一例查干湖异育银鲫洪湖碘泡虫病原的鉴定与生物信息学分析

为了鉴定东北地区异育银鲫Carassius auratus gibelio感染的病原体是否为洪湖碘泡虫Myxobolus honghuensis,在吉林省查干湖某异育银鲫养殖基地获取病鱼,采用病鱼体外观察、虫体形态学观察与可量形状测定,对该寄生虫进行了初步鉴定,并对该寄生虫的18S r DNA进行克隆、测序与生物信息学分析。结果表明:病鱼症状具有典型的碘泡虫感染特征;可量形状测定结果表明,虫体外观与尺寸均与洪湖碘泡虫接近;生物信息学分析表明,该虫的18S r DNA与Gen Bank中登录号为JF340216的洪湖碘泡虫同源性达到99.3%;系统发育树显示,与已知洪湖碘泡虫为同一进化分支,确定该病为洪湖碘泡虫感染。本研究中,首次报道了东北地区一例早期感染洪湖碘泡虫的异育银鲫病例,研究结果可为碘泡虫的防治提供参考。     

洪湖碘泡虫多克隆抗体的制备及免疫特性分析

利用蔗糖密度梯度离心法分离纯化洪湖碘泡虫,经反复冻融、液氮研磨提取可溶性蛋白,免疫小鼠制备得到多克隆抗体,并采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)、间接免疫荧光试验(IFAT)、免疫印迹分析(Western blotting)对多克隆抗体的免疫特性进行分析。间接ELISA法测定多抗血清的效价为1∶25 600;IFAT荧光定位显示洪湖碘泡虫的抗原主要位于极丝、孢子壳瓣的四周及底部一特定位置;Western blotting印迹分析显示该多抗血清与洪湖碘泡虫可溶性蛋白中约10条带发生反应,该可溶性蛋白中具有免疫原性的蛋白分子质量大小分别约为180、130、78、75、62、52、42、36、34、28ku。该多抗血清与碘泡虫属及单极虫属的一些粘孢子虫种类存在一定程度的交叉反应。     

异育银鲫瓶囊碘泡虫病组织病理学和血液学研究

对患瓶囊碘泡虫病的异育银鲫的组织病理学和血液学进行了初步研究.组织病理研究结果表明,孢囊寄生于异育银鲫咽腔部的结缔组织中,疾病初期孢囊较小且以营养体为主,孢囊壁附近分布较多营养体,孢囊内只有少量的成熟孢子,表明孢囊成熟孢子的形成是从孢囊中间逐渐向周围发展,此阶段引起异育银鲫咽腔部上皮组织扩张、坏死;疾病发展期孢囊逐渐扩大,孢子发育成熟,孢囊壁周围已无营养体,单层柱状上皮扩张明显;有些上皮组织发生肿胀、变性、坏死、脱落、粘液细胞增多等;疾病消退期孢囊内已无孢子,孢囊内物质形成空状,咽腔组织病理表现为单层柱状上皮脱落、消失.血液病理研究表明,病鱼的红细胞长径和短径均比健康鱼红细胞的要小,但无显著性差异.与健康鱼相比,病鱼的血细胞数目变化明显,表现为红细胞数显著降低,而白细胞数极显著升高,即病鱼的粒细胞、单核细胞、淋巴细胞及血栓细胞均极显著升高.     

链碘泡虫孢子超微结构的研究

本文对白链疯狂病的病原体－链碘泡虫孢子的超微结构进行了观察,发现其孢子由孢壳,极囊及孢质组成,孢壳由两壳瓣组成,壳瓣在链脊处加厚,两者通过微管连接;孢子具有两个大小不等的梨形极囊,极丝6－7圈沿极囊纵轴螺旋缠绕在基质周围,极囊的前端处有极囊帽,其宽而平部分罩住极囊前端,此处极囊壁具有极丝排出管,极囊壁由“暗－亮－暗”三层组成,外层周围环绕一层的电子致密物质,孢质中具有两个细胞核,还有线粒体,内质网,嗜碘泡等细胞器,大量的小球状电子致密颗粒集中在孢质及极囊周围。     

基于数字图像处理技术的鱼类寄生碘泡虫分类研究

针对采用传统的形态学分类方法进行鱼类寄生碘泡虫的分类时需要手动测量各种参数以作为分类依据的效率问题,提出了一种全新的基于数字图像处理技术的孢子虫参数提取方法,从而实现了孢子虫的分类操作.选取丑陋圆形、山东、野鲤、异形等4种碘泡虫作为研究对象,通过碘泡虫在显微镜下的图片样本进行形态学特征参数的计算,从而依据各类参数进行碘...     

