高产赖氨酸枯草芽孢杆菌的选育

为提高枯草芽孢杆菌产赖氨酸的能力,本试验拟从10株猪源枯草芽孢杆菌中,初步筛选出一株赖氨酸高产菌株。再以此菌株为出发菌株,采用紫外诱变的方法复筛出高产赖氨酸的突变株。结果发现,初筛得到的菌株YB83,其培养上清液中赖氨酸含量为179.39 mg/L,较LB液体培养基高出22.58%;经过紫外诱变后,得到一株遗传性稳定的突变菌株YB83-U5,其培养上清液中赖氨酸含量为277.49 mg/L,比原始菌株YB83提高了52.97%。     

水产养殖用复合微生物粉剂中菌种的分子生物学鉴定

对两种市售水产养殖用复合微生物粉剂中微生物菌种进行鉴定。利用平板分离技术对粉剂中的微生物进行分离纯化,进行了形态学观察、16S rDNA和26S rDNA序列分析,并构建系统发育树。结果表明,两种微生物粉剂中菌群结构存在一定差异,S1粉剂中鉴定出5株芽孢杆菌和2株酵母菌,分别为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌或索诺拉沙漠芽孢杆菌、葡萄牙棒孢酵母和库德里阿兹威毕赤酵母;S2粉剂中鉴定出3株芽孢杆菌、1株放线菌、2株酵母菌和3株肠球菌,分别为解木糖赖氨酸芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌或索诺拉沙漠芽孢杆菌、芬氏纤维微菌、酿酒酵母、库德里阿兹威毕赤酵母、鹑鸡肠球菌、屎肠球菌或乳酸肠球菌。明确水产养殖用复合微生物粉剂的菌群结构为同类产品的安全性及有效性评估提供理论基础。     

枯草芽孢杆菌固态发酵豆粕产品质量评定

为了研究枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)XZ35株固态发酵豆粕的效果,试验以纯化水和市售枯草芽孢杆菌B1株为对照,在最优工艺条件下固态发酵豆粕,对发酵产品进行大豆抗原蛋白残留率、三氯乙酸可溶性氮(TCA-NSI)、粗蛋白、水分和挥发性盐基氮含量测定。结果表明:枯草芽孢杆菌XZ35株发酵豆粕后抗原蛋白残留率为5.9%,显著低于空白对照组和枯草芽孢杆菌B1株对照组(P0.05);TCA-NSI含量为7.24%,显著高于空白对照组和枯草芽孢杆菌B1株对照组(P0.05);枯草芽孢杆菌XZ35株和B1株发酵豆粕后粗蛋白含量显著高于空白对照组(P0.05),各组水分含量差异不显著(P0.05);挥发性盐基氮含量为30.37 mg/100 g,显著低于空白对照组和枯草芽孢杆菌B1株对照组(P0.05)。说明枯草芽孢杆菌XZ35株在豆粕发酵过程中能够将豆粕中大分子蛋白降解为小分子多肽,同时具有较强的抗原蛋白降解能力,进而提高豆粕蛋白质的消化率和利用率,提高豆粕在饲料中的应用范围和使用价值。     

3株芽孢杆菌对不同饲料组合的消化对比研究

选择3株益生芽孢杆菌,研究其对于玉米-菜粕、玉米-豆粕、玉米-麸皮和玉米-棉粕4种饲料组合的消化效果。研究发现,3株芽孢杆菌对饲料纤维素的降解均不明显,但对半纤维素消化降解明显,半纤维素降解最高可达到23.5%;芽孢杆菌作用后还原糖含量增加显著,处理后还原糖含量最高可达28.2 mg/g;芽孢杆菌对饲料蛋白质分解亦有明显效果。试验结果表明:芽孢杆菌可以促进饲料的消化,芽孢杆菌对饲料的消化效果与饲料组合有关,也与菌株本身有关。     

猪源芽孢杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

从自然生长的健康猪肠道中分离到13株芽孢杆菌,通过生理生化试验初步鉴定其中9株为枯草芽孢杆菌,2株为巨大芽孢杆菌,1株为地衣芽孢杆菌,1株为凝结芽孢杆菌;对这13株芽孢杆菌分别进行了耐酸性试验、耐胆盐试验、体外抑菌试验和动物安全性试验。结果表明,其中1株地衣芽孢杆菌B7株和1株枯草芽孢杆菌B9株均有较强的耐酸、耐胆盐能力,对致病性大肠杆菌具有较好的体外抑制能力,且均安全无毒,可作为动物用益生菌制剂的候选菌种。     

