一株降解纤维素真菌的筛选和鉴定

本试验从肥沃的土壤中分离到一株降解纤维素的真菌,编号为F18。并对菌株的培养特征、形态特征以及ITS序列分析,结果表明,属于黑曲霉,该菌株对纤维素有较好的降解效果,并且在多种培养基上生长速度较快并且长势很旺盛。     

高效降解纤维素菌株的选育

[目的]筛选纤维素酶活性高且酶活稳定的纤维素降解菌。[方法]以木霉为出发菌株,用紫外线对其进行诱变处理,通过平板初筛和摇瓶复筛筛选出纤维素酶活力高且酶活稳定的优良突变株,然后分别以滤纸、甘蔗渣、麦秆和稻壳为目标降解物对优良突变株进行底物降解试验。[结果]经紫外线诱变、初筛、复筛,共选育出3株纤维素酶活力高且酶活稳定的优良突变株N1、N2、N3,其中N3的产酶活力最高（348 U/ml）,为出发菌株的2.13倍;N3对各种底物的降解效果均优于出发菌株,分别以滤纸、甘蔗渣、麦秆和稻壳为唯一碳源时,其失重率分别为48.68%、41.28%、26.53%和23.47%。[结论]该研究选育出了高效降解纤维素的菌株N3。     

高效降解秸秆的深绿木霉菌ATMT突变株的筛选

以羧甲基纤维素粉或滤纸为唯一碳源,对深绿木霉菌T23的农杆菌介导的突变株进行了生长速度、产孢率、色素形成等形态学观测,同时,测定了滤纸酶酶活及羧甲基纤维素酶酶活,从中筛选出降解纤维素能力较出发菌T23显著变化的突变株7株。其中,多拷贝T-DNA插入突变株较单拷贝的突变株生长速度快,产孢率高。并且,这些突变株的发酵液呈明显的色素差异。突变株插入的拷贝数越多,酶活越强,在降解过程中这2种酶都观察到了产物的反馈抑制现象。     

纤维素降解真菌的分离筛选

采用涂布平板法和刚果红平板透明圈法,从常年堆积腐烂落叶下的腐殖土壤中分离获得11株有一定纤维素降解活性的真菌菌株.采用滤纸失重法和3,5-二硝基水杨酸比色法,进一步测定了11株真菌对纤维素的降解能力,结果表明:编号为LY4-2,LY4-4,LY4-5和LY5-1的4株菌株对纤维素表现出不同程度的降解活性,其中LY4-5菌株表现出较好的降解活性,滤纸失重率为44.96%,羧甲基纤维素钠酶活为41.25IU,滤纸酶活为27.63IU.     

重阳木降解纤维素内生真菌的筛选研究

通过对重阳木茎内皮内生真菌的分离纯化,得到7株内生真菌.采用羧甲基纤维素钠培养基进行纤维素降解能力初步测定,并且结合漆酶酶活测定方法比较其降解力,得到5株具有降解纤维素能力的内生真菌.     

土壤中纤维素降解真菌的筛选及其纤维素酶活性的研究

通过对小麦/玉米秸秆还田土壤样品进行富集培养,利用刚果红纤维素培养基筛选得到产纤维素酶的真菌XJ-25, 并对该菌株进行形态学观察和18S-ITS-5.8S区序列系统发育分析,初步鉴定为格孢腔菌属(Phaeosphaeria),定名为Phaeosphaeria sp.XJ-25。在研究液体发酵培养基中碳源、氮源、培养时间、起始pH、培养温度、接种量以及通气量对菌株XJ-25的羧甲基纤维素酶(CMC)的酶活及滤纸酶（FPA）的酶活影响的基础上,利用响应面法对发酵条件进行优化。结果显示,CMC酶活达到最大的条件为玉米秸秆粉1.34 g·L^-1 (麸皮0.16 g·L^-1)、尿素 10.06 g·L^-1、培养基初始pH 3.25、接种量 4.13%,CMC酶活达到23.871 U·mL^-1。FPA酶活最大的发酵最佳条件为玉米秸秆粉1.34 g·L^-1（麸皮0.16 g·L^-1）、尿素 10.12 g·L^-1、培养基初始pH 3.41、接种量 4.22%,FPA酶活为8.653 U·mL^-1。粗酶液的最适反应温度为50℃,酶液的热稳定较差,当温度超过40℃,该酶活力显著下降。最适反应pH为5,在pH 4~6的范围内酶活性较稳定。     

