芫荽花叶病病原病毒鉴定

 从芫荽(Coriandrum Sativum L.)花叶病株上分离到一病毒分离物(CMV-Co),汁液摩擦接种和桃蚜(Myzus Persicea)均能传毒。人工摩擦接种可侵染5科21种植物,在黄瓜、心叶烟等植物上引起系统花叶;在苋色藜、昆诺阿藜、豇豆等接种叶片上引起局部枯斑。此病毒的钝化温度为55～60℃,稀释限点为10^-3～10^-4,体外存活期2～3天。部分提纯的病毒最大紫外吸收为258nm,最小吸收为238nm,表现为典型的核蛋白吸收,A260/A280=1.26.SDS-不连续梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳解离病毒其外壳蛋白亚基为一条多肽链,分子量约为25500道尔顿。琼脂免疫双扩散试验表明,CMV-Co与黄瓜花叶病毒有明显的血清学反应:用1.5%醋酸双氧铀负染,电镜观察病毒粒子球形(正二十面体),直径为28～30nm.根据上述特征,CMV-Co是黄瓜花叶病毒的一个株系。     

黑皮果蔗花叶病病原鉴定

在南宁市郊采集到l份表现褪绿条纹、花叶的黑皮果蔗样品(NN-Ba2),经差速离心和PEG二次沉淀法提取病毒粗汁液,在电镜下观察到略弯曲的线状病毒粒子;DAC-ELISA检测显示NN-Ba2与甘蔗花叶病毒多克隆抗体和单克隆抗体呈阳性反应;根据SCMV和SrMV CP基因分别设计合成特异引物,利用RT-PCR对NN-Ba2进行分子鉴定,扩增出大小约900 bp的预期片段,健康对照未扩增到任何片段;NN-Ba2扩增片段经克隆后测序得到719个有效核苷酸,测序结果在DDBJ上用BLAST进行同源性分析,结果显示该序列与已报道的SCMV广东、云南、广西等地分离物对应的核苷酸序列同源性为97.36%~97.77%,根据马铃薯Y病毒科(Potyviridae)病毒种和株系的划分标准,NN-Ba2鉴定为SCMV.田间采集的另外10份表现花叶症状的果蔗样品经ELISA和RT-PCR检测,证明也感染了SCMV.     

黑皮果蔗花叶病病原鉴定

在南宁市郊采集到1份表现褪绿条纹、花叶的黑皮果蔗样品（NN—Ba2）,经差速离心和PEG二次沉淀法提取病毒粗汁液,在电镜下观察到略弯曲的线状病毒粒子;DAC—ELISA检测显示NN—Ba2与甘蔗花叶病毒多克隆抗体和单克隆抗体呈阳性反应;根据SCMV和SrMVcP基因分别设计合成特异引物,利用RT—PCR对NN—Ba2进行分子鉴定,扩增出大小约900bp的预期片段,健康对照未扩增到任何片段;NN—Ba2扩增片段经克隆后测序得到719个有效核苷酸,测序结果在DDBJ上用BLAST进行同源性分析,结果显示该序列与已报道的SCMV广东、云南、广西等地分离物对应的核苷酸序列同源性为97．36％～97．77％,根据马铃薯Y病毒科（Potyviridae）病毒种和株系的划分标准,NN—Ba2鉴定为SCMV。田间采集的另外10份表现花叶症状的果蔗样品经ELISA和RT—PCR检测,证明也感染了SCMV。     

云南香料烟害虫种类及发生规律研究

通过6a系统调查,在云南省香料烟主产区烟田内共发现7目31科88种昆虫和野蛞蝓、灰巴蜗牛2种软体动物危害云南冬春香料烟。其中重要害虫是烟蚜（Myzus persicae Suizer）、棉铃虫（Heliothis arrnigera Hubner）、烟草夜蛾（Heliothis assuha Guenee）、烟草盲蝽[Cyrtopeltis tenuis（Reuter）]、野蛞蝓（Agriolimax agresfis Linnaeus）、小地老虎（Agrotis ypsilon Rottemberg）、东方蛄蝼（G．orlentalis Burmeister）、小长蝽（Nysius ericae（Schilling）]等7种。烟蚜、野蛞蝓、小地老虎均为香料烟和烤烟上的重要害虫,在发生危害时期上较一致。棉铃虫、烟草夜蛾在香料烟上危害损失较大．而在烤烟上危害较轻。东方蝼蛄和小长蝽是香料烟上的主要害虫,在烤烟上发生较少,烟草盲蝽和金龟子在香料烟上发生较少．却又是烤烟的主要害虫。     

茄子上烟草花叶病毒的分离与鉴定

１９９１年在沈阳地区茄子花叶病病株上分离到ＳＹ—ＩＳ分离物．对该分离物进行生物学鉴定、血清学检测及多聚酶链反应（ＰＣＲ）测定，确定引起沈阳地区茄子花叶病的毒原种类为烟草花叶病毒（Ｔｏｂａｃｃｏｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ，ＴＭＶ）的一个株系．此为国内茄子花叶病新的毒原种类。     

红掌花叶病病原鉴定及检测方法的建立

以红掌为材料,利用RT-PCR方法鉴定出红掌花叶病的一种病原--芋花叶病毒（Dasheen mosaic virus,DMV）,并建立了该病毒的RT-PCR检测方法.依据该方法,将从0.1 g染病组织中提取的总RNA稀释500倍,仍能从中检测出DMV的存在,说明该方法的灵敏度高.该检测方法的建立,为红掌栽培,尤其是工厂化生产红掌无毒种苗提供了技术支持.     

