甘蔗基因组RNA提取方法的研究

为探讨一种简单有效提取甘蔗基因组RNA的方法,分别用改良盐酸胍法、CTAB法和试剂盒法提取甘蔗叶片基因组RNA,并对提取效果进行检测。结果表明：改良盐酸胍法对甘蔗基因组RNA的提取有较好的效果,适合进行甘蔗各分子生物学研究。     

甘蔗野 生种和栽培品种原生质体分离研究

采用不同浓度酶液,２７℃分离甘蔗原生质体。经１６小时分离结果表明：处理Ⅱ对甘蔗野生种：大径野生种和割手密的幼叶分离效果最好,而处理Ⅲ最差;处理Ⅰ对栽培品种参试品种“闽糖７０－６１１”和“新台糖２２”的幼叶分离效果最好,而处理Ⅲ最差。不同分离时间,处理Ⅱ分离结果表明：１６小时对野生种“大野”和“割手密”的幼叶分离效果最好,１０小时最差;１４小时对栽培品种参试品种“闽糖７０－６１１”和“新台糖２２”分     

玉米成熟子粒RNA提取方法的改良与优化

玉米成熟子粒含有较多的多糖、蛋白质和脂类,传统的RNA提取方法难以提取到高质量的RNA。以授粉后28 d灌浆后期的玉米子粒为试材,以授粉后7 d的玉米子粒为对照,对目前国内外常用的Trizol法、Biozol法、RNAiso Plus法、三种硅胶柱商业试剂盒总RNA提取方法以及本研究建立的改良提取方法进行比较。结果表明,以授粉后7 d的玉米子粒为材料时,各种方法都能获得较好提取效果;以灌浆后期接近成熟玉米子粒为试材时,采用本研究改良或新建立的提取法,可以大幅降低提取成本,快速提取高质量和高得率的RNA。     

甘蔗基因组DNA提取方法的比较

采用2×CTAB法和两种改进的SDS法分别从甘蔗不同的器官中提取DNA。通过对所提取的DNA浓度和纯度进行方差分析,并将所提取的DNA进行基因克隆和多态性扩增(RAPD),得到了较清晰的扩增图谱,克隆出目的基因片段,证明改进的SDSⅡ法是一种高质量去除多糖、色素和蛋白质等杂质的有效方法,所提取的DNA适合于甘蔗各分子生物学研究。     

香蕉果实RNA提取方法的改进和比较

通过对几种不同的香蕉果实RNA提取方法的改进和比较,发现CTAB法是最有效、最简单和最经济的方法之一.该方法提取出来的RNA可以用来做cDNA合成和建立文库等分子生物学操作.     

橡胶树胶乳RNA简易提取和保存方法的比较探索

针对巴西橡胶树胶乳RNA的提取方法存在操作复杂、步骤多、时间长、保存条件要求苛刻等问题以及橡胶树胶乳远距离、长时间采样的诸多不便等问题,介绍一种具有操作简单、实验时间短、步骤少等优点的简易巴西橡胶树胶乳RNA提取方法和一种适于长时间保存胶乳的方法。该方法仅仅以DEPC水为提取液,提取的RNA浓度可以达到为0.722 μg/mL,纯度OD260/OD280在2.0～2.2之间,总RNA提取量为36.1 μg/mL,可以满足后续分子生物学实验RT-PCR和RACE的要求;对在冰上保存1～10 d的胶乳提取RNA,浓度在0.502～0.722 μg/mL之间,OD260/OD280在1.8～2.4之间,总RNA的提取量在20.8～35.44 μg/mL之间。     

甜玉米籽粒总RNA提取方法的比较

[目的]探索获得高质量、高纯度的甜玉米籽粒总RNA的提取方法.[方法]以授粉后20 d的超甜玉米系SY01籽粒为试验材料,比较了RNAiso法、Trizol法、CTAB法3种方法对甜玉米籽粒总RNA的提取效果,用琼脂糖凝聚电泳、Nanodrop2000、Agilent 2100 Bioanalyzer检测了提取的RNA...     

