利用多重PCR技术快速鉴定番木瓜性别

利用鉴定番木瓜雄性性别的特异基因片段(1 001 bp)的引物和鉴定番木瓜雄性、两性性别的特异基因片段(225 bp)的引物,分别以5个品种番木瓜的3种性别植株的总DNA为模板进行多重PCR扩增,结果表明:以雄株总DNA为模板得到1个1 001 bp和1个225 bp的扩增产物,以雌株总DNA为模板没有得到扩增产物,以两性株总DNA为模板得到1个225bp的扩增产物,根据多重PCR扩增结果,可以将番木瓜3种性别植株一次性鉴定出来.     

建立番木瓜性别研究的cDNA-AFLP分析体系

以番木瓜幼苗为材料,利用多重PCB技术快速鉴定其性别.建立适合番木瓜性别研究的cDNA-AFLP分析体系,分析影响cDNA-AFLP分析体系的各种可能因素(RNA提取、酶切与连接效率、预扩增效果等),并对影响选择性扩增反应的各因子进行优化.结果表明,选择性扩增的最佳体系,即在反应体系中,各因素终浓度分别为:Ta[酶0.06U/μL;L;Mg2+2.4mmol/L;dNTP 2.0mmol/L;引物0.48 μmol/L.通过优化体系得到的选择性扩增产物,银染检测后条带清晰稳定.表明成功建立了适合番木瓜性别研究的cDNA-AnLP分析体系.     

番木瓜优质组培苗生产体系的建立

用含有100mg/LVc＋1mg/LAgNO;+20mg/LPVP液体处理成龄番木瓜（CricappayaL）侧芽,再用70%酒精浸泡50s、0.15%升汞消毒5min,经消毒的外植体接种于MS+KT0.5mg/L+NAA0.2mg/L+GA31.0mg/L＋30g/L蔗糖+7g/L琼脂（pH=5.7）,26~28℃,每日光照培养12h,光照强度为15001x,连续培养20d;外植体经初始培养后,继代接种于MS＋BA0.5mg/L+NAA0.1 mg/L+GA,1.0mg/L+蔗糖30gL＋琼脂7g/L（pH=5.7）,26~28℃,每日光照培养16h,光照强度为2000Ix,连续培养40d,繁殖系数达3~5倍;继代芽接种MS+BA0.2mg/L+KT0.3mg/L+NAA0.Img/L+NAA0.1 mg/L+GA;1.0 mg/L+ADS40mg/L＋蔗糖30g/L＋琼脂7g/L（pH=5.7）,26~28℃,每日光照培养16h,光照强度为20001x,连续培养20d进行壮苗培养,经壮苗培养芽接种于MS+KT0.1~0.2mg/L+ NAA0.05~0.1mg/L+ IBA0.2-0.3mg/L+蔗糖20~30gL+琼脂6.5g/L（pH=5.6）,26~28℃,每日光照培养12h,光照强度为1500kx,连续培养 15~20d 进行催根培养,生根率达85%以上。生根苗经2~3d的自然光炼苗后,移栽于沙土∶椰糠∶菜园土质量比为1∶1∶1 混和的基质中,移苗后1周内,每天喷施浓度为200～400mg/L的IBA,移栽成活率达80%以上。笔者就目前番木瓜组培快繁中的问题作了系统的研究,建立了一套适合番木瓜优质种苗生产的技术体系。     

茶树酯型儿茶素水解酶鉴定及其检测体系的建立

本试验利用体外酶学方法,结合薄层层析（TLC）、高效液相色谱（HPLC）和液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）分析,首次从茶树中检测到活性较高的酯型儿茶素水解酶（Galloylated Catechins Hydrolase,GCH）的存在。在酯型儿茶素水解酶催化下,酯型儿茶素发生水解反应,生成没食子酸（GA）和非酯型儿茶素。试验确立了酯型儿茶素水解酶的最适检测体系,在2.5mL反应体系中包含0.2mmol/L酯型儿茶素、2.4mmol/L抗坏血酸、粗酶提取液若干（含0.1mg酶蛋白）和0.1mol/L磷酸缓冲液（pH6.5）,在30℃下,反应30min。此外,试验利用硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析和凝胶过滤层析对该酶进行了初步纯化。     

