新疆部分地区牛羊源产志贺毒素大肠埃希菌菌株检测与分析

产志贺毒素大肠埃希菌（Shiga toxin-producing Escherichia coli，STEC）是一类携带了前噬菌体编码的一种或两种志贺毒素基因的新发高致病性食源性病原菌，已成为威胁人类健康的重要公共卫生问题。为了解新疆部分地区牛、羊源各个环节产志贺毒素大肠埃希菌的感染情况及其遗传多样性，以及分离株对17种常见抗生素的敏感性，笔者采用PCR方法对STEC分离株进行了4种毒力基因（stx1、stx2、eae、hlyA）的检测和ERIC-PCR基因分型研究。结果表明：从屠宰场、养殖场和市场共431份样品中分离出产志贺毒素的大肠埃希菌64株，其中，编码stx1+stx2的STEC有31株（48.4%），只编码stx1的STEC有29株（45.3%），只编码stx2的STEC有4株（6.3%），4种毒力基因同时存在的有1株。药物敏感性检测发现STEC菌株对麦迪霉素（61%）、头孢噻吩（4.7%）、头孢西丁（4.7%）、氨苄西林（3.1%）、哌拉西林（1.6%）、妥布霉素（1.6%）、头孢唑啉（1.6%）等7种抗生素存在耐药。ERIC-PCR检测结果呈多态性分布，分为A（36株）和B（28株）两个簇。STEC菌株在新疆部分地区牛、羊源各个环节被检出，其中一些菌株可能会增加对食物的污染，从而引起人发病。     

新疆牛、羊和骆驼源产志贺毒素大肠埃希菌的系统进化分群、血清群与毒力基因及耐药性分析

旨在了解新疆牛、羊和骆驼源产志贺毒素大肠埃希菌（Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC）的系统进化分群、血清群、毒力基因、耐药性及其遗传多样性,本研究采用PCR方法对牛、羊和骆驼源STEC进行了系统发育分群、血清群和毒力基因stx₁、stx₂（包括亚型）、eaeA、hlyA检测,通过K-B纸片法对分离株进行药物敏感性检测,并对其进行ERIC-PCR基因分型。结果表明：94株非O157 STEC以B1群为主,含9个血清群,包括O146（n=14）、O22（n=7）、O3（n=4）、O168（n=4）、O8（n=3）、O167（n=2）、O88（n=1）、O112ab （n=1）和O147（n=1）。毒力基因检测显示,46.8%（44/94）仅携带stx₁,6.4%（6/94）仅携带stx₂,46.8%（44/94）同时携带stx₁+stx₂。羊源STEC以携带stx₁+hlyA为主（68.0%）;牛源STEC以携带stx₁+stx₂+hlyA为主（57.9%）;骆驼源STEC以携带stx₁+hlyA为主（25.0%）。stx_1a主要分布于牛源STEC,stx_1c主要分布于羊源STEC。14株（14.9%）为耐药菌,对头孢他啶、四环素、头孢噻肟、氨苄西林和氨曲南的耐药率为3.2%~5.3%,对复方新诺明、头孢吡肟、哌拉西林-他唑巴坦、氨苄西林-舒巴坦、阿莫西林-克拉维酸和多黏菌素B的耐药率为1.1%~2.1%。ERIC-PCR结果显示牛、羊和骆驼源STEC亲缘关系较近。牛、羊和骆驼携带多种已知血清群STEC,贮存丰富的毒力基因,存在感染人类的风险,应在屠宰加工过程中予以预防和控制。     

Study on the Virulence Gene Distribution and Genetic Evolution of Cattle Shiga Toxin-producing Escherichia coli Isolates