歙县香料烟调制技术

人分析比较了歙县香料为国采用晒制法与采用先景后晒法的调制效果，认为歙县香料烟的 制应以晒制为主，并对晒制要求的采收成熟度，塑料薄膜大棚晒制，中午遮阴晒制，晒制场地串 烟密度等几个技术问题进行了探讨。     

杭州郊区菜豆花叶病病原的分子鉴定

菜豆黄花叶病毒(bean yellow mosaic virus,BYMV)是菜豆病毒病的一个重要病原,广泛分布于世界各地.该病毒粒子呈线状,通过蚜虫以非持久方式进行传播,也可通过机械传播.BYMV具有马铃薯Y病毒属(genus potyvirus)成员共有的基因组学特性.目前已对多个BYMV分离物基因组全序列或部分序列进行了测定[1～5],其RNA由9 547个核苷酸组成,编码一个由3 056个氨基酸组成的聚合蛋白,此蛋白经裂解产生10个功能蛋白,其中外壳蛋白(CP)由266个氨基酸组成,包含1个天冬氨酸-丙氨酸-氨基乙酸(DAG)序基[1].这个序基是马铃薯Y病毒属成员的一个特征,被认为与蚜虫传播有关,而辅助组分蛋白酶(HC)也被认为与蚜虫传播有关[6,7].与其他马铃薯Y病毒属成员类似,BYMV的3'末端包括了非编码区(3'-UTR),含Poly(A)尾[1].最近我们在浙江杭州郊区发现了菜豆花叶病毒病,本文对其病原作分子鉴定.     

云南香料烟害虫种类及发生规律研究

通过6 a系统调查,在云南省香料烟主产区烟田内共发现7目31科88种昆虫和野蛞蝓、灰巴蜗牛2种软体动物危害云南冬春香料烟.其中重要害虫是烟蚜(Myzus persicae Sulzer)、棉铃虫(Heliothis armigera Hübner)、烟草夜蛾(Heliothis assulta Guenèe)、烟草盲蝽[Cyrtopeltis tenuis (Reuter)]、野蛞蝓(Agriolimax agresfis Linnaeus)、小地老虎(Agrotis ypsilon Rottemberg)、东方蛄蝼(G.orientalis Burmeister)、小长蝽[Nysius ericae(Schilling)]等7种.烟蚜、野蛞蝓、小地老虎均为香料烟和烤烟上的重要害虫,在发生危害时期上较一致.棉铃虫、烟草夜蛾在香料烟上危害损失较大,而在烤烟上危害较轻.东方蝼蛄和小长蝽是香料烟上的主要害虫,在烤烟上发生较少,烟草盲蝽和金龟子在香料烟上发生较少,却又是烤烟的主要害虫.     

香料烟品种在云南产区的适应性分析

香料烟品种区域试验结果表明:①在保山怒江流域干热河谷香料烟产区,BS1号和BS4号表现较好,可以推广种植;克撒锡表现较好,应继续作为主栽品种种植;伊兹密尔表现尚好,应继续进行试验研究;SAM、卡巴库拉克和希腊1号等表现较差,不适宜在保山产区种植。②在临沧孟定等温湿度较高的香料烟产区,沙姆逊表现较好,可以推广种植;伊兹密尔和BS1号表现居中,有待进一步试验研究;卡拉巴格拉和杰尼克表现较差,不适宜推广种植。③在临沧云县澜沧江流域干热河谷产区,继续以克撒锡和柯玛蒂尼为主栽品种,吃味型品种SAM作为备用种,应继续对BS1号和伊兹密尔品种进行栽培调制技术研究。     

云南香料烟曲叶病发生流行特点

对香料烟曲叶病发生危害情况进行了全面的调查,结合传播介体烟粉虱发生流行及中间寄主植物的调查,研究了不同育苗移栽时期、不同品种、不同育苗方式、不同海拔、不同育苗环境对香料烟曲叶病发生流行的影响,基本掌握了香料烟曲叶病发生流行特点。     

构建云南省香料烟产业科技公共服务平台的思路及应用前景

根据云南省香料烟产业发展的现状及存在问题,指出构建云南省香料烟产业科技公共服务平台的必要性,并简要阐述了香料烟产业科技公共服务服务平台的建设思路及应用前景.     

