天仙子发根诱导及碳源、氮源和磷源对发根培养的影响

利用发根农杆菌介导的遗传转化法,诱导天仙子发根.结合组织培养技术和高效液相色谱法,改变培养基碳源种类、硝态氮和铵态氮的比例和磷源的浓度,研究其对天仙子发根生长及莨菪碱和东莨菪碱质量分数的影响.结果表明:发根诱导中,C58C1的诱导效率最高,达到84.85%.蔗糖为碳源,发根干质量生物量积累最多,莨菪碱质量分数最高;果糖为碳源,东莨菪碱质量分数最高.WPM基本培养基中,保持总氮源浓度为15mmol/L,当NO_3~-与NH_4~+的比例为2∶1时,发根在生物量积累、莨菪碱和东莨菪碱质量分数上都达到最高;而当全部为NO_3~-时,发根干质量最少且莨菪碱和东莨菪碱的质量分数最低.高浓度KH_2PO_4(5.00mmol/L)时,发根的干质量最大,低浓度KH_2PO_4(0.31mmol/L)时,莨菪碱和东莨菪碱的质量分数最高.     

忧遁草茎段悬浮培养快繁体系的建立

为了促进药食两用植物忧遁草资源的开发利用,将忧遁草无菌茎段置于液体培养基中,采用正交设计法优化植物生长调节剂组合、基本培养基类型、NO_3~-/NH_4~+值、PO_4~(3-)和蔗糖质量浓度,以繁殖系数为指标,建立其悬浮高效繁殖的工艺。结果表明,改良的1/2MS培养基(20 mmol/L KNO_3+5 mmol/L NH_4NO_3+1. 5 mmol/L KH_2PO_4)+蔗糖20 g/L+IBA 1. 0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+NAA0. 8 mg/L+KT 0. 2 mg/L(pH值6. 0)是最适合忧遁草茎段悬浮培养的配方,其无菌苗根数为4. 09个,根长为5. 47 cm,茎高为11. 79 cm,植株形态为叶片展开充分,叶色深绿,植株健壮。     

铵态氮和硝态氮浓度对金线莲丛生芽中活性物质积累的影响

为高效培养金线莲丛生芽,并生产大量有效物质,本研究探明了培养基中硝态氮和铵态氮浓度比对悬浮培养金线莲丛生芽有效物质积累的影响。结果表明:在MS培养基中,NO_3~-和NH_4~+浓度为30/15m mol/L时,最有利于金线莲丛生芽生物量的积累,丛生芽的鲜重和干重分别达到17.52和1.91g;有效物质的积累也最高,多糖和金线莲苷生产量分别达到7.42和1.33g/L。同时初步探究了金线莲提取物对酪氨酸酶活性的抑制效果,结果表明:金线莲丛生芽甲醇、乙醇提取物对酪氨酸酶具有较好的抑制效果,分别为54%和59%。因此,通过金线莲悬浮培养生产有效物质时,可将MS培养基中的硝态氮的浓度调节为15m mol/L,而铵态氮调节为30m mol/L,并采用金线莲丛生芽乙醇提取物可更好的抑制黑色素。     

悬浮培养福建金线莲丛生芽中酚及黄酮积累影响因素研究

为筛选悬浮培养福建金线莲丛生芽中酚和黄酮积累的适宜培养基,对MS基本培养基浓度、苄基腺嘌呤(BA)、激动素(KT)及萘乙酸(NAA)浓度的4因素8水平及蔗糖、磷和氮浓度3因素7水平利用均匀设计法,研究了2组均匀设计的不同组合处理对福建金线莲丛生芽中酚和黄酮积累的影响。同时,对培养基中NO_3~-和NH_4~+浓度比的影响也进行了研究。结果表明:酚和黄酮的最高含量和生产量出现在3/4 MS+BA 2.0mg/L+KT 0.2mg/L+NAA 0.5mg/L组合和蔗糖35g/L+磷0.93mM+氮45mM组合。培养基中总氮浓度为45mM的条件下,对NO_3~-和NH_4~+浓度的影响进行了调查,结果发现当NO_3~-和NH_4~+浓度分别为30和15mM时,最利于酚和黄酮积累,总酚和总黄酮生产量分别达到112.7和87.9mg/L。因此,在福建金线莲丛生芽悬浮培养时,将3/4MS培养基中的总磷浓度调节为0.93mM,NO_3~-和NH_4~+浓度分别调节为30和15mM,加入BA 2.0mg/L,KT 0.2mg/L,NAA 0.5mg/L和蔗糖35g/L时可获得较多的酚和黄酮。     