从茶树鲜叶中提取RNA的方法

本文是在前人提取RNA的方法上略加改进，从而设计出一种高效的从茶树鲜叶中提取RNA的方法该方法同时也适用于其它高等植物，具有操作简便，耗资少等优点，特别适用于经费相对较少的实验室。     

咖啡叶片原生质体分离条件的研究

以中粒种咖啡（Coffea. canephora）叶片组织为材料,研究酶液组合、酶解时间、酶液渗透压及预处理措施对其原生质体分离效果的影响,以期确定能够酶解出高数量且高活力的原生质体的酶解条件。结果表明：获得有活力原生质体的最佳酶液组合为2％纤维素酶+0.5％果胶酶+0.3％离析酶,同时酶解时间为20 h、酶液渗透压即甘露醇浓度为0.7 mol/L,预处理措施为黑暗24 h的咖啡叶片组织得到8.1×105个/g、活力达到73％的原生质体。     

甘蔗△1-吡咯啉-5-羧酸合成酶基因（P5CS）的克隆及其表达分析

△~1-吡咯琳-5-羧酸合成酶是植物脯氨酸合成过程的关键酶.应用同源性克隆结合RACE技术获得甘蔗PSCS基因cDNA全长序列2714bp,其中5'端非编码区为226bp,3'端非编码区340bp,poly(A)上游有1个聚腺苷酸五碱基AATAAA;开放读码框为2 148 bp编码715个氨基酸,含双功能域;其编码的蛋白分子量为77.7 ku,等电点为6.47.序列比对分析结果表明,P5CS基因的4个主要功能区(domain)中亮氨酸功能区(Leucine domain)相对不保守,其它功能区均较为保守.对17个物种的P5CS基因进行聚类分析,结果与公认的生物学分类及进化关系吻合.对甘蔗P5CS在根、茎、叶的表达进行实时PCR分析,结果表明,该基因在茎、叶表达量相近,但在根的表达量极低.     

不同供磷水平下2个甘蔗品种的光合作用及生长特征

为研究磷素调控不同品种甘蔗生长的光合作用机制,从而选择磷高效品种和科学施肥,本文以研究区常见甘蔗品种台糖22(ROC22)和粤糖236(YT236)为材料,设置3个供磷水平和2个品种,研究磷素对2个甘蔗品种光合作用及生长的影响。结果表明:(1)随着供磷水平提高,2个甘蔗品种的株高和生物量显著增加;移栽60 d后ROC22的株高显著大于YT236的。高磷处理下的生物量ROC22显著大于YT236,鲜重和干重分别是YT236的1.6和1.4倍。(2)随供磷量的提高,ROC22的叶绿素总量(Chl)、净光合速率(Pn)、细胞间隙CO2浓度(Ci)、蒸腾速率(Tr)和气孔导度(Gs)均显著增加。YT236的Pn、Ci、Tr和Gs在低磷和高磷处理下均显著大于无磷处理,YT236的Chl在高磷处理下显著大于低磷和无磷处理;低磷和高磷条件下的Chl,ROC22比YT236分别提高了16%和14%。在3个供磷水平下的Pn,ROC22均显著大于YT236。高磷处理下的Ci,ROC22显著大于YT236。无磷处理下的Tr和Gs,ROC22均显著大于YT236。综合分析,浓度为1 mmol/L的PO43-高磷处理对2个甘蔗品种的光合作用及生长较为适宜。ROC22甘蔗在3个供磷量下光合作用和生长均优于YT236,建议在研究区或低磷地区种植ROC22。     

红麻细胞质雄性不育系与保持系总蛋白提取及双向电泳体系优化

为进一步研究高等植物体内控制蔗糖合成的关键酶基因蔗糖合酶基因Susy在甘蔗中的表达情况,本研究以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）基因为内参基因,通过对退火温度、循环数的优化建立了一个稳定、方便的半定量RT-PCR体系。通过该体系检测干旱处理下甘蔗叶的Susy基因表达,并结合叶片酶活性和蔗糖含量进行分析。结果表明：甘蔗Susy基因的半定量RT-PCR扩增,以循环数30个、退火温度为54 ℃、内参基因与目的基因同批异管进行扩增为宜。甘蔗Susy基因在不同叶位中的表达有很大差异,总体上表现为：+1叶、+2叶>+5叶、+6叶>心叶,干旱胁迫可诱导幼嫩叶中Susy基因的表达量上升,基因表达的变化与其酶活性和蔗糖含量变化的情况相一致。     

甘蔗蔗糖合酶基因Susy半定量表达体系的建立及其应用

早期、无损伤、易于操作的阳性芽检测技术,对提高柑橘遗传转化效率是十分有利的。本文设计和构建了nptⅡ::mgfp5融合基因,通过锦橙上胚轴转化体系研究其在柑橘遗传转化中的作用。nptⅡ::mgfp5融合基因全长1 578 bp,编码525个氨基酸,作为表达载体p1301NG的选择标记和报告基因。通过农杆菌介导法转化锦橙上胚轴,再生培养1周后用体式荧光显微镜观察外植体的再生情况。在再生培养第9天时即观察到GFP荧光再生芽的形成,再生培养后10~15 d是GFP再生芽形成的高峰期。GUS染色和PCR分子检测结果证明,GFP荧光检测结果是真实可靠的。研究结果表明：nptⅡ::mgfp5融合基因能够在再生培养早期筛选到阳性转化芽,有助于提高阳性转化芽的存活率,提高柑橘遗传转化效率。     

