牛体外受精的精子获能方法对受精率和胚胎发育的影响

从屠宰场获得牛卵巢,采取卵母细胞,成熟培养用ＴＣＭ１９９＋犊牛血清;精子获能处理,以ＢＯ液＋肝素钠为基础,三个试验组分别添加咖啡因、蔡碱和已酮可可碱,受精经分别为８１．３％、８３．３％、８８．９％,均显著高于对照组（Ｐ〈０．０１）,三个试验组的囊胚率分别为２０．４％、１９．３％、２１．２％。试验得出以下结论：囊胚率与受经成正比,添加已酮可要碱效果最好。另外组内种公牛成绩也有差异。     

牛磺酸对牛体外受精早期胚胎发育的影响

研究了牛体外受精后早期胚胎体外发育时向其基础培养液中加入牛磺酸对胚胎桑椹胚率、囊胚率和孵化囊胚率的影响.试验1:以TCM-199 10?S为基础培养液(对照组),再加入7、14 mmol/L的牛磺酸(试验组),试验组与对照组的桑椹胚率分别为48.1%、47.4%和43.2%;囊胚率分别为26.4%、22.3%和21.0%;孵化囊胚率分别为21.8%、18.7%和0.试验2:IVF后2细胞、4～8细胞及8～16细胞期,在基础培养液中分别添加7 mmol/L的牛磺酸时,桑椹胚率分别为48.7%、57.1%和52.0%,囊胚率分别为25.1%、30.7%和27.9%,孵化囊胚率分别为25.9%、28.6%和25.0%;而添加14 mmol/L牛磺酸时,桑椹胚率分别为50.4%、56.4%和55.4%,囊胚率分别为26.5%、31.3%和27.7%,孵化囊胚率分别为27.5%、31.1%和29.9%.结果表明,体外发育培养液中添加7 mmol/L牛磺酸可显著提高桑椹胚率和囊胚率(P＜0.05),并且在4～8细胞期添加14 mmol/L牛磺酸最为合适.     

不同冻精处理方法对牛体外受精胚胎发育的影响

试验研究了冻精不同处理方法对胚胎体外发育的影响,现报道如下。1材料与方法1．1卵巢的采集黄牛被屠宰后,立即无菌采集其卵巢,刺破特大卵泡,剪掉、多余的脂肪组织,用灭菌吸水纸擦净,投入35～39℃、加有适量青霉素、链霉素的灭菌生理盐水中保存,3h内送回实验室。     

不同培养体系对牛体外受精早期胚胎发育的影响

为探讨体外受精早期胚胎的最佳体外培养体系,将从屠宰牛卵巢上获取的卵母细胞进行体外成熟培养、体外受精后获取的早期胚胎,分别用TCM199和mSOFaa与牛卵泡颗粒细胞和牛输卵管上皮细胞进行共培养。结果表明：TCM199和mSOFaa均能使体外受精胚胎突破8～16细胞期的发育阻断,但是囊胚发育率仅为14.3%和15.5%,差异不显著;胚胎与牛卵泡颗粒细胞和牛输卵管上皮细胞进行共培养能够使胚胎的囊胚发育率达到30.2%和33.5%,差异不显著。     

不同处理方法对牛卵母细胞体外受精效果的影响

在牛体外受精(IVF)过程中,比较不同浓度的牛卵泡液对其卵母细胞的成熟效果,并将成熟的卵母细胞与不同方法获能的精子进行受精,分析其卵丘细胞在受精前后的脱除对卵裂率及囊胚率的影响。结果表明:添加10%的牛卵泡液(BFF)对卵母细胞的成熟有显著的提高作用(P0.05);卵丘细胞在受精后的脱除效果显著优于受精前的脱除(P0.05);上游法和离心法的精子获能方式对IVF没有显著差异,但离心法略优于上游法。     

牛体外受精早期胚胎发育基因差异表达的研究

应用mRNA差异显示技术,对牛卵母细胞、体外培养的牛早期8细胞期和囊胚期胚胎的基因表达进行了研究。选取4条mRNA表达量存在差异的基因条带进行测序和同源性分析,并利用RT-PCR技术粗略检测其在卵母细胞、8细胞和囊胚中的表达水平。结果表明:4个基因分别与核糖体蛋白S4,Y连接1(RPS4Y1)、末端脱氧核苷酰转移酶作用因子2(DNTTIP2)、剪接和多聚腺苷酸化特异因子3(CPSF3)和转录因子AP-2γ(TFAP2C)高度同源。RPS4Y1、DNTTIP2、CPSF3和TFAP2C在牛卵母细胞和早期胚胎发育过程中mRNA表达量存在时间性差异,可能与其参与不同的生理活动有关。     