枯草芽孢杆菌固态发酵豆粕效果比较

以豆粕为主要原料,通过测定6株枯草芽孢杆菌固态发酵豆粕的粗蛋白、酸溶蛋白含量,并利用SDS-PAGE对发酵豆粕中的大豆抗原蛋白降解情况进行定性分析,比较枯草芽孢杆菌对豆粕的作用效果,筛选出发酵豆粕优势菌株。试验结果显示,与豆粕相比,6株枯草芽孢杆菌固态发酵豆粕48、72、120 h的粗蛋白和酸溶蛋白含量均有所提高,但提高的程度有所差异;菌株Y6发酵豆粕效果优于其他五株枯草芽孢杆菌,发酵120 h的粗蛋白提高了15.7%,酸溶蛋白含量可达9.85%,抗原完全降解。     

6株猪源芽孢杆菌的分离鉴定及其益生性研究

本研究旨在通过高温处理和常规厌氧菌分离法从健康肥猪粪便中分离芽孢杆菌,并通过培养性状、生化试验、PCR、肠道耐受、抗菌活性和接种试验动物等方法鉴定筛选性状稳定、优良的益生性芽孢杆菌。结果显示,共分离到6株芽孢杆菌,其中1株巨大芽孢杆菌、1株死谷芽孢杆菌、2株解淀粉芽孢杆菌和2株枯草芽孢杆菌;分离菌对多黏菌素和青霉素耐药性较强,对其他12种常用药物较敏感,对致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果较好;4种芽孢杆菌均可在酸性、高胆盐和高温条件下生存,特别是巨大芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌耐受能力较强;分离的芽孢杆菌对小鼠均无致病性,其中巨大芽孢杆菌和死谷芽孢杆菌有较明显的促进试验动物生长的作用。结果提示,巨大芽孢杆菌和死谷芽孢杆菌可作为益生性芽孢杆菌的初步选择。     

健康反刍动物源饲用芽孢杆菌的分离筛选和鉴定

为筛选到性能良好的芽孢杆菌,笔者在呼和浩特郊区的几个健康牛羊养殖场采集了粪样、水样等28份样品进行芽孢杆菌资源调查。经分离和纯化培养,共分离出疑似芽孢杆菌35株,并通过16S r RNA及17项生化鉴定对其作进一步的确认和属种鉴定。经16S r RNA分析,有15株为芽孢杆菌属;再经染色镜检,生化试验结果与《常见细菌系统鉴定手册》对比,有枯草芽孢杆菌4株(占26.7%)、蜡状芽孢杆菌5株(占33.3%)、泛酸芽孢杆菌3株(占20.0%)、环状芽孢杆菌2株(占13.3%)、球形芽孢杆菌1株(占6.7%)。说明呼和浩特市郊区健康牛羊养殖场芽孢杆菌以枯草芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌为主,占60%。     

6株芽孢杆菌的生物学特性比较研究

以实验室分离保存的6株芽孢杆菌为材料,对其主要生物学特性进行了研究,包括产酶活力,对NaCl、牛胆盐、人工胃液和人工肠液的耐受性及对抗生素的敏感性。结果显示,枯草芽孢杆菌1、凝结芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌均能产生较高活性的中性蛋白酶和淀粉酶;2株枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌能耐较高浓度的NaCl;枯草芽孢杆菌2、凝结、纳豆和蜡样芽孢杆菌对牛胆盐的耐受性较强;除地衣芽孢杆菌外,其他5株芽孢杆菌对胃液和肠液的耐受性较好;6株芽孢杆菌均对常用饲用抗生素敏感。结果表明,枯草1、凝结、蜡样芽孢杆菌是优良的候选益生菌菌株。     

一株凝结芽孢杆菌的生物学特性及其有机酸相关研究

为了研究凝结芽孢杆菌的生物学特性及其产酸性能分析,试验对一株凝结芽孢杆菌进行生理生化和16S r DNA鉴定,通过耐酸、耐胆盐、耐高温及抗生素敏感性进行抗逆性检测,并采用高效液相色谱法针对发酵液中的有机酸含量进行测定。结果表明:此株菌是一株凝结芽孢杆菌,其营养体对抗生素敏感,具有一定的耐酸耐胆盐能力,同时耐高温。此株菌可产生多种有机酸,乙酸含量最高由24小时的794.70μg/mL上升到36小时的1 372.58μg/mL;琥珀酸在24小时的含量为519.02μg/mL,但36小时时降至407.62μg/mL;戊酸产量最低;其他酸则处于中间值。说明此株菌为抗逆性强、营养体对抗生素敏感且产酸能力强的凝结芽孢杆菌。     

