AMPK激活剂在绵羊精液冷冻保存中的作用研究

旨在研究AMPK激活剂二甲双胍（metformin,Met）和阿卡地新（acadesine,AICAR）对绵羊精液冷冻保存效果的影响。本研究首先在冷冻基础稀释液中分别添加不同浓度（0、100、200、300、400、500 μmol·L^-1）的Met和AICAR,冷冻解冻后根据精子活力、运动性能和结构完整性指标筛选出最佳的添加浓度（400 μmol·L^-1 Met、200 μmol·L^-1 AICAR）;然后分别使用不同的冷冻稀释液（对照组：稀释液;Met组：含400 μmol·L^-1 Met的稀释液;AICAR组：含200 μmol·L^-1 AICAR的稀释液）冷冻精液,解冻后检测精子中AMPK蛋白表达、顶体酶活性、代谢指标、线粒体功能以及抗氧化酶活性。结果表明,稀释液中添加400 μmol·L^-1 Met和200 μmol·L^-1AICAR均可显著提高解冻后精子活力、运动性能及精子结构完整性（P<0.05）,其中400 μmol·L^-1 Met组精子总活力达43.20%,顶体完整率为91%,质膜完整率为46%。与对照组相比,Met组和AICAR组解冻后精子中AMPK磷酸化水平显著升高（P<0.05）;顶体酶活性显著提高（P<0.05）;丙酮酸水平显著下降（P<0.05）,乳酸脱氢酶活性、乳酸以及ATP含量均显著升高（P<0.05）;与对照组相比,Met和AICAR组稀释液更有利于维持线粒体膜电位（P<0.05）,提高ATP酶（P<0.05）以及抗氧化酶的活性（P<0.05）。添加适当浓度的AMPK激活剂可以提高绵羊精液冷冻保存的效果。     

绵羊精液冷冻保存研究进展

绵羊精液保存技术目前虽然已进入生产应用阶段,但冷冻精液人工授精受胎率低仍是限制绵羊冷冻精液进行生产推广的重要因素。目前,对于绵羊精液冷冻的研究主要集中在冷冻稀释液组分和冷冻程序等方面。文章针对国内外有关绵羊精液冷冻保存稀释液、冷冻程序、解冻方法和冷冻损伤等研究进展作一综述,旨在对今后精液冷冻保存研究提供一定的参考。     

绵羊冷冻精液研究进展

随着肉羊产业化、工厂化的发展,冷冻精液人工授精技术亟待应用于生产中.绵羊精液冷冻保存技术虽然得到了快速发展,但目前仍处在试验研究或小范围的应用阶段.因此,绵羊精液冷冻技术还需要深入、系统的研究.文章从绵羊精液冷冻保存稀释液中的添加剂、冷冻速率、冷冻-解冻对绵羊冷冻精液品质的影响,精液输精对受胎率的影响等方面进行了综述,为精液冷冻保存研究提供一定参考.     

小尾寒羊精液保存技术研究

为了充分发挥种公羊的生产潜力,快速扩繁优良群体,本实验以取材方便的小尾寒羊为实验动物,对其精液采用室温、低温和细管法冷冻3种保存方法进行了研究。结果表明:在低温(4±0.5)℃条件下稀释保存小尾寒羊精子,显著优于室温(23±2)℃条件下的保存效果。其中采用II液低温保存绵羊精子的时间和活率(168 h,0.35)显著优于III液(72 h,0.30)I、V液(48 h,0.35)和I液(18 h,0.42)。而采用III液冷冻保存绵羊精液,其解冻后活率(0.532±0.004)极显著高于IV液(0.470±0.003)I、液(0.445±0.004)和II液(0.432±0.012)3种冷冻稀释液(P<0.01)。4种冷冻稀释液冷冻解冻后的精子,均能在室温下6 h内保持0.35以上的活率。     

猪精液细管法冷冻保存技术的研究

为研制更为简易、高效的冷冻稀释液配方及冷冻程序,充分发挥优良种公猪的生产潜力,本实验采用细管法对种公猪精液冷冻保存技术进行了研究,比较了4种基础液配方稀释液冷冻效果,基础液I:葡萄糖、蔗糖、柠檬酸钠;基础液II:葡萄糖、蔗糖;基础液III:葡萄糖、乳糖、柠檬酸钠;基础液IV:葡萄糖、乳糖。结果表明:采用一步法稀释和IV液冷冻保存猪精液,其解冻后精子活率(0.501)极显著(P<0.01)高于I液(0.359)和III液(0.359),显著(P<0.05)高于II液(0.476),II液显著(P<0.05)高于I液和III液;解冻后IV液的精子顶体完整率(26.9%)显著(P<0.05)高于I液(22.4%)、II液(24.2%)和III液(22.5%),IV液冷冻解冻后精液的精子活率,在室温(23±2)℃下4h内能够保持0.30以上。     

