百合总RNA提取方法的比较和分析

以卷丹、麝香百合品种富田和离体鲜切花的花蕾为材料,比较Trizol法、异硫氰酸胍法、CTAB改进法和SDS改进法提取总RNA的效果,结果表明,SDS改进法能有效去除多糖,提取的RNA中28S rRNA亮度约为18S rRNA的两倍,OD260/OD280值介于1．7-2．2之间,卷丹RNA得率为132．52μg／g,富田RNA得率为186．88μg／g。进一步用SDS改进法分别提取富田外轮花瓣、内轮花瓣、雄蕊、雌蕊、叶和茎的RNA,同样可以获得完整的纯度高的RNA,其中28S rRNA亮度约为18S rRNA的两倍,OD260／0D280值介于1．7～2．2之间,说明此方法适用于百合各个组织RNA的提取。经RT—PCR获得了花发育基因的特异性条带,说明用SDS改进法从百合中提取的RNA质量好、产率高、完整性强,完全适合于百合进一步的分子生物学研究。     

茶梅花瓣总RNA提取方法的比较和分析

本研究分别利用CTAB多级沉淀法、改良的异硫氰酸胍法、改良的热硼酸法、Trizol法和EASY spin植物RNA提取试剂盒法等五种方法提取茶梅花瓣总RNA,并进行了对比分析,发现EASY spin植物RNA提取试剂盒法是最为简单、快速、高效的方法,CTAB多级沉淀法次之。本研究为今后有效开展茶梅分子生物学研究提供技术便利,并为其它花卉植物RNA的提取提供必要的参考。     

火炬松总RNA提取方法的比较

植物总RNA提取的传统方法有很多种,如CTAB法,TRIzol法和SDS法。为了方便快捷的提取出高质量的植物总RNA,目前越来越多的植物总RNA提取的试剂盒被开发了出来,但不同的提取方法对不同植物组织的RNA提取效果不一。为了筛选出适合火炬松总RNA的提取方法,本研究以火炬松的韧皮部和较老的针叶为材料,比较了改良的CTAB法、Column Plant RNAout 2.0提取试剂盒、E.Z.N.A.TMPlant RNA Kit、Hi Pure Plant RNA Mini Kit、EASYspin Plus Plant RNA Kit和Mag Zol TM Reagent法提取总RNA的效果,结果表明:改良CTAB法对韧皮部和针叶均有最好的提取效果。Mag Zol TM Reagent法和EASYspin Plus Plant RNA Kit没能提取到完整的RNA,其他试剂盒的提取效果均不十分理想。     

花生总RNA提取方法比较研究

通过对2种RNA提取方法（改良CTAB法和Trizol法）和2种RNA提取试剂盒（AXYGEN总RNA提取试剂盒和TIANDZ总RNA提取试剂盒）进行比较研究,以期获得质量较好的花生不同器官的总RNA,为后续分子生物学实验奠定基础。实验结果表明,与TRIZOL法及2种RNA提取试剂盒相比,改良CTAB法提取的花生总RNA完整性好,得率高,稳定性好,并且无DNA污染,可以进一步满足半定量RT-PCR等实验需要。     

剑麻不同组织RNA提取方法比较分析

本研究以剑麻茎尖、花和成熟叶片为材料,比较了SDSⅠ、SDSⅡ、CTABⅠ、CTABⅡ共4种提取缓冲液组成以及Promega公司RNA提取试剂盒、Qiagen植物RNA分离试剂盒、改良Trizol法、改良SDSⅠ法、改良CTABⅠ法以及优化后的改良CTABⅠ法等6种RNA提取方法提取RNA的效果,结果表明:不同缓冲液组成对实验结果影响很大,其中缓冲液CTABⅠ提取的RNA质量和产率均较理想。6种RNA提取方法提取的RNA差异明显,其中优化后的改良CTABⅠ法可同时适合于剑麻茎尖、花和成熟叶片RNA的提取,不仅产率高,而且RNA的质量也较好,无DNA污染,OD260/OD280分别为1.87、2.04和1.98,OD260/OD230分别为2.46、2.10和2.15,产率分别为84.7μg/gFW、65.8μg/gFW和4μg/gFW。用该方法提取的RNA可满足下一步文库构建及基因克隆等分子生物学研究。     