This study was aimed to understand the relationship of virulence gene distribution and genetic evolution between cattle originated Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) and human originated enterohaemorrhagic Escherichia coli (EHEC) O157. This experiment collected 18 strains STEC in a dairy farm from Jiangsu province and 9 STEC reference strains (human, sheep, swine and avian), according to the method of U.S. Centers for Disease Prevention and Control Center (PulseNet), using the XbaⅠ enzyme digestion and pulsed field gel electrophoresis (PFGE) analysis, virulence genes were detected in some STEC isolates. The virulence gene distribution of O157 from different origin was remarkably different. The cattle originated STEC O157 and the human originated EHEC O157:H7 (EDL933W) had the most similar virulence gene distribution. In contrast, virulence genes were lack in cattle STEC O18 and O26, even though the cattle STEC O18 and O26 had the similar genotype as human EHEC O157:H7 (EDL933W). PFGE of Xba Ⅰ digested chromosomal DNA from 27 isolates of STEC exhibited 22 profiles. In general,the Dice coefficients of different originated STEC ranged from 72% to 100%.Cattle STEC O157 had a high similarity with two strains of human originated EHEC O157, while a low similarity was demonstrated between cattle STEC O157 and STEC O157 of swine and avian. The Dice coefficients of the cattle STEC O157 and the two strains of human EHEC O157 ranged from 83% to 95%. The Dice coefficients of cattle STEC O26 (Ⅶ,Ⅷ) and the two strains of human EHEC O157 were more than 82%. Therefore, it was concluded that the cattle STEC O157 and human EHEC O157 had a closer relationship in terms of virulence gene distribution and in genetic evolution.     

牛源产志贺毒素大肠杆菌分离株的毒力基因分布和遗传进化分析

为了探讨牛源产志贺毒素大肠杆菌（Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC）分离株在毒力基因分布和遗传进化方面与人源EHEC O157菌株之间的关系,本试验选择收集来自江苏某奶牛场的STEC菌株18株以及人源、羊源、猪源、禽源STEC参考菌株9株,参照美国疾病预防控制中心PulseNet推荐的方法,运用XbaⅠ酶进行酶切并完成脉冲肠凝胶电泳（PFGE）分型和聚类分析;同时对部分STEC菌株进行毒力基因检测。结果表明,经毒力基因检测,不同来源的O157菌株毒力基因分布不尽相同,其中牛源STEC O157与参考株EHEC O157∶H7（EDL933W）的基因排谱最为相近;牛源STEC O18和O26的基因排谱与参考株EHEC O157∶H7（EDL933W）类似,但存在部分基因的缺失。对27株不同来源的STEC分离株进行PFGE,产生了22种不同的酶切图谱。总体来看,不同来源的STEC Dice相似性系数在72%~100%之间。牛源O157分离株与猪源及禽源O157菌株的相似度偏低,而与两株人源O157分离株的相似度偏高,Dice相似性系数在83%~95%之间,牛源O26（克隆群Ⅶ、Ⅷ）与人源O157的相似性系数 > 82%。显然,从牛群中分离到的部分STEC菌株与人源EHEC O157具有较近的遗传进化关系。     

产志贺毒素大肠杆菌流行病学及主要毒力因子研究进展

产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC) 是一类能引起包括水样腹泻、出血性结肠炎、尿毒综合症等一系列人体疾病的人畜共患肠道致病菌,其感染在世界范围内包括中国都有过暴发流行。文章阐述了STEC O157血清型和非O157血清型的分布特征及流行趋势,同时还对该病的主要毒力因子进行了综述,以期为该病的防控提供科学依据。     

江苏某奶牛场健康奶牛体内产志贺毒素大肠杆菌的分离鉴定及其对小鼠致病性的研究

通过对江苏省某奶牛场连续6个月的定群、定畜跟踪调查,获得产志贺毒素大肠杆菌(STEC)在该牛场分布的广泛性、持续性和血清型多样化的资料,并对一些重要血清型分离株作致病性的鉴定.基于本实验室已经建立的多重PCR方法对stx1、stx2、eaeA、ehxA共4个基因进行检测,对检测出的阳性样品,非O157 STEC采用多重PCR结合CT-SMAC平板的分离方法,而O157 STEC通过免疫磁珠结合O157显色平板的分离方法.结果表明,该奶牛场STEC的初筛率为16.1%(112/696),分离率为11.1%(77/696).分离株属于35种O血清型和60种O:H血清型.该场的优势血清型为O4、O26和O93,O157在该场存在,但并非优势血清型.77个分离株中,stx2基因的检出率为68.8%,远远高于其它毒力基因,如stx1(19.5%)、eaeA(11.7%1)和ehxA(20.8%).该场分离到一些O157和O26血清型的菌株,对小鼠具有较强的致病性.奶牛是STEC的天然宿主,可健康带菌.除了O157STEC外,非O157 STEC中一些高致病力菌株对人类的健康也存在威胁.     