NGF对牛体外受精和孤雌激活早期胚胎发育的影响

在牛胚胎培养液中分别添加5、10、15、20μg/L神经生长因子（Nerve growth factor,NGF）,观察其对牛体外受精和孤雌激活胚胎体外发育的影响。结果显示：培养液中添加10μg/L NGF,可显著提高牛卵母细胞体外受精囊胚率（35.0%vs 50.0%,0.010.05）。结果表明,10μg/L NGF可促进牛体外受精和孤雌激活早期的胚胎发育。     

牛磺熊去氧胆酸的药理作用及应用研究进展

牛磺熊去氧胆酸(tauroursodeoxycholic acid, TUDCA)是天然熊胆中的一种结合型胆汁酸,在临床上用于治疗肝胆疾病。TUDCA具有保肝、利胆、溶石的作用,而且在非肝胆疾病中也具有潜在的药用价值。论文以近年来国内外TUDCA对各种疾病模型的研究为基础,对TUDCA的药理作用及应用进行综述,为TUDCA的进一步开发利用提供参考。     

孕酮对牛精子体外受精及胚胎发育的影响

通过在牛精子获能液中添加不同浓度的孕酮,应用体外培养技术对牛精子体外获能及早期胚胎发育进行了研究。通过对顶体反应、超激活、早期胚胎发育率及其与精子孵育时间对精子活率的观察,筛选出获能液中最适孕酮浓度及其有利于牛早期胚胎发育的最佳浓度。结果表明,单独添加孕酮不能诱导牛精子体外获能;孕酮只能诱导获能精子发生顶体反应,而且有一个剂量依赖关系,以1μg/mL的添加效果最好。当浓度超过1μg/mL、作用时间超过4h时,精子活率下降;获能液中添加孕酮,无论剂量多少,对胚胎体外发育无明显的促进作用。     

三种培养基对牛体外受精胚胎发育的影响

本文比较了三种培养基：（1）B2（LABORNI、OIREC．C．D,France）＋颗粒细胞（GC）、（2）IVMD-101（FHK,Japan）、（3）ACM（本实验室自配）＋胎鼠成纤维细胞（MEF）,对牛体外受精胚胎发育的影响。结果显示,以卵裂率（％）来说,第1,2组和第3组分别为65．3±0．05、73．8±0．12及72．7±0．12;以囊胚率（％）来说,第1,2组和第3组分别为33．8±0．05、10．5±0．07及38．9±0．18;而以AB级囊胚率（％）来说,第1,2组和第3组分别为67．6±0．05、60．1±0．04及71．8±0．11。因此,通过统计分析,在我们所研究的三种培养基中,ACM＋MEF效果最好。     

牛磺胆酸对小鼠体内氧自由基的影响

为了研究牛磺胆酸(TCA)对小鼠体内氧自由基代谢的影响,采用黄嘌呤氧化酶法、二硫代二硝基苯甲酸法、紫外分光光度法、硫代巴比妥酸法和酶联免疫特异性测定法分别测定了给药后小鼠血浆、肝脏和脑组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)的活力、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量及血浆中一氧化氯合酶(NOS)的活力.结果显示,低剂量TCA能显著提高血浆、肝脏和脑组织中GSP-PX活力及肝脏和脑组织中CAT活力,显著降低血浆中GSH-PX活力和脑组织中GSH-PX活力.高剂量的TCA能显著提高血浆中GSH-PX、肝脏和脑组织中T-SOD、GSH-PX及肝脏中CAT活力.低、高剂量的TCA能显著降低血浆、肝脏和脑组织中MDA的含量,以及提高血浆中NOS活力.结果证明,TCA的抗氧自由基作用与其提高体内SOD、GSH-PX、CAT、NOS的活力和降低MDA含量有关.     

环境热休克对附植前早期牛胚胎发育的影响

母体内发育的胚胎,其存活能力在很大程度上依赖于母体环境。在输卵管和子宫功能的生理调节受到破坏的情况下,就可能发生胚胎的丢失或死亡。所谓的破坏因素,可能是母体生理方面的内在错误,或是强加于母体的特殊的外界环境应激。在热休克的条件下,胚胎能否经受住母体环境变化带来     

牛体外受精胚胎卵裂阶段对其体发育能力影响的研究

将经过体外成熟培养（ＩＶＭ），体外受精（ＩＶＦ）后获得的牛早期胚胎，按其所处卵裂阶段的不同，划分为２细胞、３～４细胞和５细胞以上３个试验组，在体外条件十继续培养到发育囊胚和孵化囊胚阶段，以观察在胚胎早期，受精卵裂发育的快慢与其后胚胎所获得的继续发育能力的关系。结果显示，牛早期胚胎体囊胚发育率的高低，与其在体外培养（ＩＶＣ）前卵裂发育的快慢成正比。在ＩＶＦ后４２～４６ｈ处于２细胞、３～４细胞和５细胞     