一例导致蛋鸡肝脏肿大病原的分离与鉴定

为查明在某养鸡场的散养鸡群中,出现小部分产蛋鸡不产蛋、消瘦、肝脏肿大的原因,利用染病鸡的病料进行细菌抹片镜检、分离、培养,细菌微量生化反应管鉴定法对分离菌株进行生化鉴定,利用PCR法进行分子生物学鉴定,利用K-B药敏纸片法进行药物敏感性试验。结果显示,致病菌为金黄色葡萄球菌。药敏试验表明,在35种药物中,所分离的金黄色葡萄球菌对红霉素、青霉素G、庆大霉素、万古霉素、克拉霉素、头孢噻吩、头孢唑啉、克林霉素敏感。     

河南省一例西瓜死苗现象的病原鉴定

为分析河南省某育苗基地西瓜幼苗大量死亡的病因,从感病植株根部组织上分离、纯化得到病原物K1,经培养性状、形态特征观察,初步鉴定为尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)。对该病原菌ITS-rDNA、EF-1α和MtSSU等序列进行分析发现,均与枯萎型尖孢镰刀菌高度同源,同源性达99%。病原物致病性及寄主专化型测定显示,西瓜幼苗接种该菌后表现出枯萎病症状,与采集地自然发病株症状基本一致;与不同瓜类如甜瓜和黄瓜比较,该病原在西瓜上发病较为严重。综上分析,此例河南西瓜死苗现象是由枯萎型尖孢镰孢菌西瓜专化型(Fusarium oxyporumf.sp.niveum)侵染引起。     

养殖松江鲈鱼车轮虫病的病原种类鉴定

为了鉴定出一种寄生于松江鲈鱼(Trachidermus fasciatus)鳃表的车轮虫种类,采用显微镜活体观察的方法,并分别对车轮虫活体形态、运动状态进行了描述,结果表明虫体侧面观为帽状,口面和反口面均为圆形,虫体以反口面的附着盘吸附于鳃丝表面,离开鳃表时以反口面向前作螺旋式游动;采用吉姆萨染色法观察了车轮虫的细胞核形态,结果显示大核为马蹄形;采用统一特定法和定位描述法对于银法染色标本的附着盘结构进行了描述和测量,结果表明该虫齿沟略弯曲,外缘光滑,齿锥嵌合紧密,具锥突,齿棘光滑平直,末端圆钝,附着盘中央有1个近圆形颗粒,主要形态学特征统计数据为:虫体直径(48.68±3.93)μm、附着盘直径(38.61±2.68)μm、齿环直径(24.31±1.84)μm、齿体数21～26个、辐线数6～8根、口围绕度360°～380°.通过与其他几种车轮虫进行形态差异比较,鉴定出本种车轮虫为小袖车轮虫(Trichodina murmanica Poljansky).     

不同保存方式对吴李碘泡虫孢子形态的影响

研究了4种保存方式(5%甲醛、10%甲醛、95%乙醇、-20℃冷冻)对吴李碘泡虫孢子形态的影响进行研究,结果表明,5%甲醛保存7d后孢子各指标与新鲜孢子相比无显著性差异,但保存30d后孢子部分指标显著小于新鲜孢子,说明5%甲醛可以用于短暂(7d以内)保存吴李碘泡虫孢子。其他3种保存方式保存7d和30d均导致孢子形态学指标与新鲜样品存在显著性差异。保存过程中,孢子各形态指标的变化率不同,说明保存时孢子发生不规则变形。保存相同时间,95%乙醇对孢子各形态指标影响最大,其次依次为-20℃冷冻、10%甲醛、5%甲醛。随着保存时间的延长,除10%甲醛保存孢子总体变化率增大外,其他3种保存方式保存孢子总体变化率均减小,说明延长保存时间吴李碘泡虫孢子并非一直收缩。     

