于识别目标DNA的捕获界面,并将亲和素-辣根过氧化物酶修饰的金纳米粒子作为结构末端的信号分子,完成夹心结构传感器组装。试验采用循环伏安法对辣根过氧化物酶催化过氧化氢得到的还原电流进行测试。[结果]该传感器可实现对目标DNA定量检测,线性范围为1×10-18~1×10~(-11)mol/L,检测限低至6.95×10~(-20)mol/L,可特异性识别错配序列,并且表现出良好的重现性和稳定性。[结论]该传感器在转基因食品的检测方面有良好的应用前景。     

LPQD序列的一个强大数定律

在一个新的条件下,证明了LPQD随机变量序列的一个强大数定律.所得结果推广了已有文献中的相关结论.     

增强外源基因在转基因植物中表达的策略

在转基因研究和生产应用中,人们往往期待目的基因能在转基因生物中高效表达从而实现相关目的--获得具有对杀虫剂、除草剂高抗性的农作物,或以植物作为生物反应器生产具有高附加值的疫苗、抗生素等医药用品以及工业用蛋白、酶类等。综述了各种用于增强外源基因表达效率的策略,从外源基因的整合、转录水平的调节以及外源基因翻译后的蛋白分选三个水平阐述提高外源基因表达的相关策略的利弊,从而为转基因研究提表达供载体构建方面的参考依据。     

35S启动子定量PCR非同源竞争模板的构建

利用35S启动子特异引物,以大肠杆菌基因组DNA为异源模板,经低严谨度PCR扩增并回收克隆适宜DNA片段,构建了35S启动子的非同源竞争对照。测序结果表明,该片段与35S启动子相应序列即靶序列除两端引物序列完全相同外,其他部分没有同源性。利用该非同源竞争对照,建立了转基因玉米35S启动子的QC-PCR技术体系,并进行了校正。     

拟南芥两个MYB基因标签融合蛋白植物表达载体的构建

[目的]研究MYB类基因At3g11280和At5g05790的详尽功能。[方法]利用农杆菌将标签蛋白融合的At3g11280和At5g05790基因转化拟南芥,利用转基因植株中标签蛋白的抗体进行染色体免疫共沉淀（ChIP）试验,挖掘两基因所调控的下游基因。[结果]首先扩增了At3g11280和At5g05790基因的CDS片段,随后经过一系列的亚克隆过程将两个基因和标签蛋白的融合基因片段克隆到载体pWM101上,位于35S启动子的下游,转录受35S启动子的调控。[结论]成功地构建了标签融合蛋白植物表达载体,两个基因分别携带HA和Flag标签,载体的成功构建将为ChIP试验奠定基础。     

Plant Temperature for Sterile Alteration of a Temperature-Sensitive Genic Male Sterile Rice, Peiai64S

The forecast of sterile alteration for the temperature-sensitive genic male sterile （TGMS） line in two-line hybrid rice seed production was traditionally based on screen temperature determined by weather station. The article put forward a new approach based on plant temperature, which was more exact and direct than the traditional method. The result of the simulation of the self-seeded setting rate of a widely used TGMS line, Peiai64S, by several temperature parameters and durations, showed that the fertility was directly affected by the plant temperature at a height of 20 cm or the air temperature around it in three days duration. Using the stem temperature of three days at a height of 20 cm as the simulation parameter, the fertility of Peiai64S had the maximum, minimum and optimum temperatures as 22.8, 21.7 and 22.5℃, respectively, whereas 23.2, 21.5 and 21.8℃ when using the air temperature of three days around the height of 20 cm as the parameter. Such temperature indices can be used to conclude the sterile alteration of TGMS for safeguarding seed production of twoline hybrid rice. The article also established a statistic model to conclude plant temperature by water temperatures at inflow and outflow, and air temperature and cloudage from weather station.     

低温敏感不育水稻培矮64S育性转换的植株温度指标

【目的】在两系法杂交稻制种中，对温敏型不育系育性转换的预测一般根据气象站发布的气温报告（150cm百叶箱温度）进行。本文以低温敏不育系培矮64S为研究材料，提出以直接测量植株育性敏感部位的温度或其周围气温来监测不育系的育性转换的方法，比大气温度预测法更直接和准确。【方法】用不同类型温度及持续时间模拟低温敏不育系培矮64S的育性量化模型。【结果】以20 cm高度处连续3 d平均植株茎温或气温表示育性转换温度指标效果最好。以20 cm连续3 d平均茎温作为指标时，培矮64S的育性转换上限温度为22.8℃，最适可育温度为22.5℃，育性转换下限温度为21.7℃。以20 cm连续3 d平均气温为指标时，培矮64S的育性转换上限温度为23.2℃，最适可育温度为21.8℃，育性转换下限温度为21.5℃。【结论】可以根据本指标对制种田不育系进行育性监测并通过对制种稻田的小气候进行即时调控来保障和提高制种种子纯度，从而降低两系法杂交稻制种风险。本研究还建立了20 cm茎温和气温的统计预报模型，可以根据制种田灌溉时的进水口和出水口水温和气象台报告的百叶箱温度及云量估算20 cm茎温或气温，实现对低温危害的调节和评估。     