牦牛酥油与普通奶油中脂肪酸组成与含量的比较

采用气相色谱法对牦牛酥油和普通奶油进行测试,分析其脂肪酸含量和组成,尤其是共轭亚油酸(CLA).结果表明:酥油中硬脂酸含量(83.23 g/kg)高于普通奶油(57.15 g/kg),棕榈酸含量(155.73 g/kg)比普通奶油(178.26g/kg)低;酥油中反式油酸(C18:1,t11)的含量是普通奶油的近8倍,酥油中总CLA含量是普通奶油的2倍多,尤其是C18:2,c9t11CLA异构体,在普通奶油中含量为3.38 g/kg,在酥油中为9.86 g/kg,是普通奶油的近3倍.相对于普通牛乳来说,牦牛乳具有更高的营养价值.     

Assessment of chromium tripicolinate supplementation and dietary protein level on growth,carcass, and blood criteria in growing pigs

This study was conducted to evaluate potential interactive effects of supplemental Cr and dietary protein levels in growing pigs. Thirty-six individually penned barrows, 22 to 63 kg, were used in a 2 x 3 factorial arrangement of supplemental Cr (0 or 200 ppb from chromium tripicolinate) and protein level (76, 83, or 90% of lysine requirement). A corn-soybean meal basal diet was designed to supply all mineral and vitamin needs, 90% of the estimated metabolizable energy need, and 76% of the estimated protein need at 70% of ad libitum feed intake. Additional protein to 83 or 90% of the lysine requirement was provided by a soy protein isolate supplement. Growth data were collected for a 50-d period, and pigs were killed at a mean of 63 kg BW. Increasing lysine levels linearly (P < 0.01) increased ADG and liver weight. Lysine level had a quadratic effect on 10th rib backfat thickness (P < 0.05) and cooler shrink (P < 0.01) with the highest responses at the 83% lysine level. Increasing lysine level linearly decreased (P < 0.05) carcass content of ash and lipid and quadratically increased the carcass water content (P < 0.01). Carcass accretion rate showed a linear increase for protein (P < 0.01) and water accretion (P < 0.01). Dry matter composition of the longissimus muscle showed linear increases of ash (P < 0.05) and protein (P < 0.01) and a linear decrease of lipid content (P < 0.01) resulting in a linear increase (P < 0.05) of the protein to lipid ratio based on the increasing lysine levels. Pre-feeding insulin levels were increased (P < 0.05) with increasing level of lysine. One hour post-feeding, a quadratic lysine response for plasma glucose (P < 0.05) was observed with the lowest concentration at 83% lysine. Cr addition increased 10th rib backfat thickness (P < 0.10). There was no Cr x lysine level interaction (P > 0.10) observed for any of the growth or carcass traits. Plasma glucose concentrations pre-feeding were lower for Cr-supplemented pigs (P < 0.01). As expected, increasing protein levels in protein-deficient diets increased protein accretion while decreasing lipid accretion in 22 to 63 kg growing pigs; however, these effects were more clearly seen in the longissimus muscle than in the entire carcass. Supplementation of Cr exerted only minor effects with few Cr x lysine interactions observed in this study.     

饲用高产纤维素酶菌株的诱变选育

以里氏木霉40359为出发菌株,对其进行紫外线、亚硝酸钠、硫酸二乙酯诱变,选育纤维素酶高产菌株。经过平皿初筛和摇瓶复筛,得到一株稳定性好的菌株YB40359,FPA酶活力达到57.31 U/mL,较原始菌株提高了87.12%;CMC酶活达到142.60 U/mL,较原始菌株提高了58.66%,且遗传稳定性好,可以用作饲用纤维素酶的降解菌。     

中国禽(番鸭)呼肠孤病毒YB株S4基因序列分析

应用非免疫番鸭胚增殖中国禽(番鸭)呼肠孤病毒YB分离株,用LSTRIAZOL提取病毒RNA,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增中国禽(番鸭)呼肠孤病毒YB分离株S4基因节段cDNA.将S4cDNA克隆到PMDl8-T载体上,并进行了鉴定和核苷酸序列测定.序列分析结果,克隆的S4cDNA共1 124bp,包括非编码区和完整的阅读框架.分子进化系统分析表明该毒株与禽呼肠孤病毒(鸡呼肠孤病毒)的亲缘关系较远,DRV-YB与DRV-89330同缘率为93.3%.     