大黄鱼内脏白点病的病原分析与鉴定

从福建三都澳网箱养殖患病的大黄鱼脾、肾分离到2株优势菌(H2013032002和H2013032003),通过人工感染试验证实其为大黄鱼内脏白点病病原,应用API-20E生理生化和16SrRNA分子系统鉴定,药物敏感试验筛选敏感药物。生化鉴定结果显示2株菌与恶臭假单胞菌和荧光假单胞菌的符合度为75.2%;16SrRNA序列分析结果表明:该2株菌与恶臭假单胞菌同源率高达99.0%,确定这2株菌为恶臭假单胞菌;药物敏感试验表明:病原菌对诺氟沙星、环丙沙星、恶喹酸、卡那霉素等4种药物高度敏感。     

银鲫与普通鲫早期胚胎发育的比较研究

为了解黑龙江水系银鲫Carassius auratus gibelio和普通鲫C.auratus auratus的胚胎发育过程,对银鲫(3n♀×3n♂,SS)和普通鲫(2n♀×2n♂,DD)的胚胎发育过程进行了比较观察。结果表明:SS(DD)成熟的卵子呈浅黄色,卵膜透明,圆形,有黏性,卵径为1.3¹.7 mm(1.21.7 mm(1.2¹.6 mm);水温为(23±1)℃条件下,SS(DD)受精后1 h 08 min(1 h 03 min)进入卵裂期,受精后2 h 54 min(5 h 02 min)进入囊胚期,受精后8 h 06 min(6 h 49 min)进入原肠胚期,受精后10 h 25 min(10 h 51 min)进入神经胚期,受精后14 h 22 min(16 h 20 min)进入器官形成期,59 h 31 min(59 h 05 min)后出膜。研究表明,SS和DD均具有正常的早期胚胎发育过程,这为进一步了解SS和DD的遗传背景和生殖方式提供了生物学依据。     

恩诺沙星在异育银鲫体内的组织分布及消除规律

在24～26℃水温条件下,以10 mg.kg-1剂量,用高效液相色谱法检测组织中药物浓度,研究静脉注射和口服给药后恩诺沙星在健康异育银鲫组织内的代谢分布规律。结果表明:静脉注射后,药物在组织中代谢动力学特征符合二室模型;口服给药后,药物吸收良好,生物利用度(F)为86%,组织药物浓度-时间曲线呈现双峰,推测是由于药物在异育银鲫体内的肠肝循环作用所致。静脉注射和口服两种给药方式下,恩诺沙星在异育银鲫体内均具有良好的组织分布,肾脏、肌肉、肝胰脏、鳃和血液5种组织中的药物浓度时间曲线下总面积(AUC)分别为624.2、965.9、721.8、298.0、239.6μg·h·mL-1和465.3、343.1、542.9、411.4、205.9μg·h·mL-1,最大药物浓度(Cmax)分别为33.48、16.91、26.44、18.71μg.g-1和15.30μg·mL-1,9.20、5.39、7.78、6.88μg.g-1和4.50μg·mL-1;药物在各组织中消除时间较长,消除半衰期(T1/2β)分别为169.0、141.4、113.4、36.7、63.5 h和27.3、49.2、77.0、38.5、62.7 h。结论:恩诺沙星以10 mg.kg-1剂量单次口服给药,对细菌引起的异育银鲫病可以起到较好的治疗作用,但需注意药物残留问题。     

