肉用绵羊2号染色体GDF8区域4种微卫星标记多态性研究

选择了2号染色体GDF8区域可能与生产性能相关性较大的4个高度多态微卫星基因座 （BM81124，TEXAN2，FCB128，BMS1591），分析这些位点在 Dorset、Suffolk和Texel 3个肉羊品种的多态分布情况。结果表明，这4个微卫星标记在3个绵羊品种中的等位基因数分别为:10、12、7、11，其多态信息含量/杂合度分别为:0.7778/0.8045、0.712/0.7520、0.7551/0.7852、0.8057/0.8289，可见这些微卫星位点在3个绵羊品种中具有比较丰富的多态性。因此它们可以作为进行生产性状与标记间连锁分析的遗传标记，用于进一步的QTL定位研究。     

基因重组山羊痘病毒的构建及鉴定

 将口蹄疫病毒（FMDV）衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因与启动绿色荧光蛋白双向串连痘苗病毒启动子相连,以KpnⅠ为插入位点,将整体基因片段插入山羊痘病毒转移载体骨架pUC119-TK之中,构建共表达重组山羊痘病毒转移载体pTK-P7.5-GFP-P12A3C。与疫苗弱毒株山羊痘病毒共转染BHK21细胞,经绿色荧光筛选,RT-PCR检测,成功获得能正确表达目的蛋白的重组山羊痘病毒株vTK-3CP1-GFP。     

基因表达的影响

 试验旨在研究不同日粮代谢能水平对北京油鸡脂肪沉积及脂蛋白酯酶（LPL）基因mRNA表达影响。试验以3周龄北京油鸡公鸡为研究对象，将480只公鸡随机分为4组，分别饲喂4个代谢能水平的日粮（12.122、12.540、12.958和13.376 MJ/kg），每个处理组5个重复，每个重复24只鸡。试验期为10周。采用荧光定量PCR方法检测LPL基因mRNA表达水平。结果表明，日粮代谢能水平对鸡体脂沉积各项指标和LPL基因mRNA表达水平影响极显著，随日粮代谢能水平提高，各项体脂沉积指标极显著上升，胸肌和腿肌IMF、皮脂重和皮脂率在ME3达到峰值，LPL基因mRNA表达水平在ME2组达到峰值（P＜0.01）。LPL基因mRNA表达水平与腹脂率、皮脂重和皮脂率呈显著正相关（P＜0.05）。研究结果提示，日粮代谢能水平显著影响北京油鸡体脂沉积和LPL基因mRNA表达；LPL基因表达影响北京油鸡体脂沉积状况。     

微卫星标记BM3413和OB_2在5个绵羊群体中多态性的研究

选萨福克羊、德国美利奴羊、特克塞尔羊、乌珠穆沁羊以及右玉本地绵羊5个绵羊群体共250只,通过耳组织提取基因组DNA,用2对微卫星引物进行PCR扩增,通过电泳分型、凝胶成像系统分析各位点等位基因及全部个体的标记基因型,计算基因频率、多态信息含量(PIC)和杂合度等,从分子水平上分析5个绵羊品种的遗传多态性.结果表明:BM3413和OB2这2个位点的等位基因数分别为7和8,多态信息含量PIC＞0.5,杂合度为0.827 1～0.846 7,均属于高度多态性位点,用于作为与生产性能相关的遗传标记是较理想的.     

胞外区基因的克隆、可溶性表达和纯化

 从鸡脾脏中提取总 RNA,以总RNA为模板,5’-ATC TAG AGG TAC CGG ATC C-(T)₁₅-3’为反转录引物,采用TaKaRa AMV反转录酶合成First-strand cDNA (fcDNA)。根据GenBank中登录的鸡的BF2基因胞外区序列,设计了含EcoRⅠ和 HindⅢ 酶切位点的2对引物,分别扩增鸡BF2的胞外区基因。PCR产物经纯化回收后,插入到含LacZ基因的原核克隆载体pGEM-T Easy中,转化至大肠杆菌JM109感受态细胞,经EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切及PCR鉴定,筛选出阳性克隆。再把所克隆的片段亚克隆到表达载体pMAL-p2X vector,构建重组质粒p2X/BF2（1-5）。将重组表达质粒转化入大肠杆菌TB1感受态细胞,筛选阳性克隆,经IPTG诱导表达后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析。结果表明,本研究克隆了5类鸡BF2的胞外区基因序列,试验结果证明本研究已成功克隆并可溶性表达了5类BF2胞外区蛋白质分子,全长约807~819 bp,编码约269~273个氨基酸。采用淀粉树脂柱亲和层析和DEAE凝胶过滤方法对表达产物进行了纯化,并对纯化的表达产物进行了western blot鉴定。本研究为进一步利用BF2的胞外区在体外构建MHC Ⅰ类分子结合筛选抗原表位肽平台奠定了基础。     