玉米RNA提取方法的比较研究

以玉米嫩单10为材料,比较TRIzol法、CTAB法和SDS法改进法提取总RNA的效果。结果表明,SDS法改进法能有效去除多糖和蛋白,提取的RNA中28S rRNA亮度约为18S rRNA的两倍,OD₂₆₀/OD₂₈₀值介于1.7～2.2;CTAB法提取的RNA 28S rRNA明显缺失,泳道模糊不清,杂质多;TRIzol法RNA降解严重,沉淀方法以无水乙醇配合LiCl沉淀RNA节省时间,反转录和RT-PCR效果好。改良的SDS酸酚法适合玉米总RNA的提取。     

甘蔗杂交后代黑穗病抗性评价与抗感池构建

为研究甘蔗杂交后代黑穗病抗性的遗传变异,构建抗病、感病近等基因池,配置了2个杂交组合,其中组合1为CP84-1198×科5,组合2为ROC20×桂糖73-167,对2个组合部分后代进行2次新植人工接种黑穗病抗性鉴定,调查并分析了5个病害参数的关系.相关分析结果显示,病害有关参数中,发病持续期(SSD)与最大累计丛感染率(IPmax)、最大累计茎感染率(ISmax)、病情消长曲线下的面积(∑AUDPC)存在极显著的正相关,IP_与最短潜伏期(LP)在不同作物季间重演性高.应用2个病害流行学参数SSD和LP以及3个病情指数IP_、IS_和∑AUDPC作为聚类指标,采用欧氏距离及最长距离法,对2个组合的杂交后代部分个体的抗性进行聚类分析,构建了2对遗传背景不同的抗、感黑穗病近等基因池,为后续研究奠定了基础.     

外源赤霉素信号对甘蔗分蘖及其内源激素的影响

前期研究发现,外源GA信号影响了甘蔗分蘖进程。为了解GA信号对甘蔗不同分蘖时期叶片内源激素含量的影响,以综合性状优良的甘蔗主栽品种‘桂糖42号’为材料,采用不同外源GA信号调节剂对蔗种进行浸种处理,并以清水处理为对照（CK）,分别测定分蘖初期、盛期和末期+1叶（主苗+分蘖苗）中内源激素吲哚乙酸（indole-3-acetic acid,IAA）、赤霉素（gibberellins,GA）、乙烯（ethylene,ETH）、细胞分裂素（cytokinin,CTK）、脱落酸（abscisic acid,ABA）和油菜素内脂（brassinosteroids, BR）的含量,并分析它们之间的相关关系。结果表明：外源GA₃（gibberellic acid 3;GA生物合成促进剂）对蔗种浸种处理后,增加了分蘖期甘蔗分蘖叶片中IAA、GA和CTK的总体含量,提高了分蘖前期ETH含量和后期ABA含量;多效唑（paclobutracol, PP₃₃₃;GA生物合成抑制剂）处理后却增加了分蘖前期内源GA和ABA含量,提高了后期分蘖叶片中ETH含量,同时降低了CTK和BR含量。进一步的相关性分析发现,利用外源赤霉素信号促进剂处理蔗种后,甘蔗叶片内源激素IAA与GA、CTK和BR、CTK与GA均呈显著正相关;而ABA与GA呈显著负相关,与ETH呈显著正相关。可见,外源GA信号影响了甘蔗分蘖期叶片内源激素系统,促进生长的激素与抑制生长的激素达到动态平衡状态,最终导致了甘蔗分蘖的差异。甘蔗分蘖与植物内源激素含量密切相关,可通过施用外源激素来影响内源激素的含量,调控激素之间的动态平衡,达到提高甘蔗分蘖形成及其成茎的目的。     

灌溉对两个甘蔗品种叶片维管束结构及硅、镁、锌含量的影响

选用甘蔗桂糖11号和新台糖20号，设灌溉和不灌溉两种处理，在大田进行试验。结果表明，经灌溉处理的桂糖11号的后生导管、韧皮部面积、新台糖20号的韧皮部面积均分别比不灌溉条件下桂糖11号的后生导管、韧皮部面积、新台糖20号韧皮面积明显增大，有利于镁元素的吸收；但在不灌溉条件下两个品种维管束密度明显增加，促进对硅元素的吸收，而减少对镁的吸收。对维管束面积没影响。