野鲫、异育银鲫和复合四倍体银鲫的倍性鉴别

通过比较二倍体野鲫、三倍体异育银鲫和复合四倍体银鲫等不同倍性鲫的染色体组型及红细胞核的形态大小差异,探讨了不同倍性鲫细胞遗传特征及其倍性鉴别的快速方法.结果表明:(1)二倍体野鲫体细胞染色体数为100,核型公式为22 m+ 34 sm+22 st+22 t,染色体臂数NF= 156;三倍体异育银鲫体细胞染色体数为 156 (其中6条为超数染色体),核型公式为33 m+51 sm+33 st+33 t+6 mc,染色体臂数NF=234+6 mc;复合四倍体银鲫体细胞染色体数为206 (其中6条为超数染色体),核型公式为44 m+68 sm+44 st+44 t+6 mc,染色体臂数NF= 312+6 mc.(2)二倍体野鲫、三倍体银鲫和复合四倍体银鲫的红细胞核长径、短径和核体积均依倍性增加而显著增大(P<0.05),其中,又以核体积增大最为显著,银鲫复合四倍体、异育银鲫三倍体的核体积分别为二倍体野鲫的2.0倍和1.65倍.通过在Coulter Counter颗粒分析仪上测量红细胞核体积可实现二倍体野鲫、三倍体银鲫和复合四倍体银鲫的快速鉴别.(3)在复合四倍体银鲫中还观察到较高比例(约占10%)的哑铃型红细胞核现象.     

异育银鲫各组织器官中细胞色素P450药酶活性的比较

对异育银鲫Carassius auratus gibelio肝胰脏、肾、鳃、肠和肌肉等组织器官中细胞色素P450(CYP450)主要药酶活性进行检测,研究其在异育银鲫各组织中的分布。结果显示:以CO还原差示光谱法测得异育银鲫肝胰脏、肾、鳃、肠、肌肉微拉体的细胞色素P450及b5含量均以肝胰脏微粒体中最高,其次为肾、鳃、肠微粒体,肌肉中最低。以氨基比林N-脱甲基、红霉素N-脱甲基、苯胺-4-羟化反应分别作为CYP2B、CYP3A和CYP2E的探针反应,测得氨基比林N-脱甲基酶(APD)及红霉素N-脱甲基酶(ERND)活性在上述组织中分布差异性类似,均表现为肝胰脏微粒体中最高,分别为(1.668±0.104)、(0.941±0.061)nmol/(min.mg),其次为肾、鳃、肠微粒体,肌肉微粒体中最低,分别为(0.245±0.011)、(0.078±0.019)nmol/(min.mg);苯胺-4-羟化酶(AH)活性以肝胰脏微粒体最高,为(0.052±0.009)nmol/(min.mg),其次为鳃微粒体,肌肉微粒体中最低,不能检出。研究表明,异育银鲫主要组织微粒体中具有细胞色素P450亚型活性,且它们在异育银鲫体内的分布和活性存在着组织和器官差异性,以肝胰脏组织中的含量和活性为最高。     

异育银鲫各组织器官中细胞色素P450药酶活性的比较

对异育银鲫Carassius auratus gibelio肝胰脏、肾、鳃、肠和肌肉等组织器官中细胞色素P450（CYP450）主要药酶活性进行检测,研究其在异育银鲫各组织中的分布。结果显示：以CO还原差示光谱法测得异育银鲫肝胰脏、肾、鳃、肠、肌肉微拉体的细胞色素P450及b5含量均以肝胰脏微粒体中最高,其次为肾、鳃、肠微粒体,肌肉中最低。以氨基比林N-脱甲基、红霉素N-脱甲基、苯胺-4-羟化反应分别作为CYP2B、CYP3A和CYP2E的探针反应,测得氨基比林N-脱甲基酶（APD）及红霉素N-脱甲基酶（ERND）活性在上述组织中分布差异性类似,均表现为肝胰脏微粒体中最高,分别为（1.668±0.104）、（0.941±0.061）nmol/（min.mg）,其次为肾、鳃、肠微粒体,肌肉微粒体中最低,分别为（0.245±0.011）、（0.078±0.019）nmol/（min.mg）;苯胺-4-羟化酶（AH）活性以肝胰脏微粒体最高,为（0.052±0.009）nmol/（min.mg）,其次为鳃微粒体,肌肉微粒体中最低,不能检出。研究表明,异育银鲫主要组织微粒体中具有细胞色素P450亚型活性,且它们在异育银鲫体内的分布和活性存在着组织和器官差异性,以肝胰脏组织中的含量和活性为最高。     