Screening and Identification of Protease-producing Bacillus amyloliquefaciens from Pig's Intestines and the Preliminary Study of Its Enzymatic Properties

A Bacillus strains,MY-6 strain which secreted high amount of protease was isolated from healthy pig's intestines,and it was identified as Bacillus amyloliquefaciens by the methods of morphological observation, biochemical tests,16S rDNA sequence amplification and comparison, biolog identification. In order to get an initial understanding of the enzymatic properties of its protease, the dynamic relationship between protease activity and bacterial life cycle, effects of pH,temperature,metal ions and inhibitors on protease activity,and the protease hydrolysis of different substrates were investigated. The results showed that,the protease synthesis of MY-6 strain was synchronized with its spore formation which began in the early stage of the exponential growth phase. The optimum conditions for the protease was 40℃ and pH 7.0,Ca²⁺ and Mn²⁺ had a intensive effects on the protease activity, PMSF could completely inhibit the activity of protease, indicating that the protease was a serine protease.The content of TCA soluble peptides for protein hydrolyzate fish protein, soybean protein, corn protein and casein was 0.83,0.67,0.58 and 0.38 μmol/g,respectively. In conclusion,Bacillus amyloliquefaciens MY-6 strain could be used as an initial selection of probiotic Bacillus to improve protein digestion.     

猪肠道中产蛋白酶解淀粉芽孢杆菌的筛选、鉴定及其酶学性质的初步研究

试验从健康猪肠道中筛选得到一株高产蛋白酶的芽孢杆菌MY-6菌株,通过形态学观察、生理生化试验和糖醇发酵试验、16S rDNA序列扩增与比对、Biolog鉴定等方法鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌。并研究了蛋白酶活力与细菌生活周期的动态关系,pH、温度、金属离子和蛋白酶抑制剂对蛋白酶活力的影响及蛋白酶对不同底物的水解性能。结果显示,MY-6菌株蛋白酶的合成与其芽孢形成同步,均开始于对数生长期的前期,该菌株所产蛋白酶的最适作用条件为：40℃、pH 7.0,Ca²⁺和Mn²⁺对蛋白酶活力有明显的促进作用,PMSF能够完全抑制该蛋白酶的活力,说明该蛋白酶属丝氨酸蛋白酶,蛋白酶对鱼粉蛋白、大豆蛋白、玉米蛋白、酪蛋白的酶解物TCA可溶性肽含量分别为0.83、0.67、0.58和0.38 μmol/g。结果提示,解淀粉芽孢杆菌MY-6菌株可作为改善蛋白质消化的益生性芽孢杆菌的初步选择。     

一株芽孢杆菌的分离鉴定及其益生潜质分析

 从健康肉鸡的粪便中分离出一株BF3芽孢杆菌,经培养特征、形态观察、生理生化试验以及16SrDNA序列分析相似度为99%,确定该菌株为枯草芽孢杆菌,对该株芽孢杆菌对肠道致病菌的拮抗作用进行研究。结果表明BF3菌株在培养过程中,可以抑制鸡白痢沙门氏菌和鸡大肠杆菌的生长。拮抗作用的强弱与芽孢杆菌和致病菌的接种时间有关。先接种芽孢杆菌后接种致病菌,拮抗作用最强;芽孢杆菌和致病菌同时接种次之;先接种致病菌后接种芽孢杆菌,拮抗作用最弱。并且BF3菌株代谢产物对鸡白痢沙门氏菌和鸡大肠杆菌具有非常明显的拮抗作用。     

高蛋白酵母水解物生产菌株的筛选研究

为筛选生产高蛋白酵母水解物的酵母菌株,试验通过对多株酿酒酵母摇瓶培养,筛选出6株酵母菌株,其菌体蛋白质含量超过58%;通过二级发酵筛选培养(50 L种子罐、30 L发酵罐)、自溶酶解、口感测试等方法评估,表明菌株1的发酵过程数据(酒精消化、糖蜜转化率、氮源利用率等)和营养成分(蛋白质、赖氨酸含量)最佳,可作为生产高蛋白酵母水解物(蛋白质≥55%)的生产菌株。     

无机磷细菌的筛选及其固体发酵研究

从实验室保存的83株芽胞杆菌中初筛出11株具有解无机磷能力的菌株,通过平板法进行初筛,根据溶磷圈直径和菌落直径比值大小筛选出溶磷圈直径和菌落直径比值较大的菌株3株,进一步通过液体摇瓶培养复筛出1株分解无机磷能力最强的菌株ZP。对筛选到的3株解无机磷能力强的菌株进行固体发酵培养,研究不同培养基配方及发酵时间与菌株解磷能力之间的关系,以期为生产解磷菌制剂提供理论依据。