几种药剂防治烟草花叶病毒病田间试验

2005~2006年在广西靖西县进行几种药剂防治烟草花叶病毒病田间对比试验,两年试验结果显示,第3次药后10d 4%嘧肽霉素250倍对烟草花叶病毒病的防效最好,两年的防效分别为58.54%和48.93%,与对照药剂2%菌克毒克250倍的防效相当;其他几种供试药剂对烟草花叶病毒病也有一定的防效,第3次药后10d的防效均在40%以上。田间试验结果表明,4%嘧肽霉素、2%菌克毒克、植物基因活化剂、比施壮和3.95%病毒必克Ⅱ号对烟草花叶病毒病均有较好的防治效果,均可作为防治烟草花叶病毒病的一项辅助措施在生产中轮换使用。     

不同品种(系)烟草普通花叶病(TMV)的抗病性鉴定

【目的】筛选地方性优质抗烟草普通花叶病(TMV)烟草种质,为湘中北烤烟抗TMV育种提供优良的种质资源。【方法】采用苗期温室病圃人工接种诱发方法结合大田病圃鉴定,以Coker176为抗病对照、革新3号为中抗对照、G140为感病对照,对9625、金星6007、小黄金0019、401-2、小黄金1025、NGLAUCA、延烟2号等18个烤烟品种(系)进行TMV抗病性鉴定。【结果】在供试品种(系)中,筛选出抗病品种(系)2个,分别为T61和9625,占供试品种(系)总数的11.1%;中抗品种5个,分别为金星6007、03-4-3、胎里黄1061、VESTA33和云烟98,占27.8%;感病品种(系)11个,分别为小黄金0019、401-2、311、小黄金1025、NGLAUCA、延烟2号、大白筋0522、沪金3号、大叶永烟、长脖黄和NC95,占61.1%。【结论】筛选出T61和9625两个抗TMV烤烟品种,可作为湘中北地区抗TMV育种的重要种质资源;同时可在湘中北地区进行T61和9625的示范性推广种植。     

金针菇中一种抗病毒蛋白的纯化及其抗烟草花叶病毒特性

通过DEAE-SepharoseFF离子交换层析、Superdex75凝胶层析和高效液相色谱,从金针菇中获得抗烟草花叶病毒蛋白Zb,经SDS-PAGE确定该蛋白相对分子质量为30ku.采用半叶法在心叶烟上检测抗烟草花叶病毒活性,发现该蛋白抑制中质量浓度为4.4μg·mL-1.     

广州市郊及其邻近地区辣椒CMV和TMV的鉴定

根据对广州市郊及其邻近地区辣椒病毒病的田间调查、寄主范围和症状特点、血清学反应以及RT-PCR的试验结果，证实了黄瓜花叶病毒(CMV)是广州市郊及其邻近地区辣椒病毒病的主要毒原之一；通过生物学和血清学方法，鉴定了烟草花叶病毒(TMV)是另一主要毒原。在采集的病样中，根据鉴别在寄主上的症状特点，主要存在两种类型的分离物，分别称为分离物Ⅰ和分离物Ⅱ。分离物Ⅰ在辣椒、西葫芦、三生烟、普通烟、心叶烟、曼陀罗等寄主植物上引起花叶等症状，在苋色藜、昆诺阿藜上产生局部枯斑，不侵染千日红，由此可初步鉴定为CMV；从间接ELISA和RT—PCR的检测结果也可判断分离物Ⅰ是CMV，其检出率为36．67％。分离物Ⅱ在辣椒、普通烟上产生花叶症状，在心叶烟、曼陀罗、千日红、三生烟、苋色藜和昆诺阿藜等寄主植物上产生局部枯斑，而不侵染西葫芦，由此可初步鉴定其为TMV；间接ELISA检测结果表明，分离物Ⅱ是TMV，其检出率为43．33％。另外，TMV在田间发生率明显高于CMV。     

辽宁省辣椒花叶病毒分离鉴定

在辽宁省主要蔬菜区获得辣椒花叶病毒两个分离物,一为烟草叶病毒辣椒分离株(TMV—P),其表现黄斑驳花叶症,病毒粒子呈长杆状,稀释限点10~(-6);致死温度97℃;体外存活期为10天以上,另一为黄瓜花叶病毒辣椒分熟株(CMV—P),病毒粒子球状,稀释限点1:3000,致死温度60～65℃。体外存活期3～4天。     

番茄花叶病毒移动蛋白基因转化烟草及在转基因烟草中的表达

从提纯病毒抽提基因组RNA，并通过RT－PCR扩增番茄花叶病毒（ToMV)移动蛋白（MP）基因。经克隆测序后插入植物表达载体PBI121的35S启动子下游，通过PCR及酶切筛选分别获取正、反向插入的克隆，通过三亲交配导入农杆菌，叶盘转化法转化普通烟草。卡那霉素筛选获得一系列抗性小苗，对其进行PCR检测，Southern、Northern点杂交，Western-blot检测，获得能正义、反义表达ToMV MP基因的转基因植株。