牛源金黄色葡萄球菌生物被膜与毒素基因检测及agr分型

旨在对牛源金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）的生物被膜、耐药性、毒素基因和agr基因型进行研究,并分析agr基因型与毒素基因之间的相关性。分别用微量滴定板法、药敏纸片法和PCR对S.aureus的生物被膜、耐药性和毒素基因进行检测,用多重PCR对S.aureus进行agr分型。结果表明,336株牛源S.aureus均能形成生物被膜,其中,形成中等（++）和强（+++）生物被膜的S.aureus分别占52.1%和47.9%。药敏试验结果显示,S.aureus对青霉素耐药最为严重,耐药率达91.7%,其次是红霉素、卡那霉素、克林霉素和庆大霉素,耐药率分别为89.6%、72.9%、66.7%和60.4%,而所有S.aureus对呋喃妥因和利奈唑胺均表现为敏感。PCR检测结果显示,黏附素基因fnbA检出率最高,达99.7%,其次是icaD、icaA、clfA和cna,检出率分别为98.2%、89.6%、86.0%和56.0%,bap基因检出率最低,为14.6%。肠毒素基因sea的检出率为26.5%,其次是seb（8.3%）和sec（6.8%）,毒素基因tst的检出率占8.3%。分型结果显示,agr Ⅰ型S.aureus是主要的流行菌株,占77.1%,agr Ⅱ、agr Ⅲ和agr Ⅳ型S.aureus流行率分别为14.0%、4.8%和2.1%。统计分析结果表明,agr Ⅰ型S.aureus更具有携带多种毒素基因的潜力,而agr Ⅳ型S.aureus无毒素基因携带潜力。综上表明,牛乳腺炎性S.aureus对常见的抗菌药物耐药严重,毒素基因分布多样,agr Ⅰ型是奶牛乳腺炎性S.aureus主要的基因型,且具有携带多种毒素基因的能力,其潜在威胁应引起重视。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌8种毒力基因的PCR检测

为研究奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)主要毒力因子的分布情况,本试验利用PCR对70株临床型乳房炎、55株隐性乳房炎金黄色葡萄球菌的8种主要毒力基因进行检测。结果显示,nuc、ClfA、TSST-1、PVL、Hla、Hlb、FnBPA和FnBPB 8种毒力基因在临床型乳房炎SA菌株中的检出率分别为:100.0%(70株)、100.0%(70株)、0(0株)、5.7%(4株)、100.0%(70株)、11.4%(8株)、97.1%(68株)和100.0%(70株);在隐性乳房炎SA菌株中的检出率分别为:100.0%(55株)、100.0%(55株)、0(0株)、70.9%(39株)、98.2%(54株)、9.1%(5株)、100.0%(55株)和100.0%(55株)。结果表明,nuc、ClfA、Hla、Hlb和FnBPA 5种毒力基因是引起奶牛乳房炎的SA的最主要毒力基因;PVL基因可能是引起隐性乳房炎的重要致病基因。     

甘肃地区牛源金黄色葡萄球菌分子鉴定及RAPD分型

本研究目的是分离鉴定引起甘肃地区奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌,掌握其基因型情况。利用16S、23SrRNA保守序列PCR扩增对乳房炎奶样中的金黄色葡萄球菌进行鉴定,并进行RAPD基因分型。结果表明,310份奶样中共分离出金黄色葡萄球菌100株,RAPD结果显示这100株金黄色葡萄球菌均可得到清晰的RAPD指纹图谱,扩增产物在2～7条带之间,具有多种带型组成。通过聚类分析100株菌产生11个基因型,其中Ⅰ型4株,Ⅱ型4株,Ⅲ型10株,Ⅳ型13株,Ⅴ型7株,Ⅵ型24株,Ⅶ型16株,Ⅷ型6株,Ⅸ型4株,Ⅹ型10株,Ⅺ型2株。Ⅵ型为该地区的流行优势菌群,不同牛场各基因型菌株分布有明显差异。本研究说明牛场的环境与养殖条件对病原菌流行传播有明显的影响,这一结果对地区性奶牛乳房炎的防治提供了可靠的理论依据。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌耐氟喹诺酮类基因的检测

