促性腺激素对猪卵母细胞体外成熟的影响

在成熟液中同时添加不同浓度(0.25～2.0μg/mL)FSH和不同浓度(0.25～2.0μg/mL)LH,探讨这2种促性腺激素结合使用对猪卵母细胞体外成熟的影响。结果显示,当FSH的添加浓度为0.25～2.0μg/mL及LH的添加浓度为0.25～2.0μg/mL时,猪卵母细胞的核成熟率极显著高于没有添加FSH和LH的对照组(P<0.01),而FSH和LH不同浓度组合之间对猪卵母细胞核成熟影响差异不显著(P>0.05)。结果表明,成熟液中同时添加0.25μg/mLFSH和0.25μg/mLLH便能极显著地促进猪卵母细胞的核成熟率,国产FSH和LH用于猪卵母细胞体外成熟研究是可行的。     

促性腺激素对猪卵母细胞体外成熟的影响

在成熟液中同时添加不同浓度(0.25～2.0μg/mL)FSH和不同浓度(0.25～2.0μg/mL)LH,探讨这2种促性腺激素结合使用对猪卵母细胞体外成熟的影响.结果显示,当FSH的添加浓度为0.25～2.0μg/mL及LH的添加浓度为0.25～2.0μg/mL时,猪卵母细胞的核成熟率极显著高于没有添加FSH和LH的对照组(P＜0.01),而FSH和LH不同浓度组合之间对猪卵母细胞核成熟影响差异不显著(P＞0.05).结果表明,成熟液中同时添加0.25μg/mL FSH和0.25μg/mL LH便能极显著地促进猪卵母细胞的核成熟率,国产FSH和LH用于猪卵母细胞体外成熟研究是可行的.     

成熟液中不同来源促性腺激素对猪卵母细胞早期孤雌发育的影响

为探讨不同来源的促性腺激素对猪卵母细胞早期孤雌发育的影响,将猪卵母细胞置于添加有不同来源促性腺激素(分别来自美国Sigma公司和中国科学院动物研究所)的成熟液中体外成熟40～44 h,成熟卵母细胞经化学孤雌激活后放入胚胎培养液中继续培养,分别于第48小时和第168小时统计卵裂率和囊胚发育率。结果发现,成熟液中同时添加0.5μg/mL中国科学院动物研究所生产的促性腺激素(FSH和LH)的卵裂率和囊胚发育率均略高于其他处理组,分别达到(65.68±24.13)%和(28.41±18.74)%;在囊胚细胞数方面,无论是添加中国科学院动物研究所还是Sigma公司生产的促性腺激素,均以添加浓度为0.5μg/mL时的囊胚细胞数最高。结果表明,两种来源促性腺激素对猪卵母细胞孤雌激活后早期发育的影响无显著差异,说明中国科学院动物研究所生产的促性腺激素(FSH和LH)能有效促进猪卵母细胞体外成熟和进一步孤雌发育效果,且以在成熟液中同时添加0.5μg/mL FSH和0.5μg/mL LH为宜。     

滩羊卵母细胞体外成熟培养的研究（英文）

[目的]为了探讨滩羊卵母细胞体外成熟过程中促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)和雌二醇(E2)的最佳添加量。[方法]试验设为5组:对照组、FSH组(10、50、100、200和300μg/ml 5个浓度梯度)、LH组(5、10、20、50和100μg/ml 5个浓度梯度)、E2组(5、10、25、50、100μg/ml 5个浓度梯度)和FSH&LH组(100μg/ml FSH+20μg/ml LH),对滩羊卵母细胞的体外成熟培养进行研究,并统计第一极体排出率。[结果]100μg/ml FSH+20μg/ml LH组是试验各组中卵母细胞成熟率最高,为64.64%,明显高于其他4组,差异显著(P<0.05);FSH组中100μg/ml优于其他四个浓度梯度和对照组,差异显著(P<0.05);LH组的20μg/ml的浓度优于其他四组和对照组,差异显著(P<0.05),E2组中50μg/ml的浓度优于其他四组和对照组,差异显著(P<0.05)。[结论]100μg/ml FSH+20μg/ml LH是滩羊卵母细胞体外成熟培养的最佳培养条件。     