云南地方绵羊品种遗传多样性的微卫星分析

利用29个微卫星标记,对云南4个地方绵羊品种遗传多样性进行了检测,统计了各品种的等位基因频率,计算了遗传杂合度(H)、多态信息含量(PIC)和群体间的遗传距离。结果表明,29个微卫星位点除BM1206为中度多态,BM315为低度多态外,其余位点均为高度多态,各绵羊品种PIC值都在0.8左右,有较丰富的遗传多样性。     

3个绵羊种群MHC微卫星标记的遗传多样性

利用微卫星技术对小尾寒羊、道赛特羊、特克赛尔羊3个绵羊种群共218只绵羊的主要组织相容性复合体（MHC）ClassⅡ区DRB1、DRB2、DYMS、MB026基因座的微卫星多态性进行了研究。统计了3个种群的等位基因组成,并计算了微卫星基因座的等位基因频率、杂合度和多态信息含量。结果显示,4个基因座在3个种群中的平均等位基因数分别为14、10.33、12.67、5.33个;平均多态信息含量分别为0.8315、0.8037、0.7946、0.3992;平均杂合度分别为0.8473、0.8229、0.8165、0.4202。研究结果说明,DRB1、DRB2、DYMS基因座为高度多态基因座,MB026基因座为中度多态基因座,在这4个微卫星基因座上,小尾寒羊、道赛特羊及特克赛尔羊均具有丰富的遗传多态性,可作为有效的遗传标记用于各绵羊品种的遗传多样性和系统发生关系分析。     

基因克隆测序与原核表达

 根据GenBank中登录的犬瘟热病毒h基因序列设计一对引物，利用RT-PCR方法扩增出犬瘟热病毒弱毒疫苗株的h基因，将其插入到克隆载体pMD18-T中，经蓝白斑筛选及SalⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定挑出阳性克隆进行序列测定，序列分析结果表明，该基因与GenBank上标准代表毒株序列完全同源；与扬州分离株、长春分离株、新疆分离株、日本分离株D85755同源性分别为90.6%、91.3%、90.5%、91%；与Onderstepoort、Convac株、美国分离株98-2666-2同源性较高，分别为97.7%、97.2%、98.1%。再将其定向克隆于原核表达载体pET-32a(+)中，转化感受态E.coli BL21细胞，经IPTG诱导表达分子质量约64 ku的重组H蛋白。     

基因外显子2的克隆与序列分析

 本研究对高繁殖力的山羊品种济宁青山羊和低繁殖力的山羊品种内蒙古绒山羊共20只母羊的骨形态发生蛋白15（bone morphogenetic protein 15, BMP15）基因第2外显子的扩增产物进行了克隆测序及序列比较分析。结果表明：BMP15基因第2外显子的第3对引物扩增片段存在多态。济宁青山羊与内蒙古绒山羊相比，其BMP15基因外显子2差异由2个核苷酸和2个氨基酸改变组成，核苷酸同源性为99%。济宁青山羊与鸡、小鼠、人、猪、牛、绵羊之间BMP15基因外显子2的核苷酸序列同源性为71%～99%，氨基酸序列同源性为43%～99%。     

微卫星标记BM3413和OB2在5个绵羊群体中多态性的研究

选萨福克羊、德国美利奴羊、特克塞尔羊、乌珠穆沁羊以及右玉本地绵羊5个绵羊群体共250只,通过耳组织提取基因组DNA,用2对微卫星引物进行PCR扩增,通过电泳分型、凝胶成像系统分析各位点等位基因及全部个体的标记基因型,计算基因频率、多态信息含量（PIC）和杂合度等,从分子水平上分析5个绵羊品种的遗传多态性。结果表明：BM3413和OB2这2个位点的等位基因数分别为7和8,多态信息含量PIC〉0.5,杂合度为0.827 1～0.846 7,均属于高度多态性位点,用于作为与生产性能相关的遗传标记是较理想的。     

利用14个微卫星标记分析新疆北疆绵羊群体遗传多样性

研究利用14个微卫星标记,对新疆北疆9个绵羊群体的遗传多样性和系统发生关系进行了分析。结果表明:14个微卫星位点在9个绵羊群体中的多态信息含量(PIC)除BM1824、OarCP20为低、中度多态外,其余12个微卫星均为高度多态。绵羊群体的平均PIC为0.711,H为0.740,No为9.2,Ne为4.760。中国美利奴羊和新疆细毛羊与其他7个绵羊群体遗传距离较远;巴什拜羊与杂交F_1代、杂交F_2代和杂交F_3代遗传距离较远;哈萨克羊、阿勒泰羊、巴什拜羊和也木勒羊遗传距离较近;各绵羊品种与其来源、育成史和地理分布一致。     