新疆不同地区牛源大肠杆菌耐药性分析

This study was aimed to investigate the resistance of Escherichia coli isolates from cattle farms in Xinjiang to antibiotics. The resistances of Escherichia coli isolates from cattle farms in five regions to commonly used antibiotic were determined using microdilution broth assay. Escherichia coli isolates were highly resistant to ampicillin (up to 39.3%) in all regions, and existed multidrug-resistant, but zero resistance was the dominant. Escherichia coli isolates from E cattle farm in Cherqi town, Baicheng county, exhibited resistant to three kinds of quinolones (6.7%). The results suggested that the resistances of Escherichia coli isolates to commonly used antibiotics were not serious in Xinjiang.     

牦牛产志贺毒素大肠杆菌主要黏附因子相关基因的分子流行病学调查

为了解中国牦牛产志贺毒素的大肠杆菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli, STEC)中主要黏附因子的流行情况,采用PCR方法对来自四川甘孜阿坝等地区健康牦牛的70株STEC的eae、saa、iha 3种与黏附相关的毒力基因进行检测,并对部分含有相关黏附因子的阳性分离株的毒力基因进行了克隆及序列分析。结果显示,牦牛STEC中saa、iha的阳性率分别为71.42%(50/70)和78.57%(55/70),无eae基因序列(0/70),saa、iha的测序结果与GenBank上序列的同源性分别为100%和93%~99%。健康牦牛分离的STEC无LEE毒力岛编码eae,其他的一些与黏附相关的主要毒力基因saa、iha的携带率较高。     

肉牛溶血性大肠埃希菌分离鉴定和毒力与耐药基因检测及药敏试验

为了解肉牛溶血性大肠埃希菌毒力基因和耐药基因分布情况及药物敏感性,从河北省围场县采集的健康肉牛鼻腔棉拭子中分离鉴定溶血性大肠埃希菌,采用PCR检测大肠埃希菌的4个毒力基因和12个耐药基因,并采用K-B法进行药敏试验。结果表明,从116份健康的肉牛鼻腔中分离鉴定出23株溶血性大肠埃希菌,分离率为19.8%;毒力基因检测结果显示,6株菌同时携带LEE(Ler、eaeA)毒力基因,携带率26.1%,18株同时携带高致病性毒力基因HPIirp2、fyuA,携带率78.3%,6株同时携带LEE和HPI毒力基因,携带率为26.1%;耐药基因检测结果显示,blaTEM、aadA1耐药基因的携带率最高,为100%;药敏试验结果显示,23株溶血性大肠埃希菌对头孢氨苄、复方新诺明、磺胺间甲氧嘧啶耐药。结果表明,溶血性大肠埃希菌普遍存在于健康肉牛鼻腔中,HPI毒力基因和β-内酰胺类和耐链霉素类耐药基因携带率高。对河北省围场县肉牛溶血性大肠埃希菌毒力基因和耐药基因进行了研究,并进行药物敏感性分析,结果提示溶血性大肠埃希菌对肉牛养殖存在潜在威胁。     

Prevalence,O-genotype and Shiga toxin (Stx) 2 subtype of Stx-producing Escherichia coli strains isolated from Argentinean beef cattle