EGF和β-巯基乙醇对羔羊卵母细胞体外受精和体外发育的影响

[目的]为优化幼畜卵母细胞体外培养体系提供理论基础。[方法]研究在成熟液中添加EGF和β-巯基乙醇对绵羔羊卵母细胞受精和卵裂、囊胚情况的影响,并与成年绵羊卵母细胞进行比较。[结果]在成熟液中添加不同浓度的EGF对羔羊卵母细胞卵裂率和囊胚率无显著影响(P0.05)。添加不同浓度的β-巯基乙醇可以提高羔羊卵母细胞囊胚率,其中添加100μmol/Lβ-巯基乙醇有显著影响(P0.05),但对卵裂率影响不显著(P0.05)。羔羊卵母细胞卵裂率和囊胚率均显著低于成年羊(P0.05)。添加100μmol/L的β-巯基乙醇能显著提高羔羊卵母细胞正常受精率(P0.05),且与成年羊卵母细胞受精率差异不显著(P0.05)。未添加β-巯基乙醇多精入卵率显著高于成年羊(P0.05),而添加100μmol/L的β-巯基乙醇多精入卵率与成年羊差异不显著(P0.05)。成熟液中不添加β-巯基乙醇时未受精率(20.0%)高于成年羊组(12.3%)和β-巯基乙醇(13.5%),但差异不显著(P0.05)。[结论]添加100μmol/L的β-巯基乙醇能显著提高羔羊卵母细胞发育能力,提高正常受精的比例并减少多精子受精的发生,但羔羊卵母细胞发育能力仍显著低于成年羊。     

促黄体素对绵羊卵母细胞体外成熟及卵裂的影响

促黄体素对卵母细胞成熟有一定的促进作用。为研究不同浓度LH(促黄体素)对绵羊卵母细胞体外成熟及受精发育的影响,从屠宰场采集绵羊卵巢,切割法获取卵母细胞,于不同浓度LH成熟培养液中培养24 h,进行体外受精及体外胚胎培养。按照LH的添加浓度将试验分为5个组(A组,0μg/mL;B组,5μg/mL;C组,10μg/mL;D组,15μg/mL;E组,20μg/mL)。试验结果表明:LH的添加浓度为10μg/mL时,卵母细胞的成熟率为76.60%,卵裂率为63.24%,桑椹胚率为30.81%,均显著高于其它试验组(P0.05)。综上,本试验在含有10μg/mL FSH的TCM199成熟培养液中添加10μg/mL的LH时能显著提高绵羊卵母细胞的成熟率、卵裂率及桑椹胚率,这对建立稳定有效的绵羊卵母细胞成熟体外培养体系有着重要意义。     

FSH+LH添加方式、半胱氨酸、EGF对猪IVM卵母细胞早期孤雌发育的影响

为探讨IVM液中FSH+LH添加方式、半胱氨酸和表皮生长因子(EGF)不同浓度对猪IVM卵母细胞早期孤雌发育的影响,将在不同成熟体系中IVM 44 h后的卵母细胞经化学激活后放入NCSU-23中培养,分别于第2、7天统计分裂率和囊胚发育率.结果表明:①IVM液添加有FSH+LH且在培养22 h后更换添加有FSH+LH的IVM液继续培养22 h,其分裂率(83.76±9.95) %和囊胚发育率(23.49±7.74) %显著高于添加FSH+LH连续培养44 h、中间不换液的处理(P<0.05);②IVM液中添加1.2 mmol/L半胱氨酸的囊胚发育率(28.13±10.9) %显著高于添加0、0.3、0.6 mmol/L半胱氨酸的处理,差异显著(P<0.05);③IVM液中添加10 ng/mL EGF的囊胚发育率(23.49±7.74) %显著高于其他浓度处理(P<0.05).可见:在该研究条件下,IVM液添加有FSH+LH且在培养22 h后更换添加有FSH+LH的IVM液继续培养22 h,并添加1.2 mmol/L半胱氨酸、10 ng/mL EGF,有利于促进猪IVM卵母细胞早期孤雌发育.     