建立稻瘟病自然诱发鉴定体系的关键技术

本文通过总结笔者20多年来开展稻瘟病自然诱发鉴定体系研究成果,提出了建立稻瘟病自然诱发鉴定体系的7项关键技术,以期达到提高水稻品种抗稻瘟病鉴定技术水平的目的。     

一株拮抗茶炭疽病菌的木霉菌的分离、筛选及鉴定

为获得对茶炭疽病有生物防治效果的拮抗木霉菌,本文采用梯度稀释法从茶树根际土壤中分离获得23株木霉菌,并通过平板对峙法和抑菌圈法从中筛选出1株强拮抗茶炭疽病菌的木霉菌株LS17110205。该菌株对茶炭疽病菌抑菌率达76.96%,并能在茶炭疽病菌菌落上产生大量白色菌丝及绿色分生孢子,使茶炭疽病菌菌落萎缩,颜色变暗;其发酵液也能有效抑制茶炭疽病菌菌丝生长,抑制率达70.08%。扫描电镜观察发现,菌株LS17110205发酵液能使茶炭疽菌菌丝表面皱缩。基于形态学特征结合分子系统发育树分析,将菌株LS17110205鉴定为Trichoderma asperelloides。该研究结果为茶炭疽病的生物防治提供一定的理论基础。     

橡胶树根际2株产ACC脱氨酶促生菌的分离鉴定

橡胶树死皮是制约天然橡胶产量的重要因素,其发生与刺激割胶时乙烯利用量过度有关,具有1-氨基环丙烷-1-羧酸(1-aminocyclopropane-1-carboxylate,ACC)脱氨酶活性的土壤微生物可以分解利用ACC(乙烯前体)来刺激植物生长发育。本研究从橡胶树根际土壤中筛选有助于减轻橡胶树死皮发生,并对其防控有一定应用前景的菌株。本文采集了橡胶树主要种植区(海南、云南和广东)的根际土壤样品,以ACC为唯一氮源进行筛选,共分离橡胶树根际细菌152株,并测定其ACC脱氨酶活性大小,将活性较强(0.226、0.164 U/mg)的2个菌株命名为HBRM-86和HBRM-16;结合常规形态学观察、生理生化特征分析及分子鉴定,将HBRM-86和HBRM-16分别鉴定为产气肠杆菌(Enterobacteraerogenes)和粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens);测定2株菌株促生潜能,结果发现其具有较好的促生潜力,进一步研究将为死皮防控药物研发提供新的思路。     

一株芝麻枯萎病菌的鉴定及其生物学特性

为明确发生在南阳芝麻田块的芝麻枯萎病菌原物,以有效防治病害,从南阳市采集枯萎病显症芝麻植株,用常规组织分离法获得一株镰刀菌ZY-2,依据柯赫法则确定ZY-2对芝麻幼苗的致病性,显微观察形态特征,检测生物学特性,并依据核糖体基因内转录间隔区（rDNA-ITS）序列和翻译延伸因子1α基因(tef)序列对该菌进行分子鉴定。在基于rDNA-ITS序列构建的系统发育树中,菌株ZY-2与2株尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum的参比菌株（GenBank登记号：AF69310和EU285553）在自举值98%相聚一群。在基于tef基因序列构建的系统发育树中,菌株ZY-2与3株F. oxysporum的参比菌株（GenBank登记号：KF030591、KF301636和FJ985299）在自举值100%相聚一群。该菌适宜生长温度为22~31℃,最适为28℃;pH2.0~10.0范围内均可生长,最适为pH6.5~7.5;能利用多种碳源和氮源进行营养生长,但在以葡萄糖和L-脯氨酸分别作为唯一碳源和氮源的培养基上不产生分生孢子。      

PRSV-NIb基因同源dsRNA的原核表达及其在番木瓜叶片原生质体瞬时表达体系中诱导RNA沉默的研究

为探索利用PRSV-NIb基因同源dsRNA的原核表达产物在体外防治番木瓜环斑病毒的可行性,利用较保守的PRSV-NIb基因3’端的312、501和809 bp区段分别构建了含有PDK内含子的3个发夹RNA编码结构,并选用pSP73和M-Jml09LacY分别作为宿主载体和宿主菌构建了高效的dsRNA原核表达工程菌M-Jml09LacY/pSP73-RNAi-N312、M-Jml09LacY/pSP73-RNAi-N501、M-Jm109LacY/pSP73-RNAi-N809,经IPTG诱导成功表达了dsRNA,并证明dsRNA不被DNase I和RNase A降解,稳定性较好.还利用PRSV-NIb基因构建了GFP瞬时植物融合表达载体pNIb-GFP,对经3种dsRNA和GFP瞬时融合表达载体共转化的番木瓜叶片原生质体的共聚焦显微镜观察及通过半定量RT-PCR对其中mRNA表达量的分析,结果表明融合基因NIb-GFP的表达均发生了不同程度的下调,说明dsRNA在原生质体中引发了针对同源基因的沉默.     