青天葵组织培养球茎诱导的研究

【目的】研究蔗糖、大量元素和激素等浓度因素对青天葵(Nerviliae fordii)组培球茎诱导形成的影响。【方法】以青天葵球茎诱导形成的走茎,并切取生长端长度约为3 cm带节的茎段为试验材料。分别在以MS培养基为基本培养基,含不同蔗糖、KNO_3、NH_4NO_3、KH_2PO_4、6-BA、NAA和PP333浓度的培养基中培养,统计形成球茎的数量、直径和鲜重等指标。【结果】蔗糖浓度为40~50 g/L时球茎诱导效果较好;MS培养基中的大量元素,当KNO_3、NH_4NO_3、KH_2PO_4浓度分别为2800~2600、1650~1980和230~272 mg/L时诱导效果较好。在MS培养基中附加终浓度为0.5~2.5 mg/L NAA和0.4~0.6 mg/L PP333时,提高了青天葵组培球茎的形成速度且形成的球茎大小均匀;附加6-BA则不利于球茎诱导。【结论】筛选出的培养基和培养条件可有效提高青天葵球茎诱导效率。     

白色紫锥菊不定根抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞促炎介质的产生

为探究白色紫锥菊不定根抗炎特性,采用MTT法测定白色紫锥菊不定根提取物的细胞毒性。小鼠腹腔中巨噬细胞用不定根提取物处理后,再用脂多糖(LPS)刺激,采用Griess试剂法测定一氧化氮(NO)含量,用ELISA试剂盒法测定前列腺素E2(PGE_2)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,用BCA试剂盒法测定一氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶-2(COX-2)蛋白含量。为研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路,用免疫印迹法测定MAPKs(p38、JKN和ERK)蛋白的磷酸化水平。结果表明:巨噬细胞中PGE_2和NO的释放量在提取物浓度为50和100μg/mL时显著降低,而IL-1β和TNF-α的释放量在25～100μg/mL时有显著的抑制效果,但IL-6不受提取物的影响。且不定根提取物(25～100μg/mL)显著抑制了p38、JKN和ERK蛋白的磷酸化。综上所述,白色紫锥菊不定根提取物具有显著的抗炎作用,并参与调控MAPKs信号通路。此研究结果为应用白色紫锥菊不定根生产抗炎相关产品提供参考依据。     

固定化四爿藻的制备及其去除养殖废水中氮·磷的效果

[目的]探究固定化四爿藻去除养殖废水中氨氮(NH_4~+-N)、亚硝酸氮(NO_2~--N)和活性磷酸盐(PO_4~(3-)-P)的效果。[方法]采用海藻酸钠固定化包埋技术开展了四爿藻固定化培养,探究了藻球直径、藻细胞包埋密度、海藻酸钠浓度及氯化钙浓度等条件对四爿藻固定化培养的影响。同时测定了固定化四爿藻去除养殖水体中NH_4~+-N、NO_2~--N、PO_4~(3-)-P的效果。[结果]四爿藻固定化培养的优化条件为藻球直径为4 mm、藻细胞包埋密度为1.82×10~4个/mL、海藻酸钠质量浓度为10 g/L及氯化钙浓度为20 g/L;在石斑鱼养殖废水中引入固定化四爿藻,试验第3天,NH_4~+-N去除率达98.87%、NO_2~--N去除率达98.33%和PO_4~(3-)-P去除率达83.70%。[结论]采用海藻酸钠固定化包埋技术不影响四爿藻的生理活性;固定化四爿藻应用于净化养殖水环境具有很好的前景。     

2种培养方式下人参不定根生长动态观察及活性物质含量测定

为了解不同培养模式对人参不定根的形态变化及有效物质积累的影响,试验利用显微镜对固体培养与生物反应器培养的人参不定根生长状态进行了观测并统计了培养过程中人参不定根的根长、根数和根粗变化,测定了不同培养模式的人参不定根中的活性物质含量。结果表明:不同培养模式下人参不定根的根长、根粗和根数均随培养天数的增加而增加,但不同时间段的相对生长速率不同,其中,根粗和根数的相对生长速率在固体培养基中培养18～24d时最高,为0.041 0mm/d和0.247 3个/d,根长的相对生长速率在生物反应器中培养20～25d时最高,为0.496 7mm/d。培养40d后2种培养方式下培养的不定根中活性物质含量无明显差异,但生物反应器培养的不定根鲜重和干重分别达到91.86和10.73g/L,固体培养基中不定根鲜重和干重仅为10.38和1.37g/L,表明生物反应器培养更有利于人参不定根生物量的积累,可在短时间内大量获得所需植物材料。     