不同激素对卵母细胞体外成熟培养的影响

本试验对比在成熟液中添加不同来源的促性腺激素,即进口的和国产的促性腺激素(FSH+LH)对山羊卵母细胞体外培养成熟效果的影响。二者对山羊卵母细胞成熟均有促进作用,卵母细胞成熟率都极显著高于对照组(P<0.01),分别为67.3%、68.9%和15.6%,但是它们之间的成熟率差异不显著(P>0.05)。国产激素成本低,使用方便,在卵母细胞体外成熟培养时,完全可以用国产的促性腺激素代替进口的FSH和LH。     

EDTA-Na、半胱氨酸对延边黄牛卵母细胞体外成熟及克隆胚胎体外发育的影响

在成熟液中添加不同浓度的乙二胺四乙酸钠(EDTA-Na)、半胱氨酸,研究两者对延边黄牛卵母细胞体外成熟及克隆胚胎体外发育的影响。结果表明:(1)将卵母细胞置于100μmol/L的EDTA-Na的成熟液中培养,其成熟率和后期发育率均好于其他浓度组;(2)将卵母细胞置于0.56 mmol/L的半胱氨酸的成熟液中进行培养,成熟率和后期发育率均优于其他浓度组。试验结果证明此两种药的最佳浓度适合进行延边黄牛体细胞克隆中卵母细胞体外成熟培养。     

绵羊卵巢卵母细胞体外成熟培养的研究

研究了绵羊卵巢卵母细胞体外成熟培养,并就影响体外成熟的因素进行了探讨。试验表明:添加10%和15%的胎牛血清(FCS)绵羊卵巢卵母细胞的体外成熟率(81.25%和83.75%)明显高于不添加FCS的对照组的卵母细胞成熟率(65.00%);在基础培养基中10%的FCS存在的条件下,添加一定质量分数的促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)时,卵母细胞的体外成熟率明显高于不添加FSH和LH的对照组的绵羊卵母细胞的体外成熟率;培养24 h和26h卵母细胞体外成熟率(75.00%和80.00%)明显高于培养20 h的卵母细胞体外成熟率(63.30%);从3~6 mm卵泡中抽取的卵母细胞体外成熟率(81.50%)明显高于从1~3 mm卵泡中抽取的卵母细胞的体外成熟率(53.30%)。     

延边奶山羊羔羊超数排卵及体外成熟的研究

[目的]对延边奶山羊羔羊超数排卵及体外成熟进行研究.[方法]以延边奶山羊为试验对象,研究不同超排方案对羔羊卵泡发育的影响,比较了羔羊超排处理后与成年母羊卵巢内的卵母细胞体外成熟的差异.[结果]延边奶山羊的最佳超排方案为CIDR＋PMSG 800 IU注射1次＋FSH（加拿大）20 IU/次,间隔12 h注射6次;宁波产FSH超排效果不稳定,卵泡回收率低.成年母羊卵母细胞的体外成熟率显著高于母羔羊超排卵母细胞.[结论]该研究为建立延边奶山羊JIVET技术体系提供依据.     

水牛卵母细胞体外成熟研究

本试验探讨了激素、卵泡液及颗粒细胞共培养对水牛卵母细胞体外成熟的影响.试验表明,当体外成熟培养液中含有3 μg/ mL FSH时,随着LH添加量的增加,水牛卵母细胞的第一极体排放率和成熟率逐渐提高;添加30 μg/ mL LH水牛卵母细胞的第一极体排放率(26.67 %)和体外成熟率(40.00 %)均显著(P＜0.05)提高.在含有激素的成熟培养液中添加10 %的卵泡液,水牛卵母细胞的第一极体排放率(52.33 %)和成熟率(66.28 %)均进一步显著(P＜0.05)提高.颗粒细胞单层共培养对水牛卵母细胞的第一极体排放率(49.21 %)和成熟率(65.08 %)有提高,但没有统计学意义.在本试验条件下,综合以上成熟培养条件可获得60.61 %的第一极体率和72.73 %的成熟率.     