聚乙烯吡咯烷酮对公猪精液冷冻的影响

试验旨在评价聚乙烯吡咯烷酮（polyvinylpyrrolidone,PVP）对公猪精液冷冻的影响。试验分为5组,分别为对照组（不添加PVP）和PVP处理组（在冷冻基础液中分别加入0.25%、0.50%、1.00%、2.00% PVP）。采用手握法采集松辽黑猪精液,用5种冷冻基础液稀释,在25 ℃平衡1 h,17 ℃平衡2 h,4 ℃平衡3 h后灌装于0.5 mL细管中,在液氮上方3 cm处熏蒸10 min,保存在液氮罐中30 d后进行检测。样本解冻后分别检测精子活力、质膜完整性、顶体完整性、线粒体活性、DNA完整性、过氧化氢酶（catalase,CAT）活性、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathioneperoxidase,GSH-Px）活性、活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）水平及丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平。结果显示,与对照组相比,冷冻基础液中添加0.50% PVP显著提高冻融后精子的活力、质膜完整性、顶体完整性、线粒体活性、CAT活性、SOD活性、GSH-Px活性（P<0.05）,显著降低精子ROS和MDA水平（P<0.05）;与对照组相比,添加PVP有利于提高DNA完整性,但差异不显著（P>0.05）。因此,猪精液冷冻基础液中添加PVP可改善冻融后精子质量,添加0.50%效果最佳。     

驴精液冷冻保存技术研究进展

驴的精液冷冻保存技术是在马的基础上逐渐发展起来的,特别在近十年来,有关研究明显增多,在诸多方面取得了积极的成果。文章主要以驴精液冷冻保存技术环节的发展为侧重点,就其研究成果进行了总结。     

海藻糖对猪精液冷冻保存效果的影响

在传统的Tris-柠檬酸-葡萄糖稀释液基础上，分别添加25％、50％、75％、100％的海藻糖，研究不同浓度海藻糖对猪精液冷冻后精子质量的影响。结果表明，海藻糖相对于对照TCG稀释液能够显著改善和提高猪精液的冷冻效果，其最佳添加浓度为25％，冷冻-解冻后猪精子活力、活率、线粒体活性、质膜完整性以及顶体完整率均显著提高（P〈0．05），分别达到41．38％、46．34％、44．56％、43．51％和64．09％。海藻糖可以明显抑制精子获能，获能处理前精子获能率仅为3．68％，而获能处理后达到41．82％，有利于促进精子获能。精液稀释液中甘油的适宜添加浓度为2％，海藻糖只有与甘油共同作用，才能在冷冻-解冻过程更加有效地保护精子。猪精子活力、活率、线粒体活性、质膜完整率、顶体完整率等之间存在极显著的正相关关系（P〈0．01），而与获能处理前精子的获能率存在显著的负相关关系（P〈0．05）。     

近交五指山小型猪精液冷冻保存技术的研究

用液氮熏蒸法在氟板上制作冻精颗粒,以解冻后的精子活率、活力和质膜完整性为判定指标,比较4种冷冻稀释液及不同冷冻-解冻程序对五指山小型猪精液冷冻的效果。结果表明:①Ⅳ号冷冻稀释液冷冻解冻后精子的活率(0.610±0.036)、活力(0.427±0.025)和质膜完整性(0.503±0.015)均显著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ号冷冻稀释液(P<0.05)。②实验中精液在4℃冰箱中平衡降温2 h的精液精子活力、质膜完整性均好于在17℃平衡3 h再放入4℃冰箱中平衡2 h的解冻效果,而且精子活率差异显著(P<0.05)。③湿解法的效果优于干解法。     