水稻强分蘖基因MT1启动子的克隆及与GUS、GFP融合基因的构建

[目的]研究MT1启动子的功能。[方法]通过转基因植株中MT1启动子指导外源基因GUS及GFP的表达。[结果]研究克隆了MT1启动子,并将启动子区与报告基因GUS及GFP的编码区融合。[结论]利用MT1启动子与GUS、GFP构建融合基因,能够用于研究启动子功能。     

响应面法优化促植物生长枯草芽孢杆菌CK15产芽孢条件

[目的]优化枯草芽孢杆菌CK15的发酵条件,提高其芽孢产量。[方法]通过单因素试验优化碳源种类及浓度、氮源种类及浓度、无机盐种类、装液量、摇床转速、初始p H、温度、接种量,采用Plackett-Burman试验筛选出培养基中的显著因素,再利用Box-Behnken试验确定3个因素的最佳浓度。[结果]在玉米粉10.7 g/L、豆粕粉24.4 g/L、CaCO_3 7.4 g/L、NaCl 5.0 g/L、MnSO_4　0.4 g/L、KH_2PO_4　1.0 g/L、装液量50 m L/250 m L、转速为200 r/min、初始p H 7.2、温度30℃、接种量2.0%条件下,芽孢产量达到7.4×109cfu/m L,比优化前提高了80.49%。[结论]响应面法有效提高了枯草芽孢杆菌CK15的芽孢产量。     

耐冷功能基因及其在植物耐冷基因工程中的应用新进展（英文）

低温是影响植物生长发育及作物产量最主要的环境胁迫因子之一。从合成渗透调节物质基因、抗冻蛋白基因、脂肪酸去饱和代谢关键酶基因、抗氧化酶类基因等全面系统地概述了耐冷功能基因及其在植物耐冷基因工程中的应用新进展,以期为植物耐冷遗传改良及育种奠定基础。     

植物抗寒转录激活因子ICE1和ICE2基因的生物信息学分析

从美国在线数据库(NCBI)中获得不同植物ICE1和ICE2基因的完整序列并对其进行分析,以期对ICE基因的结构与生物学功能研究提供理论基础。利用Clustal W2和Mega 5.0软件对其基因的氨基酸序列进行多重比对和系统发育树构建,并采用不同的生物信息手段对其蛋白的一、二、三级结构进行分析。结果表明:ICE1和ICE2基因均含有4个不同的结构域,即富S区、核定位信号区(NLS)、bHLH结构域和转膜区,但其bHLH结构域和富S区(单子叶植物间)存在差异。ICE1和ICE2基因编码的氨基酸主要是脂肪族类氨基酸,以丝氨酸(Ser)和亮氨酸(Leu)为主,其等电点均呈酸性,等电点值均是单子叶双子叶,ICE1和ICE2均为亲水性不稳定蛋白。C和H为ICE1和ICE2蛋白二级结构的主要元件,E和T只是零星分布在整个蛋白中,且H、T、E、C的含量均存在差异,其含量及折叠方式的差异导致蛋白三级结构的不同。ICE1和ICE2基因在基因序列上有相似的结构域,但其蛋白结构存在差异。     

小麦抗病新材料S42抗赤霉病性的主基因+多基因遗传分析

运用主基因 多基因模型对S42×安农8455组合6家系群体对赤霉病抗性积分进行分析。结果表明,在S42×安农8455组合中S42抗赤霉病性遗传符合E-1-1(2对主基因 多基因的加性-显性)模型;2对主基因加性效应较大,显性效应方向相反,多基因的加性和显性效应较小;主基因的遗传率较高,达84.05%~92.17%,多基因的遗传率较低,仅为0.12%~6.64%。     

渐近半伪压缩映射合成隐迭代序列的强收敛性

参照Banach压缩映照原理,合理引进了一涉及有限族渐近半伪压缩映射的具误差的合成隐迭代序列.在一致凸Banach空间中,研究该合成隐迭代序列的强收敛性,得到了具误差的合成隐迭代序列强收敛于有限族渐近半伪压缩的公共不动点的充要条件.