八个绵羊品种遗传多样性分析及引进肉用品种与地方品种杂种优势预测

利用5个微卫星标记在山西省主要8个绵羊品种中的多态性研究,预测进口肉用绵羊品种与地方绵羊品种的杂种优势,为山西省肉用绵羊生产提供理论依据.结果表明,8个绵羊品种在5个微卫星位点上平均等位基因数在6.0～8.6个之间,平均有效等位基因在3.81～5.68个之间,平均基因杂合度在0.6711～0.7896之间,平均多态信息含量在0.6152～0.7462之间,品种间遗传分化系数为0.1390.说明选择5个微卫星座位均为高度多态位点,可用于8个绵羊品种遗传多样性评估;8个绵羊品种在5个微卫星座位上都存在较大的遗传变异,且总群体86.1%遗传变异发生在品种内.根据标准遗传距离和Nei's遗传距离,若用本地绵羊、广灵大尾羊做母本,父本选择顺序依次为特克赛尔羊、杜泊羊、萨福克羊、道赛特羊;若用小尾寒羊做母本,父本选择顺序为特克赛尔羊、萨福克羊、杜泊羊、道赛特羊.若用乌珠穆沁羊做母本,父本选择顺序为特克赛尔羊、萨福克羊、道赛特羊、杜泊羊.进口肉用绵羊品种与地方绵羊品种最理想杂交组合为:特克赛尔羊与本地绵羊、广灵大尾羊、小尾寒羊;较差杂交组合为:道赛特羊与小尾寒羊、乌珠穆沁羊,杜泊羊与乌珠穆沁羊.     

特克塞尔羊和地方绵羊品种微卫星DNA多态性分析及群体间杂种优势预测

文章宗旨是利用5个微卫星标记分析5个绵羊品种的遗传结构变异,了解特克塞尔羊和地方绵羊品种的遗传多样性及亲缘关系,以期为种质资源合理利用和保护提供理论依据.根据5个绵羊品种在5个微卫星位点的等位基因组成及频率进行群体遗传统计分析.5个微卫星座位在5个绵羊品种中共检测到78.0个等位基因,各位点的等位基因数(Na)11.0～19.0个;5个绵羊品种平均多态信息含量(PIG)为0.615 2～0.7373,平均基因杂合度(He)为0.671 1～0.7820.特克塞尔羊与晋中绵羊的标准遗传距离(DS)为最大(1.6668),其余依次为广灵大尾羊(1.3062)、小尾寒羊(1.095 9)、乌珠穆沁羊(0.8308).表明5个微卫星座位均为高度多态位点,可作为有效遗传标记用于绵羊品种的遗传多样性及品种间遗传关系分析;5个绵羊品种在5个微卫星位点遗传变异大、多态性丰富.据DS推测,特克塞尔羊(Texel)与晋中绵羊(Jinzhong sheep)杂交可望获得较大的杂种优势,与广灵大尾羊(Guangling Large-tailed sheep)、小尾寒羊(Small-tailed Han sheep)的杂种优势次之,与乌珠穆沁羊(U jumqin sheep)杂种优势稍小.     

三种微卫星DNA标记在奶牛中的应用

选择了分布在牛的3条染色体上的3个微卫星DNA标记UWCA9、BM3413、IDVGA-2,分析其在所供牛群体中的多态分布情况。结果表明,每个位点的等位基因个数及多态信息含量值分别为4/0.70、5/0.75和6/0.80。经分析各标记位点均符合孟德尔遗传规律。     

微卫星标记ILSTS011在3个绵羊品种中的遗传多样性分析

为了分析微卫星标记ILSTS011的遗传多态性,研究以河南省地方绵羊品种大尾寒羊、小尾寒羊和豫西脂尾羊为研究对象,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分离微卫星标记的带型.结果表明:在3个绵羊品种中均检测到微卫星标记ILSTS011有3个等位基因,微卫星标记ILSTS011的平均杂合度为0.614 1,平均有效等位基因数为2.614 0,平均多态信息含量为0.551 3.说明ILSTS011为高度多态基因座,可作为有效的遗传标记用于大尾寒羊、小尾寒羊和豫西脂尾羊的遗传多样性分析.     

