猪卵泡液和促性腺激素处理时间对猪卵母细胞体外成熟的影响

研究猪卵泡液(pFF)的浓度和促性腺激素(FSH和LH)处理时间对猪卵泡卵母细胞体外成熟的影响.结果表明,在猪卵丘细胞-卵母细胞复合体体外成熟培养46～48 h中的后23～24 h去除促性腺激素可有利于卵丘细胞的扩散,但对卵细胞的核成熟无显著影响(P>0.05);添加适量(10%)的pFF对猪卵母细胞体外成熟有一定的促进作用,但添加浓度太高则相对抑制卵子核成熟进程.     

体内外成熟与老化对小鼠卵激活刺激敏感性的影响

小鼠体外成熟卵母细胞组的乙醇激活率显著低于体内成熟卵母细胞组水平,在体外成熟过程中（培养液：ＴＣＭ－１９９＋ＦＣＳ（２０％）＋ｈＣＧ（２ＩＵ／ｍｌ））卵丘细胞的存在极显著地降低了成熟卵的乙醇激活率,卵激活率由５８．７％（裸卵）降为１３．８％（卵丘卵母细胞复合体）超排卵子随着卵龄的增加,卵子的乙醇激活率逐渐升高,而且体内卵的激活率高于体外老化同龄组的水平。     

孕马血清促性腺激素对狗卵母细胞体外核成熟的影响

[目的]研究孕马血清促性腺激素(PMSG;eCG)对狗卵母细胞体外成熟效果的影响。[方法]采用切割法收集卵巢表面卵丘卵母细胞复合体(COCs),并且随机分为4组,在添加不同浓度的PMSG的基础培养液(含有10%胎牛血清的DMEM)中,5%CO2,38.5℃培养箱内培养48 h。在含有0.1%透明质酸酶的D-PBS中用细小玻璃管剥离卵丘细胞从而获得裸卵,为了鉴别核成熟期,用4%甲醛溶液固定裸卵15 min,然后用10μg/ml Hoechst33342染色、压片,荧光显微镜下观察核形态。[结果]体外培养48 h后,添加PMSG处理组卵丘扩散明显,但发育到MⅠ-MⅡ的比率都没有显著差异(P(0.05)。100 IU/ml PMSG处理组GVBD期率显著低于对照组。[结论]添加PMSG改善了卵丘扩散的效果,但是没有提高核成熟率,需进一步改进狗卵母细胞体外成熟率的培养体系。     

猪卵母细胞体外成熟研究

[目的]探讨猪卵母细胞体外成熟的最佳培养条件。[方法]以NCSU-23为基础培养基,研究不同激素组合和培养时间（36、40、44和48 h）对猪卵母细胞体外成熟的影响。[结果]猪卵母细胞体外培养44 h后,成熟率最高,为81.4%;猪卵母细胞在成熟培养液培养22h后,再在无激素培养液中继续培养22 h时,成熟率最高;添加性腺激素的组成熟率显著高于不添加组,差异显著（P〈0.05）。[结论]在体外成熟培养过程中,添加性腺激素能显著提高猪卵母细胞成熟率。     

促卵泡素对犬卵母细胞体外成熟的影响

为探究基础培养基中添加促卵泡素(FSH)对犬卵母细胞体外成熟的影响,采用切割法收集卵巢表面的卵丘卵母细胞复合体(COCs),培养在添加不同浓度FSH(0,0.1,1,10 IU/mL)的TCM-199基础培养液中.体外培养72 h后,对卵母细胞进行染色观察其细胞核成熟情况.结果表明,FSH的添加没有增加犬卵母细胞恢复减数分裂的细胞数量.此外,不同处理对卵母细胞卵丘扩散无差异.     

牦牛卵母细胞体外成熟培养及孤雌发育研究

牦牛体外胚胎培养作为辅助生殖策略，能够有效提高其繁殖能力。为研究牦牛卵母细胞体外培养过程中不同的处理方式对孤雌激活胚胎发育质量的影响，10月份采集5～8岁健康母牦牛卵巢，抽吸法收集卵母细胞进行体外成熟诱导，设置卵丘-卵母细胞复合体（cumulus-oocyte complexs,COCs）和裸卵2个试验组；TCM199培养时间分别为24、36 h；以及体外培养12 h的COCs，消化之后再移入TCM199培养12 h）分别进行孤雌激活，在体外进行孤雌胚胎培养，统计卵裂率和囊胚率。结果显示，牦牛COCs的孤雌激活胚胎发育率显著低于裸卵（P<0.05），且后期出现脱卵丘细胞现象；COCs在TCM199中培养24 h的孤雌胚胎卵裂率明显高于培养36 h的处理组（P<0.05）；裸卵再培养之后卵母细胞成熟率低、进行孤雌激活的卵裂率极低，且大部分发生贴壁。以上结果表明，体外培养24 h的COCs经透明质酸酶消化为裸卵的孤雌激活效果最佳，其卵裂率最高，囊胚率最高。研究结果为揭示牦牛卵母细胞孤雌激活前的不同处理方式与孤雌激活胚胎的发育质量提供了依据，可为优化卵母细胞体外培养、提高孤雌激活...     