牛粪纤维素降解菌的筛选与初步鉴定

通过"富集—初筛—复筛"流程,筛选出4株对纤维素有强降解能力的菌株,分别标记为TG1、HN1、HP2、P3。对4株菌的纤维素酶活性进行了定量测定;通过生理生化试验,初步鉴定TG1为放线菌,HP2为地衣芽孢杆菌,P3、HN1为枯草芽孢杆菌。     

一株纤维素降解菌的筛选与鉴定

从落叶覆盖的腐殖层土壤中富集、分离得到12株纤维素降解菌,从中筛选出一株高效降解菌(X10),研究其最适宜的培养条件为:配制以葡萄糖+微晶纤维素(1∶1)为碳源、以蛋白胨+牛肉膏(1∶1)为氮源的培养基,pH值7.5,30℃下培养40 h,测得纤维素降解酶酶活可达到67.44 U。通过对其16s rRNA测序鉴定,该菌与氧化微杆菌(Microbacterium oxydans)有99%的同源性。纤维素降解菌的选育可为高效生产纤维素酶提供新的菌种来源。     

土壤中纤维素降解真菌的筛选及酶活性分析

[目的]筛选降解小麦秸秆纤维素的真菌并分析C/N比对纤维素酶活力的影响。[方法]应用刚果红鉴定培养基和滤纸条降解度分析法筛选菌株,通过比对真菌rDNA的ITS区域序列鉴定菌株类型,通过调节培养基葡萄糖和(NH4)2SO4的比例研究了纤维素降解酶活性。[结果]从土壤中筛选出有2株分解纤维素能力较强的真菌,分别命名为NY01和NY02;真菌ITS保守序列比对结果显示,NY01与木霉的相似性最高达99%,NY02与毛霉的相似性高达99%;培养基中C/N比值在8∶1时2个菌株的CMC和FPA酶活性均达到最高。[结论]该研究为进一步探索秸秆纤维素降解奠定了基础。     

纤维素降解菌的分离、鉴定及其产酶特性研究

从纤维素富集的环境中分离到3株能以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为唯一碳源的纤维素降解菌,采用纤维素-刚果红染色法进一步筛选,获得透明圈较大的菌株1株,命名为为B1。经菌落、菌体形态观察、生理生化实验及分子生物学鉴定,初步确定为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus),该菌株表现出了较高的滤纸崩解能力和较高的纤维素酶活力。通过培养条件的优化,发现该菌株在起始p H值为5.0的培养基中,37℃培养36 h,其纤维素酶活力可达64.22 U/m L。     

一株棉秆纤维素分解真菌的分离筛选及酶学性质研究

[目的]对从棉秆腐解物中筛选得到的高效棉秆分解真菌SJ-1进行纤维素酶酶学性质的研究.[方法]研究温度、pH、金属离子对纤维素酶活力的影响,并以Lineweaver -Burk作图法测定酶促反应米氏常数Km及最大反应速率Vmax.[结果]该菌株CMCase和FPase的最适反应温度在50～60℃,最适pH为7.0,有较好的耐高温及耐碱能力.K+、Fe2对酶活有显著的激活作用,而Cu2+、Mg2+、Ca2+、Al3+等有一定的抑制作用,其中Al3的抑制作用较为强烈,Cu2+对FPase抑制较强,Mn2-对FPase有激活作用而对CMCase有抑制作用,Zn2对酶活性无明显影响.以CMC - Na做底物时酶反应的Km为2.69 mg/mL,Vmax为0.53 mg/( mL·min).[结论]菌株SJ-1的纤维素酶性质较为优良,为进一步进行菌株的选育与改造提供参考依据.     

一株产巴卡亭Ⅲ红豆杉内生真菌的分离与鉴定

[目的]分离鉴定产巴卡亭Ⅲ红豆杉内生真菌。[方法]采用常规分离方法,从东北红豆杉（TaxuscuspidataSieb.etZucc.）树皮中分离并筛选内生真菌35株;通过高效液相色谱（HPLC）技术对菌株发酵物进行检测,并结合选择性离子质谱（MS）进行确认,从中获得1株能产紫杉醇前体物质巴卡亭Ⅲ的菌株Z-1;利用ITSrDNA通用引物对产紫杉烷类物质的内生真菌进行分子生物学鉴定,并结合菌落特征、孢子与分生孢子梗的形态特征进行分类鉴定。[结果]在未经诱导的情况下,Z-1产巴卡亭Ⅲ的量约为39μg/L;形态和分子鉴定分析判定Z-1属于木霉属（Trichoderma sp.）真菌。[结论]该研究可为植物内生真菌产紫杉烷类化合物的种类多样性和产紫杉烷类内生真菌的生物多样性提供依据。     