一株溶磷真菌的分离鉴定及其溶磷能力的初步研究

利用有机磷液体培养基进行生物富集,无机磷固体培养基平板稀释法进行分离筛选,分离到一株具有溶磷能力的菌株PSFM,经过形态观察和核糖体间隔区ITS扩增序列分析,确定该菌株为黑曲霉(Aspergillus niger)。以Ca3(PO4)2为唯一磷源的液体培养基接种参试菌株PSFM,在28℃,180r/min条件下通过不同时间取样测定培养液的pH、速效磷含量,同时研究溶磷真菌PSFM的生长动态及在固体平板上的溶磷能力。结果表明,PSFM菌株具有高效溶磷能力,培养144 h溶磷量达到511.28 mg/L,继续培养菌株溶磷能力降低;溶磷菌株的培养液中pH值随溶磷量的增大而下降,在144 h时该培养液的pH值降到2.03,以后仍继续保持在低pH值水平。对供试菌株PSFM的生长曲线研究发现其在第6天时菌丝体重量达到最大值。     

浅谈马铃薯脱毒苗组培快繁技术

通过植株优选、茎尖剥离、病毒检测,培养成无毒健壮组培苗,在防虫温室（网棚）内繁殖微型薯原原种,为提高马铃薯种薯的生产和产业化发展提供重要依据。     

花生种子大小和形状对出苗和幼苗建成的影响

以不同花生品种的饱满种子为试验材料,采用盆栽方法,在幼苗3叶期和6叶期不同幼苗生长阶段研究种子大小(重量)、形状(长、宽、长/宽比)等特性与出苗速率及幼苗生长的关系。结果表明,花生种子大小、形状影响萌发出苗和幼苗生长。①花生种子质量愈大且种形愈长,其出苗后残留于子叶中的物质能量愈多,幼苗地上部鲜重较小;种子质量较小时,其长、宽、厚等性状与幼苗生长无明显相关关系,但种子质量和长/宽比显著影响地上部干物质的积累;适中质量的种子其长、宽、质量和长/宽比均明显促进地上部和根系的生长发育,且其种子长度和质量与残留物间呈显著相关关系。②中等质量的种子对根系生长的影响很小,且适中的长/宽比明显促进种子萌发时物质的运转和幼苗的生长。③较长粒型花生种子其长度与子叶残留物呈极显著正相关,宽度与子叶残留物呈显著负相关,且与地上部生长无显著相关关系;中等长度和较短粒型的种子的质量明显利于幼苗地上部的生长。     

黄花菜繁殖育苗技术

繁殖育苗技术是影响黄花菜产业发展的重要因素之一。目前生产上主要采用分株繁殖的方式,也有部分地区采用芽块繁殖、切片繁殖、花莛扦插、种子繁殖等方法进行黄花菜的繁殖育苗。近年来,黄花菜的组织培养育苗引起了研究者的关注,但还没有在生产上广泛推广。该文综述了各种黄花菜繁殖育苗技术及其优缺点,以期为生产上应用提供参考。     

湛江农垦甘蔗健康种苗繁育体系建设问题与体会

通过对近几年湛江农垦甘蔗健康种苗繁育体系实施过程中遇到的品种选择、体系管理、技术层面、设施条件、用工管理问题,逐一总结分析,提出做好繁育体系的有关4个方面的改进意见：(1)改进培育技术方案;(2)完善管理方式、模式;(3)科学安排实施进度;(4)配套完善设备设施场地建设。     

播种量和育秧方式对籼粳杂交稻甬优1540秧苗素质的影响

以生产上应用面积较大的广适性籼粳杂交稻甬优1540为材料,设置钵苗育秧和毯苗育秧2种育秧方式以及4种播种量处理,研究不同播种量和育秧方式对籼粳杂交稻秧苗素质的影响。结果表明,随着播种量的增加,无论是钵苗育秧还是毯苗育秧,各秧苗素质指标总体上呈降低趋势。同一播种量条件下,钵苗育秧处理的株高极显著高于毯苗育秧处理;钵苗育秧处理出苗率在S4播种量（8粒/孔）时显著低于毯苗育秧处理（86.0 g/盘）,其他播种量下无显著差异。2种育秧方式的叶龄和茎基宽在S1播种量（2粒/孔或21.5 g/盘）时差异不显著,在其他播种量时钵苗育秧处理显著或极显著高于毯苗育秧处理。2种育秧方式的根长、地上部干物质量和地下部干物质量仅在低播种量时差异显著;同一播种量下2种育秧方式间的根数无显著差异。     