猪卵母细胞体外成熟的无血清培养模型的建立

实验模拟活体卵泡环境研究了猪卵母细胞体外自发成熟和次黄嘌啉（HX）对体外自发成熟的影响，建立了猪卵母细胞体外成熟的无血清培养模型。结果表明，猪卵丘－卵母细胞复合体（CEO）和裸卵母细胞（DO）在M－199培养基中能够自发成熟；HX能够剂量依赖性地且可逆性地抑制猪卵母细胞体外自发成熟。     

猪卵泡液和胎牛血清对猪小腔卵泡卵母细胞体外成熟的影响

本研究探讨了猪卵泡液(pFF)和胎牛血清(FCS)对猪小腔卵泡卵母细胞体外成熟的影响。将猪小腔卵泡(直径<2mm)卵母细胞-卵丘复合体(COCs)以15～35枚为一组随机置于添加不同浓度(0、5%、10%、20%)pFF(试验一)或不同浓度(0、5%、10%、20%)FCS(试验二)的改良TCM-199成熟液中培养44～48h,观察卵母细胞的核成熟率和卵丘扩散情况。试验一结果显示,成熟液中添加10%pFF与对照组和添加5%、20%pFF组相比,显著提高猪小腔卵泡卵母细胞的核成熟率(28 2%比20 5%、20 9%、22 3%;p<0 05);添加5%和20%pFF组与对照组相比,它们的小腔卵泡卵母细胞核成熟率之间差异不显著(p>0 05);添加5%pFF组的COCs卵丘细胞呈现第3类扩散,添加10%和20%pFF组的COCs卵丘细胞呈现第4类扩散,而不添加pFF的对照组的COCs卵丘细胞呈现第2类扩散。试验二结果显示,成熟液中添加10%FCS与对照组和添加5%、20%FCS组相比,明显提高猪小腔卵泡卵细胞的核成熟率(60 0%比37 5%、40 2%、43 9%;p<0 05);添加5%和20%FCS组与对照组相比,它们的小腔卵泡卵细胞核成熟率之间差异不显著(p<0 05);FCS在COCs体外成熟培养的前22～24h促进了卵丘扩散(3个处理组的COCs卵丘细胞呈现第3类扩散,而对照组COCs的卵丘细胞呈现第2类扩散)。研究结果表明:(1)成熟液中添加pFF可促使猪小     

不同培养条件对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

通过使用不同的卵母细胞采集方法、不同的培养液、培养时间和细胞因子对绵羊卵母细胞的体外成熟培养的影响进行了研究.结果表明:切卵法和抽吸法对卵母细胞成熟的影响前者优于后者,差异极显著(P<0.01);培养液中添加FSH、LH及FBS对绵羊卵母细胞的影响显著高于添加发情羊血清的且差异极显著(P<0.01);绵羊的卵母细胞培养20h的成熟率极显著低于培养22h和24h的成熟率(P<0.01),培养22h和24h的成熟率差异不显著(P>0.05),培养24h和培养26h的成熟率差异极显著(P<0.01),培养26h卵母细胞老化对随后的体外受精不利;成熟液(培养液+FBS、LH、FSH、E2)中分别加入骨形态发生蛋白15(bone morphogenetie protein,BMP15)和成纤维细胞生长因子8b(fibroblast growth factor 8b,FGF8b)2种细胞因子,成熟液中添加BMP15组与添加FGF8b组卵母细胞的成熟率差异极显著(P<0.01),成熟液中添加BMP15和对照组卵母细胞成熟率的差异极显著(P<0.01),加入FGF8b组与对照组卵母细胞成熟率差异不显著(P>0.05).利用切卵法在培养液中加入FSH、LHE2和细胞因子BMP15,培养22~24h可以大大提高绵羊卵母细胞体外培养的成熟率.     

牛体外发育卵母细胞成熟的评估方法研究

为探讨不同评估方法对牛卵母细胞体外成熟的判定效果,以牛卵丘卵母细胞复合体(COCs)为试验材料,采用比较卵丘扩展、形态学观察第一极体排出和固定染色观察第一极体3种方法评估牛卵母细胞成熟率的差异.结果表明,牛卵母细胞经体外24 h成熟培养后,卵丘扩展分级的成熟率为76.8％,形态学观察第一极体排出率为71.2％,固定染色观察第一极体核成熟率为77.1％,3种判定方法评估成熟率无显著差异(P＞0.05).因此,3种方法均可用于卵母细胞的体外成熟判定.     