凡纳滨对虾高位养殖池塘浮游生物群落结构及水质特征

为研究在中国北方凡纳滨对虾Penaeus vannamei海水高位养殖池塘中浮游生物的群落结构和水质特征,采用高位池养殖的常规方法进行了相关试验。结果表明:高位池的平均水温为23.45℃、p H为8.16、盐度为23.1,叶绿素含量在养殖过程中呈现先上升后稳定的趋势;浮游植物种类组成以硅藻、裸藻和绿藻为主,所占比例分别为39.58%、20.83%和18.75%,甲藻、蓝藻和隐藻只占少数;浮游植物密度平均为111×10~6cells/L,生物量平均为22.39 mg/L,密度和生物量均以绿藻和硅藻占优势,浮游植物多样性指数(H)平均为0.46,均匀度指数(J)平均为0.13;浮游动物以桡足类为主,浮游动物密度平均为27.04ind./L,生物量平均为0.629 mg/L,浮游动物多样性指数(H)平均为0.68,均匀度指数(J)平均为0.52;典范对应分析(CCA)显示,影响浮游植物优势种的主要驱动因子为盐度、PO_4~(3-)-P、总氮、总磷、NO_2~--N、NO_3~--N,影响浮游动物优势种的主要驱动因子为盐度、PO_4~(3-)-P、p H、总氮、NO_2~--N和NH_4~+-N。研究表明,凡纳滨对虾高位养殖池中后期水质已处于富营养化状态,浮游生物群落不稳定。     

凡纳滨对虾高位养殖池塘浮游生物群落结构及水质特征

为研究在中国北方凡纳滨对虾Penaeus vannamei海水高位养殖池塘中浮游生物的群落结构和水质特征,采用高位池养殖的常规方法进行了相关试验。结果表明:高位池的平均水温为23.45℃、p H为8.16、盐度为23.1,叶绿素含量在养殖过程中呈现先上升后稳定的趋势;浮游植物种类组成以硅藻、裸藻和绿藻为主,所占比例分别为39.58%、20.83%和18.75%,甲藻、蓝藻和隐藻只占少数;浮游植物密度平均为111×10⁶cells/L,生物量平均为22.39 mg/L,密度和生物量均以绿藻和硅藻占优势,浮游植物多样性指数(H)平均为0.46,均匀度指数(J)平均为0.13;浮游动物以桡足类为主,浮游动物密度平均为27.04ind./L,生物量平均为0.629 mg/L,浮游动物多样性指数(H)平均为0.68,均匀度指数(J)平均为0.52;典范对应分析(CCA)显示,影响浮游植物优势种的主要驱动因子为盐度、PO_46cells/L,生物量平均为22.39 mg/L,密度和生物量均以绿藻和硅藻占优势,浮游植物多样性指数(H)平均为0.46,均匀度指数(J)平均为0.13;浮游动物以桡足类为主,浮游动物密度平均为27.04ind./L,生物量平均为0.629 mg/L,浮游动物多样性指数(H)平均为0.68,均匀度指数(J)平均为0.52;典范对应分析(CCA)显示,影响浮游植物优势种的主要驱动因子为盐度、PO_4^(3-)-P、总氮、总磷、NO_2(3-)-P、总氮、总磷、NO_2^--N、NO_3--N、NO_3^--N,影响浮游动物优势种的主要驱动因子为盐度、PO_4--N,影响浮游动物优势种的主要驱动因子为盐度、PO_4^(3-)-P、p H、总氮、NO_2(3-)-P、p H、总氮、NO_2^--N和NH_4--N和NH_4⁺-N。研究表明,凡纳滨对虾高位养殖池中后期水质已处于富营养化状态,浮游生物群落不稳定。     