兔精液冷冻保存的研究

本试验采用不同的稀释液对兔精液进行冷冻保存,并比较了在稀释液中添加不同防冻剂以及平衡时间对兔精液冷冻保存效果的影响.结果表明:稀释液Ⅱ稀释的精液,解冻后,精子活率明显高于稀释液Ⅰ稀释的(P＜0.01),其复苏率显著高于后者(P＜0.05).以稀释液Ⅱ为基础液,添加不同浓度(27.3%,15%,12%,9%)的DMSO对兔精液冷冻保存,结果解冻后精子活率以15%及12%两组较好,其中添加15%的优于12%的,但差异不显著(P＞0.05).选择不同种类的防冻剂(7%甘油与15%DMSO)比较时,发现7%甘油组解冻后精子活率明显低于15%DMSO组,二者差异极显著(P＜0.01),其复苏率显著低于后者(P＜0.05).以15%DMSO作为防冻剂,采用不同的平衡时间在5 ℃平衡,结果发现平衡30 min和60 min的解冻后精子活率较好,但差异不显著(P＞0.05),而90 min和120 min的冷冻效果较差.     

甘肃高山细毛羊细管鲜精低温保存效果研究

为了研究甘肃高山细毛羊种公羊细管精液低温保存的效果.用葡萄糖、柠檬酸钠、鲜奶和卵黄为主要成分配制了3种稀释液,10倍稀释精液,并在4℃保存,分别在12h,24 h,36h,48 h,60h和72 h观测精子活力和人工授精受胎率.结果显示,配方Ⅲ稀释精液后,细管封装,4℃保存,72 h后精子活力可达0.49,与配方Ⅰ和Ⅱ差异显著,而且配方Ⅲ稀释精液后,在远距离输精后受胎率可达78.3％.以柠檬酸钠和葡萄糖为基础,添加卵黄和TCM199,在4℃下,能有效保护甘肃高山细毛羊精液,延长精子寿命,且在3d内可以满足远距离人工授精要求,有效利用种公羊价值.     

番茄红素对秦川牛精液冷冻保存及鲜精品质影响

旨在探究番茄红素对秦川牛精液冷冻保存和新鲜精液品质的影响,为番茄红素作为新型精液稀释液添加剂和种公畜日粮添加剂提供依据。本研究采集3头年龄3~5岁健康状况良好秦川种公牛的新鲜精液混合,用0、1、2、3、4 μmol·L^-1浓度的番茄红素稀释液冷冻保存;利用计算机辅助分析仪、低渗肿胀检测法、花生凝集素荧光标记检测法、罗丹明荧光检测法等检测精子的运动性能、顶体完整率、质膜完整性、线粒体活性和抗氧化性能;在秦川种公牛日粮中添加15 mg·kg^-1 BW番茄红素,检测饲喂前后秦川种公牛的新鲜精液品质和血清抗氧化指标。结果表明,在秦川牛精液冷冻保存过程中添加番茄红素可以显著提高冷冻-解冻后精子的活力、顶体完整率、质膜完整性和线粒体活性以及抗氧化酶CAT和GSH-Px酶活性,显著降低精子中MDA含量,且番茄红素的最适添加浓度为2 μmol·L^-1(P<0.05);饲喂15 mg·kg^-1 BW番茄红素后,与饲喂之前相比,秦川种公牛的精子活力显著提高(P<0.05),精子畸形率显著降低(P<0.05),血清中抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px酶活性显著增加(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05)。综上所述,一定浓度的番茄红素对精子在冷冻过程中造成的精子损伤和秦川牛机体应激造成的繁殖性能降低具有良好的保护作用,这可能与番茄红素通过抗氧化作用减少精子在冷冻-解冻过程中的氧化损伤和提高动物机体的抗氧化能力有关。     