猪卵泡液和促性腺激素处理时间对猪卵母细胞体外成熟的影响

研究猪卵泡液(pFF)的浓度和促性腺激素(FSH和LH)处理时间对猪卵泡卵母细胞体外成熟的影响.结果表明,在猪卵丘细胞-卵母细胞复合体体外成熟培养46～48 h中的后23～24 h去除促性腺激素可有利于卵丘细胞的扩散,但对卵细胞的核成熟无显著影响(P>0.05);添加适量(10%)的pFF对猪卵母细胞体外成熟有一定的促进作用,但添加浓度太高则相对抑制卵子核成熟进程.     

猪卵母细胞体外成熟培养的研究

本研究对比了不同浓度的猪卵泡液、激素、卵泡直径对猪卵母细胞体外成熟培养的影响.结果表明:①在TCM199+10％ FCS为主的基础培养液中添加浓度为10％的猪卵泡液比添加0、5％、20％能显著(P＜0.05)提高卵母细胞的成熟率;②再添加50 ug/ml的激素FSH对猪卵母细胞的成熟效果最好,显著(P＜0.05)高于LH、PMSG试验组;③来自于卵泡直径为4～7mm的卵母细胞成熟率显著高于(P＜0.05)直径≤3mm和≥8 mm卵泡的卵母细胞的成熟率.     

绵羊卵母细胞体外受精培养体系的建立与优化

本试验对影响绵羊体外成熟和受精的因素进行了比较分析,以期建立并优化这一培养发育体系。从呼市屠宰场采集绵羊卵巢,抽吸卵巢表面2~6mm的卵泡卵母细胞,在体外进行成熟培养;成熟后的卵母细胞,与处理后的附睾精子共同培养进行受精。结果表明,添加10%~15%ESS,10μg/mL FSH,20μg/mL LH,1.5μg/mL 17-βE2,100IU青霉素,100 IU链霉素的TCM-199成熟培养液能较好地促进绵羊卵母细胞体外成熟。绵羊卵母细胞体外成熟培养22-24h,用附睾精液进行体外受精,用Sofaa,10%FBS Sofaa高糖组合或CM,BM组合的发育液培养,置于38.5℃、三气(5%CO2、5%O2、90%N2)、饱和湿度的条件下,可获得较高的卵裂率76.0%和囊胚率(31.1%)。     

南阳牛卵泡卵母细胞体外成熟培养的研究

［目的］研究南阳牛卵泡卵母细胞的体外成熟培养技术。［方法］以南阳牛卵泡卵母细胞为材料,分别在成熟培养液中添加不同激素（E2、FSH＋LH＋E2、PMSG＋hCG＋E2）、不同血清（0.6%BSA、10%FCS、10%OCS）和牛卵泡液（10%、20%和30%bFF）后对其进行体外成熟培养,研究不同处理对其体外成熟状况及发育潜力的影响。［结果］在激素添加试验中,添加FSH＋LH＋E2的效果最好,卵母细胞的成熟率及卵裂率（72.5%,52.6%）显著高于添加E2（47.5%,35.4%）组;在血清添加试验中,添加10%OCS的效果最好,卵母细胞的成熟率（73.3%）显著高于添加BSA组（51.7%）;在卵泡液添加试验中,卵母细胞的成熟率及卵裂率随卵泡液浓度的增加而降低,成熟培养液中添加10%bFF可取得与添加10%FCS相似的效果。［结论］该研究为牛卵泡卵母细胞的体外成熟培养提供了参考。     