氮和磷对红发夫酵母突变株sp12生长和虾青素合成的影响

采用无机培养基,以NaNO3、Na3PO4为氮、磷源培养红发夫酵母。结果表明,红发夫酵母生长对氮的需求量较低,当培养基中NaNO3含量低于10.20 mmol/L（870 mg/L）时,酵母生物量无显著变化,当NaNO3含量高于10.20 mmol/L时,其生物量略有下降 无磷严重抑制红发夫酵母生长,当培养基中Na3PO4含量低于1.22 mmol/L（200 mg/L）时,酵母生物量随Na3PO4含量的增加而增加,且Na3PO4含量为1.22 mmol/L时,酵母生物量最大,当Na3PO4含量高于1.22 mmol/L时,酵母生物量下降 氮、磷对虾青素的合成均有显著影响 当培养基中葡萄糖浓度为10 g/L时,氮、磷的最佳添加量分别为9.06、1.22 mmol/L（770和200 mg/L）,即氮、磷最佳配比为7.5∶1.0（摩尔比）。     

地被银桦试管苗增殖培养研究

地被银桦是杂交品种,无性繁殖对保持地被银桦的品种特性至关重要。本研究以组织培养为繁殖方法,从激素的浓度、种类、大量元素及糖等方面对地被银桦的增殖培养进行了系统的研究。结果表明,6-BA的浓度对增殖苗的高度有显著影响,6-BA和IBA对试管苗的玻璃化比例均有显著影响,NH_4NO_3和KH_2PO_4的浓度也显著影响增殖苗的高度。最适增殖培养基配方为:改良MS培养基(NH_4NO_3412.5 mg/L,KH_2PO_485 mg/L)+6-BA 0.3 mg/L+IBA 0.1 mg/L+糖35 g/L。     

药用植物紫锥菊的组织培养与快速繁殖

以紫锥菊种子萌发的子叶为外植体，进行组织培养试验。确定了紫锥菊快繁体系的最适培养条件：（1）种子发芽培养基：MS＋IAA0．1mg／L＋6-BA 1．0mg／L；（2）愈伤诱导培养基：MS＋6-BA 1．0mg／L；（3）不定芽分化培养基：MS＋NAA 0．2mg／L＋6-BA 2．0mg／L；（4）生根培养基：1／2MS＋NAA 0．2mg／L。     

贯叶连翘的组织培养和金丝桃素的生产

以贯叶连翘种子为材料,对贯叶连翘组培苗进行生根培养,筛选和优化生根培养基,进一步在生物反应器内诱导培养不定根,并研究了蔗糖浓度、铵态氮/硝态氮配比以及MS培养基浓度对不定根中金丝桃素含量积累的影响.结果表明:贯叶连翘在3/4MS+IBA 2.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂8g/L(pH 5.8)培养基上的生根效果最佳;40 g/L的蔗糖有利于金丝桃素的积累,此时不定根中金丝桃素的含量最高、达0.94 mg/g;当铵态氮/硝态氮配比为30/30时,金丝桃素的含量和生产量达到最大,分别为0.98 mg/g和12.41 mg/L;不定根在不同浓度范围的MS培养基中均可生长,金丝桃素在2MS培养基上的生产量最大、为15.70 mg/L.     

影响西洋参不定根组培增殖的几种因素及皂苷生产的研究

为筛选西洋参不定根组培增殖的适宜培养基,研究培养基中生长素IBA和NAA、磷浓度及有机物含量对不定根增殖生长的影响,结果表明,不定根在IBA 5 mg/L中生长良好,MS培养基中固有磷浓度和有机物含量适合于西洋参不定根的生长.为有效生产西洋参皂苷,利用生物反应器进行不定根与细胞的共培养,并与反应器不定根和细胞培养进行比较,发现共培养时获得的不定根生物量（鲜重和干重）与不定根单独培养时无明显差异,共培养的细胞生物量不及细胞单独培养,但共培养的培养物（细胞＋不定根）总生物量大于细胞或不定根单独培养;测定皂苷含量的结果,共培养时反应器中不论是不定根还是细胞,其皂苷含量均高于不定根单独培养的不定根和细胞单独培养的细胞中的含量;皂苷总生产量在共培养时达到26 mg/L,约为不定根和细胞培养的2倍.因此,反应器共培养方法在西洋参皂苷的工业化生产有较高的应用价值.     