卵丘细胞对活体取卵来源的裸卵在体外成熟中的作用

本文探讨了卵丘细胞对活体取卵(ovumpickup,OPU)来源的裸卵在体外成熟中的作用。实验分3组:自然裸卵组(NO),裸卵独自成熟培养;共成熟组(CM),自然裸卵与A级卵丘卵母细胞复合体(Cumulus oocyte complexes,COCs)共成熟培养;非裸卵组(NN),正常AB级COCs成熟后,去除卵丘再进行体外受精与体外培养。结果显示:NN组的成熟率最高,其卵裂率及囊胚率高于NO组,但与CM组相似;CM组的成熟率与NO组没有显著差异,但卵裂率和囊胚率均比NO组高。表明OPU来源的裸卵和A级COCs共成熟能显著改善裸卵的发育能力;卵丘细胞对卵母细胞的促成熟作用可直接作用于裸卵,促进裸卵的成熟及随后的发育。     

猪卵母细胞体外成熟的影响因素

通过采集屠宰场废弃猪卵巢,体外分离和培养猪卵母细胞,探讨基础培养基、激素、卵泡直径大小及卵丘细胞层数对猪卵母细胞体外成熟的影响.结果表明:改良TCMl99(mTCMl99)较NCSU-23培养猪卵母细胞成熟率显著提高(P<0.05);基础培养基中添加PMSG、hCG和pFF,卵母细胞体外成熟率(80.63%)显著高于仅...     

db-cAMP和卵丘细胞单层对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育潜力研究

为提高卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的能力,探讨了双丁酰基腺苷酸环化酶(db-c AMP)和卵丘细胞单层共培养对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育潜力。结果表明,成熟培养液中分别添加0、0.5、1.0、1.5和2.0 mmol/L的db-c AMP时,卵母细胞的体外成熟率依次降低,但浓度为1 mmol/L时的孤雌胚囊胚率(27.03%)显著高于其他各组(P0.05);卵丘细胞单层共培养卵母细胞时,其成熟率、卵裂率及囊胚率(86.00%、89.04%、28.36%)也得到了显著提高;0.4 mmol/L的db-c AMP和卵丘细胞单层共培养时,其成熟率和卵裂率(85.78%和88.95%)与对照组差异不显著,但囊胚率(35.14%)显著提高。0.4 mmol/L的db-c AMP和卵丘细胞单层共培养能够显著提高猪卵母细胞的体外成熟及孤雌胚胎的发育潜力。     

Gdf9、Zar1、Mater、Dnmt1 mRNA在绵羊卵母细胞复合体、裸卵及卵丘细胞中的表达

为了探讨卵丘细胞的完整性在支持和促进绵羊卵母细胞成熟过程中发挥的重要作用以及卵丘与卵母细胞互作的分子机理.本研究对具有完整致密卵丘细胞包裹的和无卵丘细胞包裹的绵羊卵母细胞进行了体外成熟培养试验,以不同方式处理卵丘细胞,应用Rael-time PCR技术,检测母源基因Gdf9(生长分化因子9),Zar1(合子阻滞因子1),Mater(胚胎必要的母体抗原),Dnmt1(DNA甲基化酶1)在不同卵母细胞和卵丘细胞中mRNA的含量.结果表明,4个基因的mRNA在GV期的表达量均高于24h成熟培养的卵母细胞(P＜0.05),除Dnmt1外其他3个基因在致密卵丘细胞包裹的卵母细胞的表达量均高于自然裸卵(DOs) (P ＜0.05),Zar1和Mater在24h卵丘-卵母细胞复合体的表达量低于24h裸卵(P＜0.05),除Dnmt1外其他3个基因在24h共成熟卵丘细胞中表达量均高于未培养的卵丘细胞(P＜0.05).结果提示,这4个母源基因对卵母细胞成熟有重要影响,且可能参与了卵丘细胞与卵母细胞间的相互作用,本研究结果为提高卵母细胞的体外成熟效率提供了依据及理论基础.     