Seedling recruitment dynamics of forage and weed species under continuous and rotational sheep grazing in a temperate New Zealand pasture

Understanding the grazing conditions under which plant populations are limited by seed availability (seed limitation) is important for devising management schemes that aim to manipulate the establishment of weed and forage species. Seeds of three weed species (Cirsium arvense, C. vulgare and Rumex obtusifolius) and five forage species (Lolium perenne, Lotus uliginosus syn. L. pedunculatus, Paspalum dilatatum, Plantago lanceolata and Trifolium repens) were broadcast sown into L. perenne–T. repens pastures in Manawatu, New Zealand and five sheep‐grazing and two slug‐grazing (with and without molluscicide) treatments were imposed in a split‐plot design. Of the five sheep‐grazing treatments, four compared continuous grazing with rotational grazing at intervals of 12, 24 and 36 d in spring, with all four grazed under a common rotation for the remainder of the year. The fifth treatment was continuous grazing all year. Seed sowing increased seedling emergence of C. vulgare, L. perenne, P. lanceolata, R. obtusifolius and T. repens under all sheep‐ and slug‐grazing treatments, with differences in seedling densities persisting for at least 21 months. Seed sowing did not increase seedling densities of C. arvense, L. uliginosus or P. dilatatum. The effects of sheep‐grazing management on seedling emergence and survival were uncoupled. For the five seed‐limited species, seedling emergence was greater on pastures that were rotationally grazed during spring compared with those that were continuously grazed. However, seedling survival was lower in pastures grazed rotationally during summer, autumn and winter, so that after 21 months seedling numbers were greater on plots that were continuously grazed all year. Exclusion of slugs increased seedling recruitment of T. repens but had no impact on the other species. As weed and forage species responded in a similar way to sheep‐grazing management (increased under continuous, decreased under rotational), it is unlikely that the goals of reducing weed invasions and enhancing forage species establishment could be carried out concurrently in established pastures with the same management.     

播种量和秧龄对钵苗机插杂交籼稻秧苗素质的影响

以杂交籼稻C两优华占为试验材料,研究了播量和秧龄对钵苗机插水稻秧苗素质的影响。结果表明,随着秧龄的降低,苗高、叶挺高和根冠比呈降低趋势,叶龄、茎基宽、总根长、根表面积、根分支数和根尖数呈先降低后升高趋势,叶面积和根平均直径呈先增加后降低趋势,而重高比呈上升趋势。随着播量的增加,苗高、叶龄和叶挺高均呈先降低后升高趋势,茎基宽、地上部干质量和重高比、总根长、根表面积、根平均直径和根分支数均呈降低趋势,而根冠比呈先上升后下降趋势。通过隶属函数值分析结果得出,秧龄为55d和播种量为每孔2粒处理下秧苗综合质素表现最优。     

氮高效水稻品种苗期耐低磷种质的筛选与鉴定

以先前通过田间试验筛选出来的36个氮高效水稻品种为供试材料,在苗期进行了耐低磷筛选,并对获得的3个耐低磷和2个低磷敏感品种响应磷素胁迫的生理机制进行了初步研究。结果表明:1)正常供磷和低磷条件下,所有调查性状的相对值(低磷/正常供磷)中,相对根系干质量、相对地上部干质量、相对根冠比和相对分蘖数均具有较大的品种间变异(变异系数分别为16.9%、10.9%、11.4%、16.3%)。相关分析表明,它们呈显著或极显著正相关。因此,这4个性状可以作为水稻苗期耐低磷筛选的评价指标。2)在低磷条件下,筛选出的3个耐低磷品种比2个低磷敏感品种的根系生长旺盛且活力强,P吸收动力学参数中Km、Cmin小,而Vmax大,酸性磷酸酶(APase)活性升幅大,磷效率在两者之间也存在显著差异。同时,不同耐低磷品种适应低磷胁迫的调节机制也有所不同。表明筛选氮磷双高效的水稻品种是可行的,同时也为后续基因定位和遗传机制的研究提供了材料和生理学依据。