八个绵羊品种遗传多样性分析及引进肉用品种与地方品种杂种优势预测

利用5个微卫星标记在山西省主要8个绵羊品种中的多态性研究,预测进口肉用绵羊品种与地方绵羊品种的杂种优势,为山西省肉用绵羊生产提供理论依据。结果表明,8个绵羊品种在5个微卫星位点上平均等位基因数在6.0-8.6个之间,平均有效等位基因在3.81-5.68个之间,平均基因杂合度在0.6711-0.7896之间,平均多态信息含量在0.6152-0.7462之间,品种间遗传分化系数为0.1390。说明选择5个微卫星座位均为高度多态位点,可用于8个绵羊品种遗传多样性评估;8个绵羊品种在5个微卫星座位上都存在较大的遗传变异,且总群体86.1%遗传变异发生在品种内。根据标准遗传距离和Nei＇s遗传距离,若用本地绵羊、广灵大尾羊做母本,父本选择顺序依次为特克赛尔羊、杜泊羊、萨福克羊、道赛特羊;若用小尾寒羊做母本,父本选择顺序为特克赛尔羊、萨福克羊、杜泊羊、道赛特羊。若用乌珠穆沁羊做母本,父本选择顺序为特克赛尔羊、萨福克羊、道赛特羊、杜泊羊。进口肉用绵羊品种与地方绵羊品种最理想杂交组合为：特克赛尔羊与本地绵羊、广灵大尾羊、小尾寒羊;较差杂交组合为：道赛特羊与小尾寒羊、乌珠穆沁羊,杜泊羊与乌珠穆沁羊。     

辽宁绒山羊七个微卫星位点遗传多样性分析

分析了7个微卫星基因座位OarAE101、OarJMP8、BM143、BM6506、BM1824、BM6438、ILSTS004在辽宁绒山羊4个家系中的遗传多态性.结果表明:7个微卫星标记中仅有4个微卫星位点(OarAE101、OarJMP8、BM143、BM6506)表现出了多态性.OarAE101位点多态信息含量最高,pic为0.727,BM143位点多态信息含量最低,PIC为0.526.在所标记群体中平均有效等位基因数为3.249个±1.318个;平均多态信息含量为0.635±0.087;遗传杂合度均值为0.638±0.182.说明辽宁绒山羊品种内的遗传变异处于一个较高的水平,遗传多样性丰富,选择潜力很大.     

辽宁绒山羊7个微卫星位点的遗传多样性分析

试验分析了7个微卫星基因座位OarAE101、OarJMP8、BM143、BM6506、BM1824、BM6438I、LSTS004在辽宁绒山羊4个家系中的遗传多态性。结果表明,7个微卫星标记中仅有4个微卫星位点(OarAE101、OarJMP8、BM143、BM6506)表现出了多态性。OarAE101位点多态信息含量最高,为0.727;BM143位点多态信息含量最低,为0.526。在所标记群体中平均有效等位基因数为3.249个;平均多态信息含量为0.635;遗传杂合度均值为0.638。说明辽宁绒山羊品种内的遗传变异处于一个较高的水平,遗传多样性丰富,选择潜力很大。     

新疆13个绵羊品种及1个杂交群体遗传多样性的微卫星分析

利用7个微卫星标记对新疆13个绵羊品种和1个杂交群体的遗传多样性进行了检测。统计了各品种的等位基因组成、平均有效等位基因数(E),利用等位基因频率计算出各品种的平均遗传杂合度(H)、多态信息含量(PIC)和品种间的遗传距离。结果表明,7个微卫星位点均为高度多态,可作为有效的遗传标记用于绵羊品种之间遗传多样性和系统发生关系的分析。各品种的分子系统发生关系与其来源、育成史及地理分布基本一致。     

利用微卫星DNA多态性预测引进肉用绵羊品种杂种优势

旨在利用微卫星DNA在不同绵羊群体中的多态性预测引进肉用绵羊品种与地方绵羊品种的杂种优势。利用23个微卫星基因座对4个国外引进肉羊品种及3个地方绵羊品种的群体多态信息含量、有效等位基因数、杂合度和遗传距离进行遗传检测,并测定引进肉羊与地方肉羊品种的杂交效果。结果,23个微卫星座位在7个绵羊群体中均呈现高度多态,共检测到348个等位基因,平均每个座位等位基因数为15个;多态信息含量在0.532 1~0.936 1,有效等位基因数在2.572 8~9.345 8,平均杂合度在0.549 2~0.936 0,品种平均杂合度在0.714 2~0.829 5,可以用于绵羊遗传多样性的评估。从不同品种看,无角陶赛特的遗传变异最大,而小尾寒羊的遗传变异相对较小;经遗传关系分析,在引进的4个肉羊品种中,与小尾寒羊、蒙古羊及滩羊杂交优势由大到小依次为白萨福克、波德代、无角陶赛特、特克赛尔,与实际杂种优势测定结果一致。利用微卫星DNA多态性预测引进肉用绵羊品种与小尾寒羊、蒙古羊及滩羊的杂种优势是可行的,这将对今后绵羊育种具有重要的应用价值和指导意义。