The Effects of Resveratrol on the Quality of Frozen Sheep Semen

The effects of resveratrol on the quality of frozen-thawed sheep semen were studied in this study.Semen was collected from six Yunnan semi-fine wool sheep using artificial vagina.The semen was diluted with the Optidyl extender supplemented with resveratrol with a concentration of 0,0.1,1,10,or 20 μmol/L,followed by loading into plastic straws and equilibration at a low temperature.Then,the straws were pre-frozen in liquid nitrogen vapor,followed by storage in liquid nitrogen for 30 days.After thawing for 30 seconds in a 37 ℃ water bath,the parameters including sperm motility,acrosome integrity,membrane integrity,distribution of phosphatidylserine (PS) and ROS were measured.The results showed that the post-thaw sperm total motility,progressive motility and the rate of sperm with curved tail were 76.14%±0.97%,43.56%±0.91% and 43.24%±1.68% in the 10 μmol/L resveratrol group,respectively,which were significantly higher than those in the other groups (P<0.05).However,when the concentration of resveratrol in the freezing extender was 20 μmol/L,the post-thaw total motility,progressive motility and the rate of sperm with curved tail were 21.78%±0.79%,25.23%±1.34% and 4.84%±0.68%,respectively,which were significantly lower than those in the other groups (P<0.05).The acrosome integrity of sperm frozen in the 10 μmol/L resveratrol group was best,which was 50.47%±0.91% and significantly higher than the other treatments (P<0.05).The results of PS distribution showed that the percentage of viable sperm in the 10 μmol/L resveratrol group was 46.43%±2.95%,and significantly higher than that in the 20 μmol/L group (31.14%±3.56%,P<0.05),but there was no significant difference with the other groups (P>0.05).In addition,the PS labeling rate of sperm in the 20 μmol/L resveratrol group (39.82%±3.38%) was significantly higher than those of the other groups (P<0.05).In terms of ROS production,this study demonstrated that the rate of viable sperm (ROS and PI were negative) in the 10 μmol/L resveratrol group (63.57%±0.71%) was significantly higher than that of the other groups (P<0.05),while the rate of viable sperm (32.45%±1.42%) in the 20 μmol/L resveratrol group was significantly lower than those of the other groups (P<0.05).In conclusion,the post-thaw quality of sheep semen could be improved after the addition of resveratrol to the freezing extenders,which might be related to the antioxidant properties of resveratrol.But,the cryoprotective effects of resveratrol dependents on its used doses,and the optimal concentration was 10 μmol/L based on this present study.However,excessively high concentration of resveratrol could aggravate cryodamage on sperm.In addition,the protective effects of resveratrol on sheep sperm still needs to be verified by in vitro fertilization and artificial insemination.     

白藜芦醇对绵羊冷冻精液质量的影响

试验旨在研究白藜芦醇对绵羊冷冻精液质量的改善效果。采用假阴道法采集6只云南半细毛羊精液,用含不同浓度（0、0.1、1、10、20 μmol/L）白藜芦醇的Optidyl稀释液稀释后进行细管分装,低温平衡和液氮气相预冻后,在液氮中保存30 d。解冻后测定精子活力、质膜完整性、磷脂酰丝氨酸（PS）分布、顶体完整性和活性氧等指标。结果表明,解冻后10 μmol/L白藜芦醇组精子总活力、直线运动百分率、精子弯尾率分别为76.14%±0.97%、43.56%±0.91%、43.24%±1.68%,均显著高于其他各组（P<0.05）;而20 μmol/L白藜芦醇组精子总活力、直线运动百分率、精子弯尾率分别为21.78%±0.79%、25.23%±1.34%、4.84%±0.68%,均显著低于其他各组（P<0.05）。10 μmol/L白藜芦醇组精子顶体完整性最高,为50.47%±0.91%,显著高于其他各处理组（P<0.05）。PS分布结果表明,10 μmol/L白藜芦醇组正常精子百分率为46.43%±2.95%,显著高于20 μmol/L组（31.14%±3.56%,P<0.05）,与其他各组无显著性差异（P>0.05）。20 μmol/L白藜芦醇组PS标记率（39.82%±3.38%）显著高于其他处理组（P<0.05）。活性氧试验结果表明,10 μmol/L白藜芦醇组正常精子（63.57%±0.71%）显著高于其他各组（P<0.05）;而20 μmol/L白藜芦醇组正常精子（32.45%±1.42%）显著低于其他各组（P<0.05）。综上,在冷冻稀释液中添加白藜芦醇可以改善绵羊冷冻精液品质,这与白藜芦醇的抗氧化特性有关。但是,白藜芦醇的冷冻保护效果具有明显的浓度依赖性,其最佳作用浓度为10 μmol/L,过高浓度的白藜芦醇反而加重精子的冷冻损伤。此外,对于白藜芦醇对绵羊精子的抗冻保护效果仍然需要体外受精或人工授精验证。     

二甲基甲酰胺对猪精液冷冻保存效果的影响

用二甲基甲酰胺(DMF)完全替代甘油,比较不同平衡时间和不同DMF添加量对猪精液冷冻保护效果的影响。结果表明,DMF能完全替代甘油,获得较好的冷冻保护效果。最佳平衡时间为90 min,解冻后精子活力为(44.57±0.72)%,显著高于对照组和其他组(P0.05)。当DMF添加量为5%时,冻后精子活力、活率、线粒体活性、顶体完整率和质膜完整率分别为(49.91±0.39)%(、46.51±0.26)%、(47.51±0.52)%(、49.84±0.56)%、(46.30±1.61)%,均显著高于2%、3%、6%DMF添加组(P0.05),但与4%DMF添加组相比,冻后精子活力、活率和质膜完整率差异不显著(P0.05)。本试验结果表明,DMF最适添加量为5%。     