为了解宁夏地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌携带氟喹诺酮类药物的耐药基因的情况,采用PCR对临床分离鉴定的220株金黄色葡萄球菌的gyrA、norA和grlA基因进行了检测,并对PCR产物进行测序和分析。结果显示,gyrA基因、grlA基因和norA基因的检出率分别为80%、78.64%和78.18%。测序结果显示,grlA、norA基因的同源性为99%,gyrA基因的同源性为100%。这表明在宁夏地区gyrA、norA和grlA基因已广泛存在。     

Research Progress on the Staphylococcus aureus Immune Evasion in Bovine Mastitis

Staphylococcus aureus(SA)bovine mastitis is a chronic and subclinical infectious disease, which is hard to control. It brings unpredictable losses to dairy-farming industry. Immune escape effect of SA plays an important role in the occurrence and development of mastitis, and some virulence factors are mostly associated with the immune evasion of bacteria. In this paper, some important immune evasion mechanisms of SA in recent researches were reviewed in order to provide theoretical reference for further prevention and treatment of mastitis in dairy cows.     

奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌免疫逃避机制研究进展

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,SA）型奶牛乳腺炎是一种较难控制的慢性、亚临床型传染病,给奶牛养殖业带来巨大的经济损失。多种SA免疫逃避机制在乳腺炎发生、发展过程中起重要作用,且SA的免疫逃避机制多与菌体毒力因子相关。本文对近年研究的奶牛乳腺炎SA的免疫逃避机制进行了综述,以期为SA型奶牛乳腺炎的防治研究提供参考。     

牛源金黄色葡萄球菌凝固酶基因的分型

为了了解我国不同地区奶牛场金黄色葡萄球菌基因型的分布情况,采用凝固酶基因（Coa）扩增的分型方法,对在奶牛乳房炎奶样中所分离到的26株金黄色葡萄球菌进行了分型。结果显示,26株金黄色葡萄球菌共分为5个基因型,黑龙江省分离株以PCR 3型为主（10/16）。发现在同一牛群中的分离株可以存在相同的基因型,也可以存在不同的基因型;而不同牛群中的分离株也可属于同一基因型。这种结果提示,在某个或某些牛群中存在某一金黄色葡萄球菌的流行型,但也可能存在多个金黄色葡萄球菌的克隆。     

宁夏地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌耐药性分析

为了解宁夏地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的耐药情况,采用药敏纸片扩散法,测定了50株奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌对常用的17种抗茵药物的耐药性.同时采用产色头孢菌素法进行β-内酰胺酶的检测,并采用苯唑西林纸片法进行耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的检测.结果表明,所有菌株除了对利福平、万古霉素100％敏感以外,对其他15...     

牛源金黄色葡萄球菌凝固酶分型与致病因子检测

为了解青海和甘肃地区奶牛养殖场的金黄色葡萄球菌(S.aureus)基因型分布状况,本研究对来自该两个地区的210份奶样进行了S.aureus的分离与鉴定,利用凝固酶基因(Coa)扩增和限制性内切酶AluⅠ酶切方法对所有分离株进行了凝固酶多态性分型。并对不同凝固酶基因型的S.aureus进行了白细胞毒素F (LukF)、白细胞毒素S (LukS)、α溶血素(α-hemolysin)、β溶血素(β-hemolysin)等主要致病因子检测。结果显示,共分离鉴定出35株S.aureus (青海13株,甘肃22株),所有分离株均能够扩增出Coa基因片段,并有5种PCR分型结果(本文简称PCR1～PCR5型),其中PCR 1、4和5型只有1种亚型,而PCR 2型有3种亚型,PCR 3型有2种亚型。PCR3型是青海(6/13)和甘肃地区(8/22)主要流行的基因型。致病因子检测结果显示,所有分离株均携带致病因子LukS和α溶血素;致病因子LukF和β溶血素检出率也很高,分别是30株(85.7%)和31株(88.6%)。β溶血素基因在甘肃地区检出率为95.5%(21/22),青海地区检出率为76.9%(10/13),致病因子LukF在甘肃地区检出率为91.0%(20/22),青海地区检出率为76.9%(10/13),且在各基因型中均有分布,甘肃地区S.aureus致病因子LukF和β溶血素检出率高于青海地区。本研究首次对青海和甘肃地区致奶牛乳房炎S.aureus进行了鉴定分析,为这两个地区奶牛乳房炎的防治提供了参考依据。     