不同培养条件对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

通过使用不同的卵母细胞采集方法、不同的培养液、培养时间和细胞因子对绵羊卵母细胞的体外成熟培养的影响进行了研究.结果表明:切卵法和抽吸法对卵母细胞成熟的影响前者优于后者,差异极显著(P<0.01);培养液中添加FSH、LH及FBS对绵羊卵母细胞的影响显著高于添加发情羊血清的且差异极显著(P<0.01);绵羊的卵母细胞培养20h的成熟率极显著低于培养22h和24h的成熟率(P<0.01),培养22h和24h的成熟率差异不显著(P>0.05),培养24h和培养26h的成熟率差异极显著(P<0.01),培养26h卵母细胞老化对随后的体外受精不利;成熟液(培养液+FBS、LH、FSH、E2)中分别加入骨形态发生蛋白15(bone morphogenetie protein,BMP15)和成纤维细胞生长因子8b(fibroblast growth factor 8b,FGF8b)2种细胞因子,成熟液中添加BMP15组与添加FGF8b组卵母细胞的成熟率差异极显著(P<0.01),成熟液中添加BMP15和对照组卵母细胞成熟率的差异极显著(P<0.01),加入FGF8b组与对照组卵母细胞成熟率差异不显著(P>0.05).利用切卵法在培养液中加入FSH、LHE2和细胞因子BMP15,培养22~24h可以大大提高绵羊卵母细胞体外培养的成熟率.     

南阳牛小腔卵泡卵母细胞体外成熟的研究

探讨了不同采集方法、牛卵泡液（bFF）添加浓度、培养时间和不同培养体系对南阳牛小腔卵泡卵母细胞体外成熟的影响。结果表明：组织破碎法、剥离法和切割法平均每个卵巢采到的卵母细胞数三者之间无显著差异，但用切割法所得的卵母细胞经体外培养，其成熟率显著高于剥离法和组织破碎法；成熟液中添加10％bFF组的卵母细胞成熟率显著高于对照组和添加5％bFF组，但其卵母细胞成熟率与20％bFF组差异不显著；在不同培养时间、不同培养体系试验设计中，以30～32h组、TCM199＋OCS＋FSH＋LH＋LIF组的卵母细胞成熟率较高。     

山羊卵母细胞孤雌激活和孤雌胚体外发育研究

为寻求适合于山羊卵母细胞孤雌激活的方法,本试验采用离子霉素对体外成熟山羊卵泡卵母细胞进行孤雌激活,同时比较了培养液中添加不同类型的血清对孤雌激活胚体外发育的影响。结果表明:用2.5、5.0和10.0μmol/L离子霉素处理卵母细胞,卵裂率分别为72.3%、75.6%和70.3%,囊胚率分别为40.8%、45.4%和39.4%,均无显著差异(P>0.05)。用5.0、10.0、15.0和20.0μmol/L钙离子载体Ca-A23187处理卵母细胞,卵裂率分别为50.5%、62.5%、60.4%和60.2%,其中5.0μmol/L Ca-A23187处理组的卵裂率极显著低于其他处理组(P<0.01),但各组的囊胚率无显著差异(P<0.05)。用30、70、110和150 mL/L乙醇处理卵母细胞,卵裂率分别为40.6%、63.7%、64.2%和65.3%,其中30 mL/L乙醇组的卵裂率极显著低于其他各组(P<0.01),30和150 mL/L乙醇组的囊胚率极显著低于70和110 mL/L乙醇组(P<0.01)。在培养液与颗粒细胞共同培养条件下,分别添加100 mL/L的发情牛血清(OCS)、胎牛血清(FCS)和...     

家兔原始卵泡卵母细胞体外发育的培养体系研究

本研究根据家兔卵巢的发育特征初步探讨了家兔卵巢卵母细胞体外发育的培养体系。采集新生或30日龄家兔卵巢在不同培养液中培养,并分析家兔卵母细胞的体外发生与成熟情况与体内正常发育的兔卵巢卵母细胞之间的差异,来筛选和优化家兔卵巢卵母细胞的体外培养体系。本试验从高糖DMEM、FSH浓度、BSA/血清等3个方面来筛选较好的培养条件,结果表明:①不添加高糖DMEM的M199培养液与添加的相比,卵巢上卵母细胞数量要多,但随着培养时间的延长,组织块上卵母细胞的形态会变得不清楚;②家兔卵巢组织在FSH浓度为50和100m IU/m l、添加血清的DMEM/F12培养液中生长较好,体外培养24d后,卵母细胞数量多,直径增加到65μm;③与添加BSA的培养液相比,添加血清的培养液中的卵巢卵母细胞生长状态较好,体外培养28d后,卵母细胞数量多,并且直径可达65μm。