The aims of this study were to investigate prevalence, O-genotype, and virulence gene profile including Shiga toxin (Stx) 2 gene-subtype of Stx-producing Escherichia coli (STEC) in beef cattle from the Bahía Blanca in Argentina. Rectal swabs were collected from 283 beef cattle in 2012. stx genes were detected in 90 (32%) out of the 283 rectal swabs by stx gene-specific PCR assay. The positive cases were 13 with stx1, 58 with stx2, and 19 with both stx1 and stx2. Among 90 stx gene-positive samples, 45 STEC strains were isolated, which included 3 stx1, 34 stx2, and eight stx1 and stx2 genes positive isolates. O-genotyping grouped 45 STEC strains into 19 different O-genotypes such as Og8, Og145, Og171, Og185 (4 from each), Og22, Og153, Og157 (3 from each) and others. Various stx2 gene-subtypes were identified in 42 STEC strains: 13 positive cases for stx2a, 11 for stx2c, 3 for stx2g, 10 for stx2a and stx2d, 4 for stx2a and stx2c, and 1 for stx2b, stx2c and stx2g. efaI gene, generally prevalent in clinical strains, was detected in relatively high in the STEC strains. These data suggest that stx2a and stx2c were distributed not only in O145 and O157 but also in minor O-genotypes of STEC in Argentina.     

我国部分地区乳房炎奶样中大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解我国部分地区奶牛乳房炎奶样中大肠杆菌的耐药情况,以指导牛场合理使用抗生素,提高治疗效果和畜产品质量,从全国六个省市自治区采取158例奶牛乳房炎的奶样,对奶样中的大肠杆菌进行分离纯化与鉴定,并进行药敏试验。结果显示,158份奶样中,共分离出38株大肠杆菌,其中黑龙江18株(分离率为36.0%)、上海3株(分离率6.0%)、北京3株(分离率27.2%)、新疆10株(分离率33.3%)、山东4株(分离率26.7%)、陕西0株(分离率0)。药敏试验显示,磺胺异噁唑耐药率最高,为73.7%;环丙沙星、诺氟沙星、四环素、链霉素药物的敏感率最高,为100%。分离菌株最多耐13种药物,最少耐4种药物,呈现多重耐药性。不同种类的抗生素中,上海和山东对β-内酰胺类药物和氯霉素类药物以及黑龙江、上海和新疆对磺胺类药物的耐药情况比较严重,耐药率高达50%以上。结果表明,各地区分离株对多种抗菌药物产生了不同程度耐药性和多重耐药,临床兽医在治疗时应注意合理用药,提高疗效和畜产品质量,减少耐药性的产生。     

京津冀部分地区致犊牛腹泻大肠杆菌毒力基因、耐药基因检测及药物敏感性分析

【目的】探明京津冀地区犊牛腹泻大肠杆菌毒力基因与耐药基因流行情况,筛选敏感药物。【方法】于2020年12月至2021年7月从京津冀地区部分牛场采集146份犊牛腹泻样本,通过细菌分离纯化、革兰氏染色镜检及16S rRNA测序进行大肠杆菌分离鉴定;采用PCR方法对分离菌进行毒力基因（F17、K99、F41、STa、stx1、irp2和fyuA基因）和耐药基因（aac（6'）-Ⅰb、bla_CTX-M、bla_TEM、OqxB、tetA和sul1基因）检测;采用K-B纸片法进行药物敏感性试验。【结果】分离菌在鉴别培养基上的生长形态及革兰氏染色镜检结果均符合大肠杆菌生理生化特性,分离菌16S rRNA测序结果呈单一峰值,对拼接序列在NCBI中进行BLAST比对后发现,与大肠杆菌相似性均>96%,确定分离菌为大肠杆菌。试验共分离鉴定大肠杆菌142株,其中有88株携带毒力基因,占61.97%（88/142）,毒力基因F17、K99、F41、STa、stx1、irp2、fyuA阳性率分别为24.65%、0.70%、0、2.11%、1.41%、45.07%和21.83%,其中F17、irp2、fyuA为优势毒力因子,同时携带多重毒力因子的大肠杆菌检出率较低。aac（6'）-Ⅰb、bla_CTX-M、bla_TEM、OqxB、tetA和sul1 6种耐药基因皆被检出,bla_TEM基因检出率最高,为45.77%,aac（6'）-Ⅰb和OqxB基因检出率最低,均为9.15%,分离菌株主要携带1~3种耐药基因。药物敏感性试验结果显示,142株分离菌对诺氟沙星敏感率最高,其次为环丙沙星,对青霉素敏感率为0,耐药现象严重,耐2种以上抗菌药物的菌株达86.62%。【结论】京津冀地区犊牛腹泻大肠杆菌毒力基因与耐药基因流行广泛,耐药普遍,多重耐药现象严重。本研究可为京津冀地区犊牛腹泻的防治提供理论依据。     