乳房炎奶牛金黄色葡萄球菌毒素基因的检测及PFGE分型研究

作者针对临床及亚临床乳房炎奶牛乳汁中金黄色葡萄球菌分离株的毒素基因进行检测和脉冲场凝胶电泳(PFGE)基因分型,比较2种类型乳房炎金黄色葡萄球菌分离株的差异.无菌法采集奶样,采用国际标准方法从中分离金黄色葡萄球菌,用多重PCR方法扩增nuc基因和mecA基因以确证金黄色葡萄球菌(SA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA).进一步用PCR方法检测SA的各种毒素基因(SEs、ETs、TSST 1和PVL基因等).利用限制性内切酶Sma Ⅰ对SA基因组DNA进行酶切和PFGE分析,最后利用BioNumerics软件进行聚类分析.结果:19.3％(23/119)的临床乳房炎奶样和14.8％(26/176)的亚临床乳房炎奶样确定为金黄色葡萄球菌阳性样品,分别从中分离鉴定出43株和26株金黄色葡萄球菌,其中临床乳房炎分离株中有5株为mecA基因阳性.临床乳房炎奶牛奶样中检测到SA的SEA、SEB、SED、SEJ和PVL毒素基因,检出率分别为3.8％(1株)、11.5％(3株)、19.2％(5株)、7.7％(2株)和31.2％(10株);亚临床乳房炎奶牛乳样中仅检测到SA的SEA和PVL毒力基因,检出率分别为7.0％(3株)和84.1％(37株).表明临床与亚临床乳房炎奶牛乳汁中SA菌株携带的毒素基因不一样,SEs可能是临床乳房炎菌株的重要致病基因,PVL可能是亚临床乳房炎菌株的重要致病基因.69株SA使用Sma Ⅰ酶切分型后,可分为7个大簇、50个基因型,来源相同的SA分型后大部分位于同一簇内.临床乳房炎奶牛乳汁中检测到MRSA菌株,PVL基因在亚临床乳房炎中的检出率为临床乳房炎的2.7倍.PFGE方法能较好的区分临床乳房炎和亚临床乳房炎的SA分离菌株.     

奶牛乳房炎病例中金黄色葡萄球菌RAPD-PCR基因分型的研究

用随机扩增多态性DNA 技术（RAPD）对来自2个集约化奶牛场不同奶牛乳房炎病例分出的16株金黄色葡萄球菌进行了基因分型。分别用3个寡核苷酸引物扩增，仅OLP11引物可扩增出质量良好、具有RAPD特征的条带图谱。对反应体系的退火温度、模板浓度进行了筛选，模板原倍浓度、33℃的退火温度能使所有检测菌株产生清晰、可分辨、具有较好重复性的带谱。分型结果表明，16株菌可分为2个类群，其中14株位于同一类群，大多数菌株的相关系数差距仅为0.04，这一结果提示这些菌株可能具有相同的来源和相似的遗传背景。     