热应激对植入前牛胚胎发育的影响

采集屠宰母牛卵巢和输卵管中的卵母细胞，进行体外受精，受精卵继续在体外培养。将发育3d的牛胚胎于42℃下分别培养0．5、2．0和4．0h，与对照组（39℃）牛胚胎相比，接触最高热应激（42℃，4h）处理的胚胎，约509／6的胚胎发育速度明显下降。而处理组牛胚胎发育到第9d的囊胚数、细胞数及内细胞团与滋养外胚层比率与对照组差异不显著（P〉0．05）。表明，温度升高对牛囊胚期胚胎的发育没有明显损害。对9d的囊胚进行基因性别分析发现，正常体外培养的雄胚发育快于雌胚，而在发育第3d受42℃热应激后，到囊胚期生存的胚胎性别比率发生改变，雌胚比率高于雄胚，表明雌性胚胎比雄性胚胎具有更强的抗热应激能力。     

基因表达差异对牛胚胎发育潜能的影响

随着牛胚胎体外生产(IVP)技术的不断成熟,体外胚胎生产在一些国家已进入商业化运营阶段.但与体内胚胎相比其移植受体妊娠率、产犊率及胎儿的后天发育能力均较差.因此,开发一种既可靠又实用的检测胚胎发育潜能的技术显得尤为重要.应用实时荧光定量PCR技术检测早期胚胎基因表达,通过分析mRNA的表达丰度来评价卵母细胞成熟情况和胚...     

Percoll法处理牛精子对体外受精胚胎发育的影响

牛冷冻精液解冻后,在Ｐｅｒｃｏｌｌ梯度液中４００ｇ离心２４ｍｉｎ有效地获得了５７．８７％±８．０％的精子回收率;对照组上游法精子回收率仅为１５．８７％±１．９％（Ｐ〈０．０５）。Ｐｅｒｃｏｌｌ和上游２种方法分离的精子在受精液中８,１８ｈ后的活率,分别为６０％,１０％和７０％,２０％,２种浓度Ｐｅｒｃｏｌｌ法分离的精子对不同成熟处理的卵母细胞体外受精子（ＩＶＦ）卵裂率的影响,精子最终浓度为２×１０＾     

钙离子载体对牛精子体外受精及胚胎发育的影响

在牛精子获能液中添加不同浓度的钙离子载体,应用体外培养技术对牛精子体外获能及早期胚胎发育作了研究。通过对顶体反应、超激活、活率和早期胚胎发育率的观察,筛选出获能液中最适的钙离子载体浓度,作用时间及其有利于早期胚胎发育的最佳浓度。结果表明:钙离子载体在诱导牛精子获能上存在一个浓度-时间阈值,其最佳浓度和时间组合是0.1μM处理2min或者0.15μM处理0.5min,此时的囊胚率最高;钙离子载体的添加不能诱导牛精子获能的发生。     

牛磺鹅去氧胆酸对热应激小鼠免疫功能的调节作用

为探讨牛磺鹅去氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)对热应激小鼠免疫功能的调节作用,试验将50只小鼠随机分成5组,分别为对照组、热应激组和低、中、高剂量TCDCA组(剂量分别为50、100、200 mg/kg)。热应激组和低、中、高剂量TCDCA组小鼠置于(35.5±0.5) ℃、相对湿度60%环境下连续热应激7 d。结束后分别检测小鼠脾脏指数、血清IgG、小肠sIgA的含量及外周血T淋巴细胞亚群和B淋巴细胞的变化。结果表明,热应激引起小鼠脾脏指数显著下降(P＜0.05),血清IgG、肠sIgA显著升高(P＜0.05),外周血CD8⁺、CD19⁺百分率显著下降(P＜0.05),CD4⁺百分率下降不显著(P＞0.05),CD4⁺/CD8⁺比值显著升高(P＜0.05),表明热应激导致小鼠机体免疫功能发生紊乱。TCDCA对热应激小鼠脾脏指数无显著影响;但能显著抑制热应激引起的血清IgG含量、小肠sIgA含量升高(P＜0.05)和显著提高外周血CD8⁺、CD19⁺百分率(P＜0.05),同时能够调节CD4⁺/CD8⁺ 比值到正常水平。因此,TCDCA对热应激导致的小鼠免疫功能紊乱具有显著的改善作用。     

葡萄糖在牛体外受精及胚胎发育中的影响

在牛精子获能液中添加不同浓度的葡萄糖,应用体外培养技术对牛精子体外获能及早期胚胎发育进行研究,通过观察顶体反应、超激活、活率和早期胚胎发育率,筛选出获能液中最适葡萄糖浓度及其有利于牛早期胚胎发育的最佳浓度.结果表明:葡萄糖是精子获能和维持超激活运动的主要能源物质,其代谢过程中产生的活性氧在牛精子体外获能、受精过程中起重要作用,高浓度(超过9.15 mM)葡萄糖有利于获能的完成;但是对早期胚胎发育不利,对早期胚胎发育来说其最适添加量为6.10 mM,此时的囊胚率最高.