产志贺毒素多重耐药大肠杆菌噬菌体的生物学特性及全基因组分析

为探明大肠杆菌噬菌体的生物学特性和全基因组特征,本研究以在广西某猪场污水中分离得到的1株产志贺毒素且多重耐药的大肠杆菌GXEC010为宿主菌,同时在污水中分离到1株具有裂解作用的噬菌体,并通过透射电镜观察、最佳感染复数测定、一步生长曲线绘制、热敏感性与酸碱度稳定性评估、杀菌试验及全基因组测序等方法分析该噬菌体的生物学特性与基因组特征。结果表明,分离纯化得到能高效裂解大肠杆菌GXEC010的噬菌体,命名为vB_EcoM_BP10,其噬菌斑呈清晰透明,边缘光滑整齐;该噬菌体的最佳感染复数为1;一步生长曲线结果显示,感染宿主菌潜伏期为5 min,爆发期为65 min,爆发量为51;可耐受温度范围为30~60 ℃,在pH为5~8的环境中能维持稳定性;噬菌体杀菌试验结果显示,感染复数（MOI）为1时噬菌体vB_EcoM_BP10具有良好的杀菌效果。全基因组测序结果表明,噬菌体vB_EcoM_BP10基因组总片段长度为52 288 bp,GC含量为44.16%,含有71个阅读框（ORF）。GO功能注释表明,噬菌体vB_EcoM_BP10可参与小分子代谢、细胞氮化合物代谢等生物学过程中,具备核苷酸转移酶活性、离子结合、DNA结合等分子功能。与Escherichia phage ST32、 Enterobacteria phage phiEcoM-GJ1的亲缘关系较近。综上所述,噬菌体vB_EcoM_BP10具有清晰的宿主受体特异性,良好的热稳定性和酸碱稳定性,本研究结果能为有效防控产志贺毒素多重耐药大肠杆菌奠定一定的理论基础。     

山东省不同地区治疗禽大肠杆菌病的用药调查及菌株耐药性分析

为了解山东省禽致病性大肠杆菌的耐药情况，调查了养殖场的用药情况，使用药物种类多达35种，选择其中20种对分离菌株做了药敏试验。结果显示，分离菌株对磷霉素、阿米卡星、氟苯尼考等20种现用药物都存在不同程度的耐药性。     

奶牛乳房炎源大肠埃希氏菌的耐药性分析和毒力基因检测

为了解奶牛乳房炎大肠埃希氏菌耐药性、毒力基因携带及分布情况,从2019年9月至2020年6月在新疆乌鲁木齐、伊犁、昌吉地区的7个奶牛场共采集了142份乳房炎奶牛牛乳样本,采用麦康凯培养基和伊红美蓝培养基进行筛选,利用生化试验和16S rDNA PCR方法鉴定出大肠埃希氏菌,用K-B纸片扩散法对分离株进行耐药性检测,PC...     

产志贺毒素大肠杆菌的流行病学及致病因子的研究进展简

产志贺毒素大肠杆菌（Shiga toxin-producing Escherichia coli，STEC）是一类危害严重的食源性病原菌，能引起人类的严重疾病，如出血性结肠炎、溶血性尿毒症等，牛、羊等反刍动物是引起人类发病的主要宿主来源。作者总结了产志贺毒素大肠杆菌病的流行病学现状，就产志贺毒素大肠杆菌染色体和毒性质粒上的主要毒力因子的研究进展作一综述。     

1株感染多种致病性大肠杆菌噬菌体的生物学特性研究

旨在测定此前从断奶前仔猪粪样中分离得到的1株大肠杆菌噬菌体C6在致病性大肠杆菌上的生物学特性,并比较该噬菌体在不同致病菌上的感染特性.利用电镜形态观察和基因组测序确定其分类,用点滴法和双层平板法测定其在致病性大肠杆菌上的宿主谱,通过噬菌斑形态、最佳感染复数(MOI)、成斑率(EOP)、吸附率、一步生长曲线以及抑菌曲线等...     