MLVA方法对奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的分型研究及效果评价

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的分型对预防菌株在牛体之间传播、了解菌株地域性分布特点及针对性疫苗的研制均有重要的意义。本研究旨在将多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)法应用于国内乳房炎金葡菌的分型研究,以进行分子流行病学调查。同时,将其与16-23SrRNA基因间区分析法(RS-PCR)的分型结果比较,以评价MLVA法对乳房炎金葡菌的分型效果。作者建立MLVA方法(多重PCR体系)对27株乳房炎金葡菌进行分型,同时应用RS-PCR法进行分型。结果2种方法均可将8个地区17个牛场分离到的27株菌全部分型,分型率为100%。MLVA法将菌株分为19个型,不同牛场来源的金葡菌均属于不同型,相同牛场来源的菌株除上海和北京某牛场外均属于相同型;此方法的分型力为0.969。RS-PCR法将菌株分为10个型,其中Ⅰ、Ⅱ和Ⅴ型菌株均来源于不同地区,分型力为0.829。结果显示,MLVA分型法具有快速、操作方便和分型能力强等特点,可应用于乳房炎金葡菌的分子流行病学研究。同时,研究表明,我国不同牛场的乳房炎金葡菌具有型特异性,该结果与少数优势型金黄色葡萄球菌引起绝大多数乳房炎的报道相反。     

奶牛乳房炎病原菌金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

为研究江苏某奶牛场金黄色葡萄球菌的耐药特点,本试验通过MALDIBiotyper系统对8株金黄色葡萄球菌疑似株进行鉴定和耐药性试验。结果显示,8株金黄色葡萄球菌疑似株均为金黄色葡萄球菌,其对青霉素、链霉素、环丙沙星的耐药率均为100%;其次,对阿莫西林的耐药率为75%;极少数对头孢氨苄、庆大霉素、丁胺卡那、卡那霉素耐药;而对四环素、多西环素、克林霉素均敏感。结果表明,该奶牛场金黄色葡萄球菌的分离率为14.55%(8/55),且均呈现多重耐药。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌疫苗研究进展

奶牛乳房炎是影响乳品工业经济效益的重要疾病之一,引起奶牛乳房炎的致病菌约有150多种,但金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳房炎的主要病原。由它引起的乳房炎很难治愈,而且对抗生素产生耐药性的菌株已经相当普遍,因此使用预防或治疗性疫苗防治乳房炎就成为首选。然而金黄色葡萄球菌的致病力由许多不同的因子(如黏附素、荚膜等)决定,这使得制备非常有效的疫苗变得很困难。本文就这些致病因子在疫苗研制方面的进展做一简要介绍。     

金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎多价疫苗的研制和免疫效果评价

为研制用于预防金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎的免疫疫苗,使用4株血清型为外膜多糖336型(336PS)、荚膜多糖5型(CP5)和荚膜多糖8型(CP8)强毒力金黄色葡萄球菌试制出金黄色葡萄球菌多价疫苗,并通过抗体水平监测、攻毒保护试验以及两个牧场的田间试验对免疫效果进行了评价。抗体水平监测显示,首免后30 d即可产生较高的抗体水平,二次免疫后有效抗体水平可持续到产后210 d;人工攻毒保护试验显示,疫苗对金黄色葡萄球菌引起的临床型乳房炎的保护率为89%;田间试验结果表明,该疫苗对奶牛临床型乳房炎的保护率在75.2%～83.3%之间,对隐性乳房炎的保护率在49.9%～52.2%之间,免疫组日产奶量较对照组平均提高1.26 kg以上。上述结果表明,所试制的疫苗可以显著降低泌乳牛金黄色葡萄球菌引起的临床型和隐性乳房炎发病率并提高产奶量。     

我国部分地区奶牛乳房炎病例中金黄色葡萄球菌血清型及毒力调查

为了解我国奶牛乳房炎病例中金黄色葡萄球菌(S.aureus)流行血清型和不同血清型菌株的毒力情况,本研究采用玻板凝集和双重PCR方法分别对北京、山西、内蒙古、山东、浙江和新疆奶牛乳房炎乳样中分离的191株S.aureus进行血清分型并从各血清型中随机选取100株菌以小白鼠进行毒力测定.结果表明:这些地区牛源S.aureus中,336PS型为流行血清型,占60.2％(115/191),CP8型占19.4％(37/191),CP5型占11.5％(22/191),未分型菌株占8.9％(17/191).毒力测定显示:336PS、CP8和CP5型菌株中强毒力菌株分别占65.1％、62.9％及61.9％,未分型菌株中强毒力菌株为22.2％.该调查为我国奶牛乳房炎S.aureus疫苗菌株的筛选提供了依据.     

