西番莲死顶病病原病毒鉴定

鉴定结果表明，引起福建南部地区杂交种西番莲（Ｐａｓｉｆｌｏｒａ ｅｄｕｌｉｓ Ｘ Ｐ．ｅｄｕｌｉｓ ｖａｒ．ｆｌａｖｉｃａｕｐａ）死顶的病原病毒的黄瓜花叶病毒（Ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｍｏｓａｉｃ ｃｕｃｕｍｏｖｉｒｕｓ，ＣＭＶ）的一个分离物。该分离物能通过摩擦接种侵染供试１３科６３种（或品种）植物中的１１科５４种（或品种）；能够由桃蛭（Ｍｙｚｕｓ ｐｅｒｓｉｃａｅ）以非持久方式传播；失毒温度为５０℃     

利用小RNA深度测序技术鉴定海南南瓜病毒种类

2016年在海南乐东、昌江、澄迈、海口、文昌、儋州等地采集疑似被病毒病感染的南瓜叶片样品6个,将样品合并,采用小RNA深度测序技术对上述混合样本的病毒种类进行鉴定,发现样本中含有黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、番木瓜环斑病毒(Papara ringspot virus,PRSV)、黄瓜绿斑驳病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)和中国南瓜曲叶病毒(Squash leaf curl China virus,SLCCNV),通过PCR方法进一步验证了深度测序结果的准确性。SLCCNV在4个样品中存在,P-CJ分离物的DNA-A和DNA-B组分全长分别为2 735 bp(登录号为MF062251)和2 722 bp(登录号为MF062252)。DNA-A和DNA-B组分均与SLCCNV分离物的同源性最高,同源性分别为89.2%~99.3%和79.1%~98.8%;P-CJ分离物与从中国植物样品中分离到的SLCCNV聚在同一进化分支上。上述研究结果表明,P-CJ是SLCCNV的一个分离物。     

西番莲加工技术研究进展

为增加西番莲加工产品的附加值，提高资源的利用率，促进西番莲产业可持续发展，归纳了西番莲加工产品 现状，主要包括干燥、饮料、发酵、罐装等西番莲加工制品，综述了澄清、脱酸、浓缩、干燥、发酵、稳定性工艺及 灭菌等西番莲加工技术及其功能成分提取的研究进展。国内对西番莲活性成分研究主要集中在多糖、多酚、油类等方 面，罕见低聚糖的研究报道。西番莲中低聚糖的提取技术值得深入研究。本研究可为西番莲加工和技术研究提供参考。     

南方番茄病毒在海南省的发生分布及全基因组序列分析

病毒病是海南番茄生产中危害最严重的病害之一,在利用小RNA深度测序技术鉴定海南番茄病毒病病原时发现,南方番茄病毒（Southern tomato virus, STV）在海南省多个市（县）的样品中存在,而且发现1株STV单独侵染的样品。为了解STV在海南省的发生分布情况,利用RT-PCR技术,对2015—2021年采自海南省的987份疑似病毒侵染的番茄叶片样品进行检测,结果表明：在9个市（县）的142份样品中检测到STV,早在2015年STV就已经在海南番茄上存在,检出率从2015年（8.82%）到2021年（22.45%）呈逐年上升趋势。同时结合RACE和RT-PCR技术扩增到4个STV海南分离物的全长基因组,长度均为3446 nt,包含2个部分重叠的ORFs,ORF1(147～1280 nt)和ORF2(1048～3336 nt)分别编码p42蛋白（377 aa）和RdRp蛋白（762 aa）,5′UTR和3′UTR的长度分别为146 nt和110 nt。序列一致性分析表明,4个STV海南分离物间基因组序列一致性为99.86%～100.00%,与目前GenBank公布的所有STV分...     

利用多组套式引物检测庚型肝炎病毒RNA

利用庚型肝炎病毒ＮＳ－３￣５区序列合成了四组套式引物，建立了灵敏、特异的庚肝病毒ＲＮＡ双扩增聚合酶链反应检测方法。用此方法检测了１０份庚肝病毒抗体阳性肝炎患者血清及１０份肝炎标志阴性健康人血清。在１０份庚肝抗体阳性血清中，不同组引物的检出率为ＮＳ－３（１）引物９份阳性，ＮＳ－３（２）引物８份阳性，ＮＳ－４引物４份阳性，ＮＳ－５（１）引物５份阳性，ＮＳ－５（２）引物９份阳性。１０份健康人各组引物检测     