鸭源致病性大肠杆菌O抗原与毒力基因检测及药敏试验

【目的】探究荣昌、大足和隆昌三地鸭大肠杆菌分离株的O抗原、毒力基因及耐药性。【方法】将2014年—2021年鸭病料中分离得到的107株细菌在无菌条件下接种于麦康凯培养基中划线进行培养纯化,通过16S rDNA基因扩增测序和生化试验进行细菌鉴定,采用PCR技术对O抗原和16种毒力基因进行检测,采用Kirby-Bauer纸片扩散法进行药敏试验。【结果】107株分离株鉴定为大肠杆菌;O抗原鉴定试验鉴定出9种O抗原,其中优势抗原为O78(37.00%)、O7(25.00%),O121和O145(均为15.00%),并检测到5株O78+O145和O7+O145融合株;共检测出11种毒力因子,其中强致病性毒力基因有Tsh基因(检出率为25.23%)、fyuA基因(检出率为31.78%)、estB基因(检出率为31.78%)、Vat基因(检出率为2.80%)、iucA基因(检出率为44.56%)。3种毒力基因ompA、yijP和ibeB的携带率最高,分别为100.00%、96.26%和85.98%;药敏试验结果表明分离株对氨基糖苷类药物、米诺环素和多黏菌素最为敏感,对大环内酯类药物和克林霉素耐药,分...     

蛋源大肠埃希菌的分离鉴定及毒力基因和耐药基因检测

为了调查鸡蛋中大肠埃希菌的感染情况,为生产实践提供参考,从昆明市区鸡蛋中分离出了3株大肠埃希菌,并对其毒力基因、耐药基因、动物致病性及药物敏感性进行了研究。结果表明,菌株KM1携带的毒力基因检出率75%,耐药基因检出率77.3%;菌株KM2携带的毒力基因和耐药基因检出率居中;菌株KM3毒力基因检出率91.7%,耐药性基因检出率50%。动物毒力检测结果 KM1为不致病菌株,KM2为低致病菌株,KM3为中度致病菌株。药敏试验结果显示,分离菌株对头孢噻肟、头孢曲松钠敏感,对庆大霉素、氨苄西林等具有不同程度的耐药性。中草药对3株大肠埃希菌的抑制效果各有所不同,相比之下连翘与松针的效果较好。本试验为研究昆明市区鸡蛋中大肠埃希菌污染与防控提供了理论依据。     

奶牛子宫内膜炎源性大肠埃希菌药敏试验与耐药基因检测

为探索奶牛子宫内膜炎源性大肠埃希菌耐药基因及其耐药性之间的关系。采用K-B纸片法对临床分离的54株奶牛子宫内膜炎源性大肠埃希菌进行12种抗菌药物敏感性测定,应用PCR进行这些抗菌药物相关耐药基因的检测。结果显示,54株大肠埃希菌对复方新诺明、恩诺沙星和四环素的耐药率较高,分别为67%、39%和35%。分离的54株大肠埃希菌中有41株至少含有所检测耐药基因中的1种,CyrA、CyrB、ParC和Tet耐药基因较为普遍,其耐药菌基因检出率依次为96%、83%、100%和95%,13株没有检测到相应的耐药基因。奶牛子宫内膜炎源性大肠埃希菌对常见抗菌药物耐药严重,耐药基因普遍存在于耐药菌株中,除氨基糖苷类耐药菌株,其他3种抗菌药物类型耐药表型与耐药基因检测结果有较高一致性。