SarA调控金黄色葡萄球菌生物被膜形成的研究进展

金黄色葡萄球菌生物被膜的形成是一个多基因和多因子共同调控的过程。葡萄球菌属辅助调节子SarA是金黄色葡萄球菌主要的毒力基因表达调控系统,能直接或间接调控多种生物被膜形成相关基因的表达。本文将对SarA的结构及其调控生物被膜形成的机制作一综述,为深入研究金黄色葡萄球菌的致病机理和开发新的抗生物膜感染策略提供参考。     

奶牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌噬菌体P82的分离及特性研究

【目的】 为开发噬菌体"鸡尾酒"制剂防治奶牛乳腺炎提供生物学材料。【方法】 以实验室分离的奶牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌82为宿主菌,通过点滴法和双层平板法在奶牛场的污水、弃奶和粪便混合物中分离并纯化其噬菌体,通过噬菌斑及透射电子显微镜对该株噬菌体的形态特征进行观察。利用核酸酶处理分析该噬菌体核酸类型,并对其裂解谱、最佳感染复数、一步生长曲线、热稳定性、pH稳定性进行研究。【结果】 分离筛选出金黄色葡萄球菌82的裂解性噬菌体P82,电镜下观察其头部为二十面体,大小约为120 nm×83 nm,有一条带可伸缩尾鞘的长尾,长约126 nm,属于有尾噬菌体目,肌尾噬菌体科。通过琼脂糖凝胶电泳鉴定其核酸类型为双链DNA （dsDNA）。噬菌体P82的最佳感染复数为0.001,对奶牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌裂解率为36.51%（23/63）,宿主谱较广;其生长潜伏期约为25 min,爆发期约为45 min,裂解量约为74 PFU/cell;在pH 4.0~12.0时活性稳定,在pH 2.0和13.0时则完全失去活性。噬菌体P82热稳定性较高,在70 ℃作用60 min后仍有裂解能力,在80 ℃作用40 min时则失去裂解能力。【结论】 本研究分离的噬菌体P82效价较高、裂解能力强、增殖速度快、噬菌谱广,对不同温度和pH均有较好的耐受度,能作为专一性裂解奶牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌的噬菌体候选株,可与其他噬菌体混合制成噬菌体"鸡尾酒"制剂用于防治奶牛乳腺炎,为奶牛乳腺炎的噬菌体疗法提供材料。     

上海地区奶牛的乳房炎金黄色葡萄球菌耐药性

为调查上海地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的耐药性,采集上海地区乳房炎患病乳样60 份,进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药敏实验。结果表明：经分离鉴定,共检出8 株金黄色葡萄球菌,分离率为13.33%;药敏实验结果表明,分离得到的金黄色葡萄球菌对青霉素G和氨苄西林的耐药率最高,均为100.00%,对磺胺甲恶唑的耐药率次之,为50.00%,对头孢克洛、头孢唑肟、洛美沙星、诺氟沙星、四环素、庆大霉素、红霉素、克林霉素和氯霉素的耐药率均为37.50%,对环丙沙星和氧氟沙星的耐药率均为25.00%,对头孢噻肟、头孢他啶     

奶牛金黄色葡萄球菌性乳房炎研究进展

奶牛乳房炎是对世界奶牛业造成经济损失最大的疾病之一,它不仅直接导致乳品工业的经济损失,而且由于患乳房炎的奶牛其乳汁中经常含有大量的毒素、病原微生物以及治疗后残留的抗生素,使得该病日益引起公众的关注。金黄色葡萄球菌是奶牛乳房炎的主要病原,由于其极易产生耐药性,使得治疗变得相当困难,因此使用预防或治疗性疫苗防治乳房炎就成为首选。金黄色葡萄球菌对上皮细胞的黏附和侵袭力被认为是奶牛金黄色葡萄球菌性乳房炎的主要致病机制,金黄色葡萄球菌的致病力涉及到许多不同的毒力因子,如黏附素、荚膜、各种毒素和酶类等。研究表明,以这些毒力因子为靶位进行疫苗研究,可能是预防奶牛金黄色葡萄球菌性乳房炎的有效途径。