鲫听觉特性研究

为了解鱼类的听觉特性,以鲫Carassius auratus Linnaeus为研究对象,利用心电图(ECG)法和听觉脑干反应(ABR)法分别研究了体质量为262. 6～321. 8 g鲫的听觉阈值,通过在鱼体内插入电极,分别记录20尾鲫的心电图信号和听觉诱发电位,绘制出听力曲线,并分析比较了两种电生理听觉阈值测定方法的优缺点和准确性。结果表明:采用ECG法测得鲫听觉敏感频率范围为300～1000 Hz,最敏感频率为800 Hz,对应的听觉阈值为(70. 00±0. 55) d B;采用ABR法测得鲫听觉敏感频率范围与ECG法相近,最敏感频率相同,但对应的听觉阈值为(76. 00±0. 50) d B,采用ABR法所测数值略高于ECG法,总体相差约为(3. 50±0. 75) d B,在统计学上无显著性差异(P>0. 05)。研究表明,ABR法操作简便,数据精确,但对环境要求较ECG法更高,本研究结果可为了解中国淡水鱼类的听觉特性,以及发展淡水音响驯化型牧场建设提供参考和数据支持。     

黑龙江银鲫(Carassius auratus gibelio Bloch)精子生物学研究

测量了黑龙江水域比较有代表性的两个银鲫种群——方正银鲫和扎龙湖银鲫的染色体数量和精子密度 ,以及精子在天然水体中的泳动能力、精子的寿命、精子头部的直径和体积 ,结果表明 ,两种银鲫的遗传基础截然不同 ,方正银鲫的体细胞具有 15 0±条染色体 ,扎龙湖银鲫的体细胞具有 10 0条染色体 ;其精子的直径、体积和精子密度也反映了这一点 ,方正银鲫精子头部的直径平均为 2 .81︼m,体积平均为 11.83︼m3,尾长为 4 5 .2 6 ︼m;扎龙湖银鲫精子头部直径平均为 2 .34︼m,体积平均为 6 .83︼m3,尾长为 38.39︼m;方正银鲫的精子密度为 0 .5 7× 10 1 0 / m L～ 0 .90× 10 1 0 / m L,平均为 0 .73× 10 1 0 / m L;扎龙湖银鲫为 0 .94× 10 1 0 / m L～ 1.70× 10 1 0 / m L,平均为 1.38× 10 1 0 / m L。其他测量内容没有明显的区别 ,方正银鲫和扎龙湖银鲫精子的泳动能力分别为 4 9.16 s和 4 9.15 s,寿命分别为 3min2 4 s和 3m in16 s,两个群体之间的差异不显著 (P >0 .0 5 )。两种鲫鱼的授精力没有明显的区域。本项研究进一步证明方正县双丰水库具有 15 0±条染色体的银鲫 ,其雄性具有正常的性别发育和生产精液的能力 ,所产生的精子与倍性正常的鱼类的精子在形态结构、泳动能力和受精能力等方面没有明显的区别?     

短时间微流水处理对异育银鲫肌肉品质的影响

采用微流水系统处理池塘养殖异育银鲫(Carassius auratus gibelio),测定不同处理时间(0～9 d)鲫肌肉的主要营养成分、滋味特征、气味特征和挥发性成分等参数,研究微流水处理对鲫肌肉品质的提升作用。结果显示,微流水处理对养殖鲫肌肉中水分、粗蛋白和粗脂肪含量的影响不大(P0.05),但对鱼肉中灰分、肌糖原和总糖含量及滋味、气味及感官评分有显著影响(P0.05)。随着微流水处理时间延长,鲫鱼肉中肌糖原、总糖含量显著下降,灰分明显增加(P0.05)。电子舌和电子鼻检测结果显示,微流水处理可显著改变鲫肌肉的滋味特征、气味特征。随着微流水处理时间延长,鲫肌肉中异味挥发物含量明显减少、鱼肉自身代表性风味物质含量明显增加,且蒸熟后鱼肉的气味、滋味、质地和总分等评分明显升高,微流水处理7 d的鲫肌肉的感官评分优于0、1、3、5 d样品的,而与微流水处理9 d的样品无差异。综上可见,短时间微流水处理(≤7 d)不影响鲫鱼肉中粗蛋白和粗脂肪含量,但可显著改善养殖鲫肌肉品质,其适宜处理时间为7 d。