指示植物鉴定马铃薯病毒技术的研究与应用

为了寻找一种能被广泛应用的马铃薯病毒鉴定技术 ,研究了指示植物的种类及其培育方法和利用指示植物鉴定病毒的方法。,结果表明 :指示植物可以广泛地应用于马铃薯的病毒鉴定中     

茶尺蠖病毒研究进展

茶尺蠖是茶树上一种重要的食叶性害虫,分布于我国各茶区,经常在局部茶园暴发成灾,对茶叶生产造成严重的损失。茶尺蠖病毒是控制茶尺蠖自然种群消长的重要因子,主要包括茶尺蠖核型多角体病毒和茶尺蠖小RNA病毒。本文综述了茶尺蠖核型多角体病毒（EoNPV）生物学特性、扩繁、制剂的研发与应用、定性定量检测技术的建立、重组NPV病毒和茶尺蠖小RNA病毒分子生物学方面的研究进展情况,为更好的利用病毒防治茶尺蠖提供参考。     

番茄斑驳花叶病毒海南分离物全基因组序列分析

本研究采用小RNA深度测序及RT-PCR检测技术鉴定海南省陵水县冬种番茄(圣女果)病株受到烟草花叶病毒属的番茄斑驳花叶病毒(Tomato mottle mosaic virus,ToMMV)侵染。通过机械摩擦接种,将该病原病毒保存于本生烟植株上,命名为番茄斑驳花叶病毒海南分离物(ToMMV-HN)。采用RT-PCR分段扩增获得了该病毒分离物的全基因组序列。测序结果表明,该病毒分离物基因组全长6399 nt,含有4个开放阅读框,编码4种蛋白,与已报道的ToMMV9个分离物核苷酸和编码产物氨基酸序列相似性分别为98.0%～100%和99.2%～100%;与同属的番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)、番茄棕色皱果病毒(Tomato brown rugose fruit virus,TBRFV)和烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)代表分离物核苷酸序列相似性分别为84.7%、80.7%和79.0%。系统进化分析结果表明,ToMMV-HN与该病毒中国西藏和云南辣椒分离物亲缘关系最近,与美国加州和南卡州番茄分离物次之,与西班牙和巴西番茄分离物亲缘关系相对较远。本研究为我国番茄病毒病诊断和防控,尤其是抗病品种选育提供了基础资料。     

利用RNA干扰技术提高大豆脂肪含量

利用冻融法将大豆11S球蛋白GY1基因RNA干扰表达载体转入农杆菌EH105中,以大豆"吉农28"为受体,通过农杆菌介导的大豆子叶节转化法导入大豆,获得T1代转基因苗12株,并对得到的转基因植株进行分子生物学鉴定。PCR和Southern杂交检测表明,RNAi植物表达载体p3301-Gy1已成功插入到转基因大豆植株的基因组DNA中;RT-PCR和SDS-PAGE检测结果表明RNA干扰在转录后水平发挥了作用,11S球蛋白表达含量降低;利用BUCHI N-500型近红外谷物分析仪对转化的大豆蛋白质和脂肪含量进行检测,结果转化植株的籽粒蛋白质含量(36.07%)平均降低1.43个百分点,脂肪含量(21.28%)平均提高0.76个百分点。因此,利用RNA干扰技术提高大豆脂肪含量是可行的。     

Test of Small RNA Sequencing Repeatability in Rice

Deep sequencing of small RNAs(sR NA) is widely used in sR NAs studies in plants. In order to investigate the sequencing frequency variation of sR NAs, the same sR NA samples from rice grains were sequenced twice using deep sequencing technique. The sR NAs were classified into three categories, high abundance( 100 RPM), medium abundance(10–100 RPM) and low abundance(1–10 RPM). According to the repeat sequencing data of the same sample, highly expressed sR NAs( 100 RPM) were less subject to random drift, and 95% of the sR NAs Log2 ratio between two samples fell between-0.649 and 0.558. The same trend was observed in mediumly expressed sR NAs(10–100 RPM), and 95% of the Log2 ratio fell between-0.535 and 0.759. As to lowly expressed sR NAs(1–10 RPM), 95% of the Log2 ratio varied between-1.009 and 1.011. These results can be used as a theoretical guide to find differentially expressed s RNAs in sR NA studies in plants.     