"猪-草-鱼"生态循环养殖池塘水体营养盐及浮游植物群落结构研究

"猪-草-鱼"生态种养模式是将猪粪尿经过发酵处理后种植优质高产牧草,再用牧草养鱼的一种生态高效种养模式。以"猪-草-鱼"生态种养模式为研究对象,研究该模式中池塘水体营养盐及浮游植物群落结构变化,监测水体温度(T)、溶解氧(DO)、pH、透明度(TS)、总氮(TN)、氨氮(NH_4~+-N)、硝酸盐(NO_3~--N)、亚硝酸盐(NO_2~--N)、总磷(TP)、磷酸盐(PO_4~(3-)-P)、化学需氧量(COD)、浮游植物群落结构。结果表明,NO_3~--N、PO_4~(3-)-P、pH、DO和TDS是控制"猪-草-鱼"生态种养模式中池塘浮游植物群落结构的主要水环境因子。NH_4~+-N、NO_2~--N、PO_4~(3-)-P含量的最高值分别为0.61、0.03、0.16 mg/L,COD呈逐渐下降趋势,为21.89~32.46 mg/L。养殖前期及中期,蓝藻种群在水体中占绝对优势,分别占83.58%、89.17%;后期蓝藻种群优势显著下降,占52.18%,绿藻占43.80%。养殖前期浮游植物平均丰度为7.78×10~7个/L,中期为7.81×10~7个/L,后期为1.54×10~8个/L。养殖前期浮游植物平均生物量为11.05 mg/L,中期为8.46 mg/L,后期为18.72 mg/L。浮游植物群落多样性指数为1.32~2.63,且浮游植物群落多样性指数整体表现为养殖后期显著高于前期和中期。"猪-草-鱼"生态种养模式对水环境产生的生态效果显著,不会导致水体N、P过量累积,一定程度上抑制水体富营养化,且浮游植物群落多样性指数提高,池塘生态系统更加稳定。     

膜荚黄芪不定根组织培养的研究

[目的]建立黄芪不定根培养的无性繁殖体系。[方法]以膜荚黄芪无菌苗的胚根为外植体,诱导了不定根。将长约1 cm的不定根切段接种于4种培养基(B5、MS、LS和White)以筛选培养基。然后以B5为基本培养基附加不同浓度IBA(1~6 mg/L)、不同种类糖(蔗糖、葡萄糖、果糖和食用白糖)和不同浓度白糖(20~50 g),研究IBA浓度和糖的种类及浓度对黄芪不定根组织培养的影响。[结果]4种培养基中,B5培养基效果最好,切段可分化大量不定根,且生长良好。IBA浓度为2 mg/L时,黄芪不定根生长旺盛。在B5+IBA 2.0 mg/L培养基上,附加30 g/L蔗糖或白糖时不定根生长良好,白糖与蔗糖的效果差异不明显。[结论]在黄芪不定根规模化生产中可用白糖代替培养基中蔗糖,降低培养基成本。     

不同理化因子对黄芩悬浮细胞系的影响

采用植物组织培养手段建立了稳定的黄芩细胞悬浮系,通过正交试验筛选出最佳的MS液体培养基为:NH4+/NO3-30/40 mmol/L,Ca2+3 mmol/L,pH值5.4,蔗糖3%.研究了碳源、肌醇、激素、水解酪蛋白(CH)和水解乳蛋白(LH)对悬浮系中黄苓甙含量的影响.结果表明:复合碳源、较低浓度肌醇对悬浮细胞系中黄芩甙的积累和胞外释放具有促进作用,2.0 mg/L NAA+0.5 mg/L Kt最有利于悬浮系中黄芩甙的积累;水解酪蛋白和水解乳蛋白对黄芩甙的生成没有促进作用,反而起到了一定的抑制效应.     

主要营养成分对甘蔗叶悬浮细胞生长影响的研究

研究了MS培养基的主要营养成分，如不同初始磷酸盐浓度，不同氮源种类，不同氮源总量，不同糖种类及不同初始蔗糖质量浓度对甘蔗叶悬浮细胞生长的影响。结果表明：在MS基本培养其中，当初始磷酸盐浓度为1.25mmol/L，氮源为NH4NO3 KNO3，且总量为30mmol/L，碳源为蔗糖，初始蔗糖质量浓度为30g/L时，甘蔗叶悬浮细胞的生长最佳。     

白色紫锥菊不定根提取工艺对酪氨酸酶活性抑制的影响

为筛选白色紫锥菊不定根提取物抑制酪氨酸酶活性的最佳提取工艺,该试验在不同提取时间、提取温度、提取次数和料液比条件下对不定根进行了提取,并通过调查各提取物对酪氨酸酶活性抑制率,确定各因素适宜水平。根据单因素试验结果进行了正交设计试验,优化了提取条件。结果表明:在提取时间2h、提取温度70℃、提取次数1次、料液比为1∶40(g∶mL)的条件下提取的白色紫锥菊不定根提取物对酪氨酸酶活性的抑制效果最佳,抑制率为57.4%。