牡丹种子总RNA提取方法比较

采用CTAB法、Trizol法及改进的RNA提取试剂盒方法提取牡丹种子的总RNA,比较三种方法的优劣,从而筛选出一种适合于牡丹种子高质量RNA的提取方法。结果表明,以RNA提取试剂盒为基础,当每管样品是25 mg(700μL裂解液)时,六管合一管过吸附柱的方法操作简单,且能够有效地去除牡丹种子中脂肪、多糖、多酚等代谢物质,从而提取出高质量的RNA。琼脂糖凝胶电泳检测结果显示该法提取的RNA完整性好,紫外分光光度计检测其OD260/OD280比值为2.03。而且,该法提取得到的RNA被成功应用于荧光定量PCR表达分析等后续的分子生物学研究。     

不同方法提取绿豆总RNA的比较和改进

利用CTAB法、SDS法、Trizol法,从绿豆叶片中提取了总RNA：利用改进的GT法从绿豆叶、茎和子叶中提取了总RNA,提取结果通过凝胶电泳和紫外吸光光度值检测。结果显示：用改良的GT法提取的总RNA,凝胶电泳图上28S条带是18S条带亮度的两倍以上：而用其它3种方法提取的总RNA电泳条带不如GT法提取的总RNA清晰。用GT法从绿豆叶片中提取的总RNA的A260/A280值为1．94,可以用于RT-PCR、DDRT-PCR和Northern杂交等实验。通过RT-PCR,得到绿豆钙调蛋白基因约450bp,从而进一步检验了提取的总RNA的质量。改良的GT法可以认为是一种简便、快速的提取绿豆RNA的方法。     

草莓果实总RNA提取方法的比较

为建立草莓果实总RNA的提取方法,针对草莓成熟果实中富含多糖、多酚和色素等次级代谢物质,总RNA提取难度大的特点,比较改良的EASYspin 植物RNA提取试剂盒法和改良的CTAB法提取草莓果实中总RNA的质量。通过琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白测定仪(NanoDrop 2000)检测2 种方法提取总RNA的浓度、纯度及完整性等。改良的EASYspin 植物RNA提取试剂盒法和改良的CTAB法都能够完成草莓果实总RNA 的提取,电泳检测在28S 和18S 处呈2 条清晰的条带,OD260/OD280值和OD260/OD230值均在2.0 左右;改良的EASYspin 植物RNA提取试剂盒法成本较高,且提取总RNA质量劣于改良的CTAB法,但是EASYspin植物RNA提取试剂盒法操作简便,安全可靠,节省时间。通过RT-PCR验证,2种方法所获得的草莓果实总RNA质量较好,可达到分子生物学试验对RNA质量的要求。     

青虾transformer-2基因RNA干扰规律的研究

通过对青虾性别调控相关基因transformer-2（tra-2）的RNA干扰规律进行研究,探讨了tra-2 基因RNA干扰的最适注射部位、注射剂量、干扰效果以及干扰规律等。通过对青虾肌肉、心脏、围心腔和眼柄基部注射比较发现,围心腔注射死亡率最低,适宜RNA干扰研究。采用4 μg/g 的dsRNA剂量进行时间依赖性干扰试验,RT-PCR检验注射后第1,7,14 天的卵巢tra-2 表达量,结果显示第7 天基因表达量出现显著降低（P<0.05）。不同剂量水平（0.4 μg/g、4 μg/g 以及12 μg/g）干扰研究发现,0.4 μg/g dsRNA没有干扰结果,4 μg/g 和12 μg/g 剂量的干扰效果均显著。与4 μg/g 的剂量相比,12 μg/g 的dsRNA能在较短时间内起到明显的干扰效果,且能持续较长的时间,表明干扰规律会随着剂量的改变而变化。但两组tra-2的最低表达量分别为正常水平的23%和21%,无显著差异（P>0.05）。     

青虾种质资源研究与保护进展

为了有效开展长江中下游地区青虾规模化养殖等工作。本研究简要总结青虾基础生物学、生化组成、细胞遗传学、生化遗传学、分子遗传学及基因组学等方面的主要研究成果,并对青虾种质资源的保护利用提出了一些意见。旨在为青虾种质资源的合理利用和保护提参考资料。     