巴马香猪精液冷冻保存研究

利用甘油和二甲基亚砜（DMSO）作为冷冻保护剂,以精子存活率为评价指标,研究了冷冻保护剂对香猪精液冷冻保存效果的影响。试验分工、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4个试验组和1个对照组。以解冻后的精子活力、活率为判断标准,比较了4种冷冻保护液对香猪精液冷冻保存的影响。结果表明,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ组精子活率显著高于Ⅲ组（含5％甘油）（P〈0．05）;试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ组之间差异不显著（P〉0．05）;Ⅰ组精子活率最高,达到53．10％。     

国外犬精液冷冻技术的研究进展

从犬的冷冻精液成功受孕产仔以来,犬精液冷冻研究已成为犬繁殖技术的一部分,国外已经详细建立了采精、稀释、冷冻、解冻及精液品质评价的有关参数,并运用于实际生产中,最高受胎率可达90%。相比之下,国内在这方面的研究还不够深入。本文就国外的犬精液冷冻研究进行详细综述,以给我国养犬业的发展提供借鉴。     

大豆卵磷脂对马精液冷冻保存的效果研究

为探索适宜浓度的大豆卵磷脂(soybean lecithin,SL)代替卵黄(egg yolk,EY)对马精液冷冻保存的效果,本试验分别以5%卵黄(V/V)和10%、20%、30%大豆卵磷脂(m/V)作为精液的冷冻保护剂冷冻解冻马精液,解冻后分别对精子细胞的运动参数、精子细胞膜的完整性、精子细胞脂质氧化物丙二醛的值和线粒体膜完整性进行检测。结果发现,精液冷冻解冻后,5%卵黄和10%、20%、30%大豆卵磷脂对精子的总运动精子数无显著影响(P>0.05),但30%大豆卵磷脂具有最大的原地摆动精子数和最小的直线前进精子数(P<0.05),其他运动参数差异不显著(P>0.05);20%大豆卵磷脂代替卵黄后具有最高的质膜完整性,同时产生最少的脂质氧化物丙二醛;线粒体膜电位经流式细胞仪检测时,30%大豆卵磷脂活精子高膜电位数最高,但与20%大豆卵磷脂之间差异不显著(P>0.05)。试验结果表明,20%大豆卵磷脂能够代替卵黄作为冷冻保护剂用于马精液的冷冻保存。     

马精液冷冻保存技术研究进展

马精液冷冻保存是一种将种公马精液加入抗冻保护剂,再进行一系列处理,最后保存在超低温中(液氮、干冰)的技术。近年来该技术随着马冷冻精液在许多国家马匹繁殖育种中逐渐应用而得到了较好的发展。作者综述了马精液冷冻保存技术的精液稀释、离心、再稀释、降温平衡、分装剂型、降温冷冻、液氮保存的研究进展,旨在对马精液冷冻保存技术的进一步研究提供一定的参考,以期推动中国现代马业的健康可持续发展。     

稀释液中添加半胱氨酸对绵羊冷冻精液品质的影响

在绵羊冷冻精液稀释液中添加0mmol／L、2．5mmol／L、5．0mmol／L、7．5mmol／L4个不同梯度的半胱氨酸,通过测定解冻后的精子活率、畸形率、顶体完整率、质膜完整率以及各项酶（SOD、GSH、GSH-PX、CAT和MDA）的活性来确定最适添加量。结果表明,添加5．0mmol／L的半胱氨酸组的精子活率和顶体完整率均极显著高于对照组和其他组（尸〈0．01）,而畸形率显著低于对照组和其他试验组（P〈0．05）;各项酶指标中,5．0mmol／L半胱氨酸组SOD和GSH浓度与其余各组间差异不显著（P〉0．05）,MDA浓度极显著低于对照组和7．5mmol／L试验组（P〈0．01）,CAT和GSH-PX活性极显著或显著高于对照组和其他试验组（P〈0．01,P〈0．05）。说明冷冻稀释液中添加5．0mmol／L的半胱氨酸可有效保护精子免受过氧化物的损害。