海南岛黄瓜病毒病种类鉴定及其发生分布研究

2018年11月—2019年3月,在海南省三亚、乐东、东方、儋州、澄迈、海口、万宁和五指山共8个市县,采集疑似病毒病的叶片样本302份,采用小RNA深度测序和RT-PCR检测发现,黄瓜样品中存在黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus, CMV）、甜瓜黄斑病毒（Melon yellow spot virus, MYSV）、黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumber green mottle mosaic virus, CGMMV）、烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus, TMV)和瓜类褪绿黄化病毒（Cucurbit chlorotic yellows virus, CCYV）共5种病毒,检出率分别为32.79%、31.46%、23.18%、9.61%和2.65%。病毒的复合侵染率为11.28%,有8种复合侵染类型,以其中2种病毒复合侵染为主。明确了海南岛黄瓜病毒病主要种类及发生分布情况。     

超声-微波协同提取百香果皮果胶的工艺研究

以果胶得率为分析指标,采用超声-微波协同提取百香果干果皮果胶,利用响应面分析法优化其工艺条件。结果表明,百香果皮果胶超声-微波协同提取的最佳工艺参数为：液料比30 mL/g,pH 2.0,温度50 ℃,水浴60 min,超声功率50 W、微波功率600 W、超声-微波时间8.0 min,在此条件下,果胶得率可达(12.14±0.06)%。超声-微波协同法的提取效果与单独水提、超声、微波法的相比,得率分别提高了47.33%、34.74%和23.50%,3种提取方法的酯化度均≥50%,其说明百香果皮果胶属于高甲氧基果胶。扫描电镜结果显示,百香果皮细胞壁在超声-微波协同作用下破碎更为彻底,利于果胶溶出。     

紫果西番莲果实发育过程中挥发性香气物质及相关酶活性的变化

以西番莲香气物质较丰富的紫果‘台农1号’为试材,选取未成熟（T₁）、近成熟（T₂）和完全成熟（T₃）3个时期果实,采用顶空–固相微萃取–气质联用（HS-SPME-GC-MS）技术测定3个果实发育过程的挥发性香气物质组成及含量变化情况,同时检测对应果实中酯类香气物质合成相关的脂氧合酶（LOX）和醇酰基转移酶（AAT）活性,以期了解不同发育时期果实主要致香物质变化情况及物质与相关酶活性之间的相关性。结果表明：随着西番莲果实成熟度的增加,挥发性香气物质的种类和含量均有很大的提高,3个时期检测的香气物质总数分别为72种、95种和136种,总峰面积呈倍数增加;未成熟（T₁）和近成熟（T₂）2个时期萜烯类和酯类物质为主要的挥发性香气物质,在完全成熟（T₃）时期主要的挥发性香气为酯类,其峰面积占总峰面积达80.31%;随着果实成熟度的增加,酯类香气的种类和含量不断的提升,其中己酸乙酯,1-甲基己酯-己酸、丁酸乙酯、辛酸乙酯、1-甲基辛酯-丁酸、己酸己酯、1-甲基己酯-丁酸、丁酸己酯、(Z)-3-己烯基酯-己酸、乙酸己酯、2-甲基-辛酯-丙酸、辛酸己酯、3-羟基乙酯-己酸、(Z)-2-丁酸-乙酯等含量提升或占比较大,这些脂肪酸代谢途径产生的酯类在西番莲果实成熟过程中可能发挥了致香作用。LOX是酯类合成第一步的限速酶,AAT为酯类合成最后的关键酶。对不同发育期果实酯类合成相关酶活性测定结果表明,随着果实成熟度的增加,LOX、AAT酶活性呈上升趋势,尤其是T₃时期AAT酶活性显著的提升。由此推断,紫果西番莲果实发育过程中LOX和AAT酶的活性与酯类香气成分形成直接相关,酶活性的提升促进酯类香气的合成。     

海南西番莲茎腐病病原的分离与鉴定

为解决若干病原菌引起的西番莲茎基腐病症状类似,难从症状方面辨别病原菌的问题,采用经典方法即常规鉴定法,对引起海南省琼海市西番莲基腐的病原菌进行鉴定。配制选择性PDA、PDA、V-8、选择性V-84种培养基,对样本中的病原物进行分离、纯化,根据分离菌的各项形态特征描述和分离菌株的主要生长温度测定结果,以及有关文献提供的原理方法进行该分离菌鉴定。结果表明:①分离到1种疫霉菌菌株;②该菌株在选择性PDA、PDA、选择性V-8培养基生长的诸方面特征一样。菌落圆形均一,气生菌丝不丰富。孢子囊形态为侧梨形、柠檬形或椭圆形,基部钝圆,长×宽为24.5～44.3μm×22.8～34.5μm,冷冻后释放游动孢子,未见厚垣孢子。③菌株最低生长温度8～10℃,最适生长温度28℃,最高生长温度36～40℃。④28℃下,分离菌在V-8上日生长量为16.2mm,而在PDA上则为13.7mm。⑤该病原物疫霉菌属于[Phytophthora nicotianae Breda de Haan(parasitica Dastur)]。     