日本沼虾对碱性湖泊水含盐量的适应性研究

采用室内急性毒性实验法,研究日本沼虾对东北地区碱性湖泊水含盐量的适应能力,探讨碱性湖泊增殖与养殖日本沼虾的可能性。结果表明,在pH 为7.72~7.81、碱度7.87~14.49 mmol/L时,含盐量对幼虾毒性作用的24 h半数有效浓度为3.17 g/L,95%置信限3.02~3.32 g/L。在pH为 7.85~8.07、碱度16.97~26.96 mmol/L时,含盐量对幼虾毒性作用的24 h、48 h、96 h半数致死浓度分别为7.95、6.84、5.77 g/L,95%置信限分别为7.74~8.11、6.69~6.99、5.59~5.93 g/L。日本沼虾对东北地区碱性湖泊水含盐量的适应上限为3.69 g/L,耐受限8.65 g/L,耐受范围4.25~8.19 g/L,长期生存所适应的含盐量为1.52 g/L。碱性水环境下日本沼虾对含盐量的适应能力将下降。东北地区含盐量在4.0 g/L以下、碱度在10~30 mmol/L的碱性湖泊可以增殖与养殖日本沼虾。     

银杏叶片RNA提取方法的研究

为了获得一种银杏（Ginkgo biloba L.）叶片总RNA提取的理想方法,为后续的分子生物学研究打下基础,笔者以不同生长期的叶片为材料,利用生物分光光度计和凝胶电泳法比较了改良CTAB法、乙二醇丁醚法以及改良Trizol法提取的银杏总RNA的产率和纯度。结果表明：改良Trizol法所提取RNA的OD260/OD280比值介于1.8~2.0之间,并且OD260/OD230在1.9~2.1之间,具有较高的纯度。凝胶电泳结果表明,改良Trizol法有28S rRNA和18S rRNA 2条清晰的条带,且很少有降解;CTAB法获得的RNA品质也较好,但存在降解和弥散现象,乙二醇丁醚法提取效果较差。这表明改良Trizol法提取的总RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求。     

复配天然保鲜剂对青虾冷藏保鲜效果的影响

采用复配天然保鲜剂(保鲜剂中含有壳聚糖12.5 g/L,卡拉胶1.75 g/L,迷迭香提取物0.9 g/L,Nisin 0.7 g/L)对青虾进行保鲜处理,以青虾肌肉的pH值、挥发性盐基氮(TVB-N)值、硫代巴比妥酸反应物(TBARS)值和青虾菌落总数为指标,结合青虾肌肉蛋白质的SDS-PAGE电泳结果,分析复配天然保鲜剂对青虾4℃冷藏保鲜效果的影响.结果表明:与对照组相比,采用复配天然保鲜剂处理能延缓青虾冷藏期间肌肉pH值、TVB-N值、TBARS值和菌落总数的增长;SDS-PAGE图谱表明,该复配天然保鲜剂有利于维持青虾肌肉蛋白质结构和性质的稳定性.以上结果说明,在4℃冷藏条件下,复配天然保鲜剂处理青虾能够抑制其蛋白质降解、脂肪氧化酸败和微生物的生长,从而延缓青虾的腐败变质,货架期达到7 d,保鲜效果良好.     

缺刻缘绿藻总RNA提取方法的比较研究

为了获得高质量的缺刻缘绿藻总RNA,采用CTAB法、TRIzol法和RNAplant法3种方法对该藻总RNA的提取效果进行比较分析。结果表明,采用CTAB法提取获得的总RNA产率最高,但因可能含有较多的蛋白质、多糖等杂质使得纯度最低;TRIzol法提取的总RNA纯度较CTAB法稍高,但产率最低,且仍含有DNA带;RNAplant法提取的总RNA电泳图清晰,OD260nm/OD280nm值为2.0,高于前2种方法,产率在2种方法之间,表明RNAplant法更适于缺刻缘绿藻总RNA的提取。对后者提取的总RNA,经反转录合成的cDNA产物大小在500 bp~2 kb,并能通过RT-PCR获得18 SrRNA基因的特异性片段,进一步说明利用RNAplant法可为基因克隆、表达分析等后续研究提供高质量的RNA。     

不同温度下青虾幼体耗氧率的测定

不同温度下测定青虾（日本沼虾）幼体的耗氧率和呼吸系数，在２４￣３２℃下的耗氧率随温度的升高而增高，其湿重耗氧率的回归方程为：ｙ＝－４．５３８３＋０．３８８８ｘ；其干重耗氧率的回归方程为：ｙ＝－１３．２２００＋１．１８７５ｘ。在２４℃、２８℃和３２℃条件下，青虾幼体的呼吸系数分别为０．７１、０．７６、０．７０。