猪卵子的体外成熟与体外受精研究

从屠宰猪卵巢中取出卵子，在体外培养30小时后卵丘扩散率为70．48％，第一极体释放率15．39％。卵丘层扩散的卵子体外获能的猪精液授精，受精率平均9．56％。将受精卵培养24小时，有51．22％卵子发育到2－细胞期，7．32％发育至4－细胞期。从经超数排卵的猪卵巢中取下3枚A级卵，用体外获能猪精液授精，培养24小时，其中2枚达到2－细胞期，再继续培养48小时，均达到16－细胞期。     

乙二胺四乙酸钠对猪卵母细胞的体外成熟和孤雌激活后早期发育的影响

探讨乙二胺四乙酸钠(EDTA-Na)对猪卵母细胞的体外成熟和孤雌激活后早期发育的影响.利用屠宰场猪卵巢卵母细胞,在不添加或添加不同浓度EDTA-Na的成熟培养液中体外成熟44～48 h,挑选核成熟卵母细胞进行孤雌激活,然后移到不添加或添加不同浓度EDTA-Na的胚胎培养液中进行体外培养168 h.结果表明:(1)胚胎培养液中添加适当浓度(25～100 μmol·L-1)EDTA-Na对体外成熟猪卵母细胞孤雌激活后的早期发育具有促进作用,在EDTA-Na浓度为100 μmol·L-1时,效果最佳;(2)成熟液和胚胎培养液中同时添加100 μmol·L-1EDTA-Na对体外成熟猪卵母细胞孤雌激活后的早期发育具有促进作用;(3)成熟液或/和胚胎培养液中添加不同浓度EDTANa对体外成熟培养后的猪核成熟卵母细胞及孤雌激活后的4-细胞孤雌胚SDS-PAGE电泳的蛋白质表达图谱都无显著影响.     

神经生长因子对猪卵丘细胞扩散及卵母细胞体外成熟的影响

利用光学显微镜观察及地衣红染色方法,探究猪卵母细胞体外成熟过程中添加神经生长因子(NGF对猪卵丘细胞扩散和卵母细胞成熟的影响.结果表明:在猪卵母细胞体外成熟过程中添加NGF对猪卵丘细胞扩散无明显影响;单纯添加NGF并不能显著改变第二次减数分裂中期(MⅡ期)卵母细胞的比率,但却可以显著提高生发泡期(GV期)卵母细胞比率.当NGF与促性腺激素(eCG和hCG)联合作用时,MⅡ期卵母细胞比率相对于单纯地促性腺激素作用有显著提高.     

卵巢运输保存温度和时间对野生梅花鹿卵母细胞体外成熟的影响

以屠宰日本北海道野生梅花鹿(Cervus nippon Temminck)卵巢为材料,研究了卵巢不同保存温度(20～25 ℃,10～15 ℃)和时间(12 h,24 h)及卵母细胞周围的卵丘细胞层对卵母细胞体外成熟的影响.结果表明,卵巢在20～25 ℃下保存12 h,卵母细胞成熟率为77%,无变形卵子出现,但其保存时间延长到24 h时,卵母细胞成熟率降至35%,变形率高达62%;而在10～15 ℃下保存12 h,卵母细胞成熟率为45%,卵母细胞变形率为18%,但10～15 ℃保存24 h与20～25 ℃保存24 h相比,卵母细胞变形率却很低(35%,62%)(P<0.05).周围卵丘细胞层3层以上和少于3层的卵母细胞中,48%～53%的受精卵都能正常地卵裂,但前者获得了13%的囊胚率,后者未发育至囊胚(P<0.05).     

磷酸二酯酶亚型抑制剂与细胞周期蛋白抑制剂对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

选用磷酸二酯酶3（PDE3）特异性抑制剂Milrinone和PDE4特异性抑制剂Rolipram以及细胞周期蛋白依赖性激酶（cdk）抑制剂Roscovitine（ROSC）对绵羊卵丘卵母细胞复合物（COCs）的体外自发成熟进行研究，拟建立一种模拟体内卵泡环境的绵羊卵母细胞体外培养模型。以M-199为基础培养液，绵羊COGs在含有50μmol／L的Milrinone、Rolipram、ROSC或不含上述任何抑制剂的培养液中分别培养24h。COCs在含有50μmol／LROSC的培养液中培养24h，转移到含有20IU／L FSH的培养液继续培养24h检查核相。结果表明：COGs在M-199基础培养液和含有Rolipram的培养液中都可以自发恢复减数分裂，但是在含有Milrinone或ROSC的培养液中减数分裂受到阻滞；并且ROSC对绵羊COCs体外自发成熟的抑制作用要远高于Milrinone（P〈0．05）。当COGs从ROSC转移到含有20Iu／LFSH的培养液继续培养24h后．90．4％卵母细胞恢复到第2次减数分裂中期（MⅡ）。上述结果表明PDE3和cdk在绵羊减数分裂恢复中具有重要的作用。     

猪卵母细胞极体排出的规律

试验把猪卵丘-卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte complexes,COCs)于体外分别培养24、32、38、44、48和54 h,观察它们在不同时间排出的极体数,以研究体外卵母细胞排出极体的规律.结果表明,A级和B级的COCs培养48 h的极体排出率最高(83.2％和65.7％),明显高于同级水平培养24...