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布鲁氏菌PCR快速检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
布鲁氏菌病(简称布病)是重要的人兽共患传染病之一,它危害严重、流行广,每年因布病所造成的经济损失巨大,而且近十几年来布病又有上升的趋势. 相似文献
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PCR检测犬腺病毒方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
利用人工合成的两条引物,对病犬肝脏和细胞培养物冻融上清中的1、2型犬腺病毒DNA进行多聚酶链式反应(PCR)检测;再将扩增产物进行同位素标记,与纯化病毒DNA进行打点杂交。扩增产物经电泳分析结果表明,其大小与设计的引物间的序列大小基本一致;扩增产物经标记后只与犬腺病毒DNA发生杂交反应,表明其为犬腺病毒特异性核酸片段。 相似文献
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应用PCR检测布鲁氏菌病的可行性试验 总被引:2,自引:0,他引:2
在实验室条件下对布鲁氏菌的检测通常由细菌学和免疫学试验作出诊断。传统的细菌学诊断技术虽然可靠 ,但是很费时而且处理培养物必须相当谨慎且极易传染给人。其他试验如补体结合试验 ( CF)和 ELISA虽然已经开始普及 ,但其特异性和敏感性不高。聚合酶链式反应 ( PCR)不仅方便、高效 ,而且特异性很强 ,甚至可以区分感染动物和免疫接种动物。我单位在配备了 PCR试验相关仪器设备后 ,进行了 PCR检测布鲁氏菌可行性试验。1 材料与方法1 .1 引物设计 首先从 NCBI基因数据库网站查找 Brucella abortus 1 6S ribosomal基因序列 ,约1 43… 相似文献
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作者用Corbel等介绍的犬种布鲁氏菌(B.Canis)试管凝集和虎红平板凝集试验方法,在甲市和乙县对303只家犬进行检测,试剂由中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所提供。发现血清阳性犬随即剖杀,取脏器标本接种于布氏琼脂培养基(美国产)检菌。少数阳性犬的脏器标本接种于豚鼠,30天后剖杀作病菌分离培养。结果发现血清阳性犬18只,阳性率为5.90%。甲市乙县,犬的性别之间的阳性率,均无统计学差异。在检菌中分离到B.Canis菌7株,各种标本的分离率由高至低依次为:脾(6/7)、肝(5/7)、骨髓(5/7)、鼠蹊部和肠系膜淋巴结(3/6)、后腹壁淋巴结(3/6)、子宫和腹水(1/3)。凡血清凝集反应滴度≥1:160的犬,均分离到病原菌。对7株B.Canis菌鉴定表明:该菌对硫堇和复红的敏感性有较大差别。本文首次在××省分离到B.Canis菌,证实在本省存在该菌疫源地。 相似文献
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猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测方法的建立 总被引:2,自引:4,他引:2
通过条件优化,以定量的10倍系列稀释质粒pMD-ORF2(含PCV2-ORF2全基因)为标准品,进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了猪圆环病毒2型(PCV2)的荧光定量PCR检测方法。该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μL,线性范围为109~100,达10个数量级;对起始浓度为1.0×106、1.0×105、1.0×104拷贝/μL的标准品的最终实际测得值分别为1.000×106、0.935×105、0.987×104拷贝/μL,变异系数分别为2.527%、2.067%、2.092%。该方法的检测灵敏度与套式PCR(nPCR)相当,甚而高于常规PCR。 相似文献
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猪链球菌2型LUX荧光PCR检测方法的建立 总被引:1,自引:1,他引:0
猪链球菌2型是一种严重的人兽共患病病原,为满足猪链球菌2型快速检测的需要,本研究根据猪链球菌2型Cps2J保守区设计LUX引物,首次利用LUX PCR方法对猪链球菌2型进行检测,并进行了敏感性和特异性试验及模拟样品检测试验。结果显示,本研究建立的猪链球菌LUX 荧光PCR检测方法具有较好的敏感性和特异性,检测质粒样品的敏感性为10拷贝,检测模拟样品敏感性为102拷贝,与无乳链球菌、巴氏杆菌、粪链球菌、马链球菌兽疫亚种、沙门氏菌等无交叉反应。该方法的建立为猪链球菌2型的快速检测提供了新的途径。 相似文献
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副猪嗜血杆菌PCR检测方法的建立与初步应用 总被引:3,自引:0,他引:3
根据副猪嗜血杆菌16 S rRNA基因设计了一对引物,通过最佳条件摸索扩增出大小为821 bp的特异目的基因片段,建立了快速检测副猪嗜血杆茵的PCR方法,该方法最低检出量达10-3 ng,且对大肠埃希茵、金黄色葡萄球菌、传染性胸膜肺炎放线杆菌和巴氏杆茵等均无交叉反应.用该PCR方法从门诊送检的病料中检测出4株副猪嗜血杆菌,并对分离株SH0854P的PCR扩增产物进行测序与对比分析,其与已发表的GenBank中的相关菌株的同源性为97.3%~100%. 相似文献
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通过克隆2型猪圆环病毒(PCV2)的开放阅读框2(0RF2)基因编码其核衣壳蛋白(Cap)的一段靶序列,构建重组质粒作为标准阳性模板.根据GenBank中的靶序列设计一对引物和一条TaqMan探针.对PCR反应条件优化后,对构建的标准阳性模板定量,然后1 0×倍比稀释进行荧光定量PCR(qPCR)扩增并制作标准曲线,初步建立了PCV2检测的qPCR方法.结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0×102拷贝/μ L,线性范围为101 ~ 109,达9个数量级,并且具有很好的特异性.对起始浓度为1.0×108、1.0× 106、1.0×104拷贝/μL的标准品的最终实际测得CT均值分别为12.77、19.72和26.89;变异系数分别为0.25%、0.10%和0.13%,均小于1%,说明此方法具有良好的准确性和重复性. 相似文献
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猪德尔塔冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
根据GenBank登录的猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)毒株序列设计特异性引物,建立了检测PDCoV的实时荧光PCR方法。该方法在标准品浓度2.49×10~8~2.49×10~2 copies/μL范围内线性关系良好;特异性试验显示,其他几种常见猪病病毒未见典型扩增曲线;敏感性试验显示,最低检测下限为24.9 copies/μL;重复性试验显示,批内和批间变异系数小于3%。用该方法检测62份猪腹泻粪便样品,相比常规PCR方法,前者的检出率更高;两种方法检测1 168份进境活猪粪便拭子样品,结果均为阴性。结果表明,本研究所建立的方法适用于国内猪场的PDCoV的检测和进境活猪的监控检测,也可作为PDCoV的诊断及分子流行病学调查的技术手段。 相似文献
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为了对猪源产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)的4种主要菌毛(K88、K99、F41和987p)进行快速检测和分型,建立了检测4种菌毛的多重PCR方法。首先设计合成4对4种菌毛特异性的引物,然后用4种菌毛参考ETEC菌株优化了多重PCR方法。该方法对K88、K99、F41和987p 4种菌毛的扩增产物分别为201,314,380和459bp。对4种扩增产物分别进行酶切鉴定,结果均得到与预期一致的2个片段。对各个参考菌株不同组合的检测结果为100%符合。结果表明,该多重PCR方法具有很好的特异性和敏感性,可用于ETEC性腹泻的辅助诊断及ETEC菌毛抗原分型检测。 相似文献