渗透胁迫下水稻根系核仁小分子RNA转录本变化的全基因组表达分析

 利用Affymetrix水稻60 k芯片研究了聚乙二醇6000(PEG)模拟干旱时，水稻根系核仁小分子RNA（snoRNA）转录本的表达活性变化。在模拟干旱胁迫下，水稻根系snoRNA转录本表达有很强的品种特异性，干旱敏感品种爱华5号中共有23个snoRNA转录本活性发生变化且均表现为上调表达，而耐旱品种湘丰早119中仅有2个snoRNA转录本表达活性发生变化，也都为上调表达；转录活性发生变化的snoRNA转录本都为C/D框型，且在染色体上存在5处snoRNA簇；爱华5号和湘丰早119在模拟干旱胁迫下表达发生变化的snoRNA转录本有1个转录本重叠，且此转录本在爱华5号中表达活性是湘丰早119中的17.54倍。     

贵州芭蕉芋产业化发展现状与对策建议

实现芭蕉芋产业化,创规模经济效益是发展贵州省芭蕉芋的根本出路。分析了贵州芭蕉芋的产业发展现状,认为良种不足、种植技术落后、生产与研究脱节、开发和利用单一等问题是制约芭蕉芋产业化发展的瓶颈。提出了良种先行、规范标准、加快科研成果的转化利用、建立多元化的产品开发体系和加工体系的发展对策：     

山东省小麦土传花叶病毒病的分布与病原鉴定

小麦土传花叶病毒病是侵染小麦的一种重要病害,该病害病原有多个病毒种类,主要为小麦黄花叶病毒（WYMV）和中国小麦花叶病毒（CWMV）,由禾谷多黏菌以持久性方式传播为害。为明确该病害在山东的最新分布状况,于2013-2016年采用田间调查,结合dot-ELISA和RT-PCR检测等方法对小麦土传花叶病毒病进行了研究。结果表明,小麦土传花叶病毒病主要分布在鲁南地区,而鲁中、鲁东、鲁北等为零星发生区。WYMV主要分布在临沂、济宁、泰安和枣庄等地;CWMV主要分布在烟台、威海、青岛、临沂和德州等地;烟台、威海、青岛、临沂为两种病毒的混发区。对CWMV主要分布区域（文登、荣成、胶州、莒南、平原、沂水、福山）的CWMV的CP基因进行系统进化聚类分析发现,CWMV的CP基因同源性为94.7%～98.3%,在进化树中聚类为两组,其中,平原、文登、福山和莒南分离物与日本分离物（登录号：AB299272.1）亲缘关系较近,沂水、荣成和胶州分离物与江苏大丰分离物（登录号：EF121374.1）亲缘关系较近。     

Identification and Characterization of Drought Stress- Responsive Novel microRNAs in Dongxiang Wild Rice

MicroRNAs(miRNAs) are non-coding small RNAs, which play important regulatory roles in response to biotic and abiotic stresses. Dongxiang wild rice(Oryza rufipogon, DXWR) can survive in extreme drought environment, but its molecular mechanism of drought resistance is still largely unknown. To further explore miRNA regulatory mechanisms involved in drought resistance, we identified 138 novel miRNAs in DXWR using small RNA sequencing and bioinformatics approaches, and found that the expression levels of 67 novel miRNAs were significantly affected by drought stress. In total, 200 candidate target genes were predicted and annotated for the drought stress-responsive novel miRNAs. Gene Ontology(GO) analysis and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG) pathways suggested that most of the target genes were related to metabolism. Stem-loop quantitative real-time PCR(qRT-PCR) results exhibited high concordance with sequencing data, which confirmed that miRNA expression patterns based on small RNA sequencing in the present study were reliable. Meanwhile, qRT-PCR validated the inverse expression patterns between several miRNAs and their target genes. These results will enhance our understanding of miRNA regulatory mechanisms in response to drought stress in DXWR, and can serve as an important reference for the protection and utilization of this valuable genetic resource.