苎麻木质纤维高效降解菌的分离与鉴定

利用羧甲基纤维素钠培养基,从腐烂苎麻秆堆中分离到1株高效纤维降解细菌,形态学观察结合16S r RNA基因分子鉴定。结果表明,该菌属于蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus),发酵进行产酶的最适温度和p H分别为42℃和7.0,在该条件下,于100 m L发酵体系中发酵降解苎麻纤维,发酵96 h后纤维素酶活力达到最高值24.3 U/m L,发酵8 d后其纤维降解率为45.1%。     

硫丹降解菌H082的分离、筛选和抑菌性能研究

从土壤中分离到一株能以硫丹为唯一硫源生长的真菌H082,通过形态学观察初步鉴定为绿色木霉(Trichoderma viride)。采用高效液相色谱法测定了H082对硫丹的降解性能,并明确了其抗菌谱。结果表明:H082在7 d内对100 mg/L硫丹的降解率大于95%,H082对多种植物病原真菌有抑制作用。     

有机磷农药乐果降解菌株L3的分离鉴定及其性质的初步研究

从常年施用农药乐果的土壤中,通过富集培养和平板稀释法,分离得到一株具有较强降解有机磷农药乐果能力的真菌菌株L3,通过形态观察及真菌的ITS检测,对其进行了鉴定,同时对其性质进行了初步研究。结果表明,该菌株为Aspergillus nomius。是以共代谢方式降解乐果的。在查氏培养基中最高能耐受6 000 mg.L-1的乐果;在28℃、pH6.0的条件下生长较好,120 h对乐果的降解率达29.2%,并且对其他有机磷农药也有较好的降解作用,120 h对乙酰甲胺磷和辛硫磷的降解率分别达65.9%和95.3%,初步确定菌株L3对有机磷农药的降解有一定的广谱性。     

一株飞龙斩血内生真菌的分离鉴定及其活性研究

从飞龙斩血内分离得到一株广谱、高活性抑菌内生真菌F-46／2,其对细菌、植物病原真菌和皮肤致病真菌24种病原微生物有不同程度的抑制作用。形态特征表明,该菌株与木霉属Trichoderma中的康氏木霉Trichoderma koningiopsis的特征基本一致。ITS序列分析显示,本菌株与康氏木霉Trichoderma koningiopsis同源性高达98％,因此将菌株F-46／2命名为康氏木霉Trichoderma koningiopsis F-46／2。     

油烟污染物降解菌分离·降解特性的研究

[目的]筛选油烟污染物降解菌,并研究其降解特性,为利用微生物修复被油烟污染的环境奠定基础[方法]利用含金龙油的选择培养基,从受油烟污染的土壤中分离筛选油烟污染物降解菌,探讨油烟污染物降解菌的最佳降解条件[结果]分离筛选出2株能降解油烟的菌株,命名为KD-1和KD-22株菌株能够不同程度地降解油烟污染物,但混合菌株表现出更强的降解能力,混合菌株对油烟污染物的降解效率可达8711％,所选的微生物能利用油类物质作为唯一碳源进行生长代谢。菌体降解油烟污染物的优化条件为：油烟污染物80g／L,NaNO3浓度2g／L,温度40℃,摇床转速220r／min、[结论]所获得的油烟污染物降解菌对于应用生物法治理油烟污染物     

乙酰甲胺磷高效降解菌的筛选与鉴定

[目的]为获得高效降解乙酰甲胺磷的微生物菌株。[方法]从常年生产有机磷农药企业排污口附近土壤取样,采用逐渐加量的驯化方式,分离筛选出菌株L1、L2,将菌株接种在乙酰甲胺磷选择性培养基中,观察菌株的生长情况和个体形态。[结果]菌株L1、L2可降解乙酰甲胺磷。菌株L1降解乙酰甲胺磷的降解率可达73%,菌株L2的降解率为61%。显微镜下观察菌株L1形成的幼龄菌落较大,菌体由分支的菌丝组成,菌丝的横隔膜上有小孔,具有足细胞存在;菌株L2形成的菌落很小,圆形,隆起状,黄色,被革兰氏染色成紫色,为革兰氏阳性菌,细胞呈微球状。[结论]菌株L1、L2可降解乙酰甲胺磷,降解率分别为73%、61%。经培养特征和生理特征鉴定,L1、L2分别属于曲霉属和微球菌属。