致病性大肠埃希菌对头孢噻呋的耐药性研究

[目的]以头孢噻呋为底物将大肠埃希菌标准菌株诱导为耐药菌株,研究诱导的耐药菌株对头孢噻呋产生耐药性的机制。[方法]用亚抑菌浓度法对标准菌株C83907和C83845进行诱导,诱导10代后用双纸片法和PCR扩增法,进行超广谱β-内酰胺酶（Extendspectrumβ-lactamses,ESBLs）检测;用试管2倍稀释法测定头孢噻呋对产ESBLs菌株的最小抑菌浓度值;对产生ESBLs的耐药菌株,用试管2倍稀释法测定了头孢噻呋与他唑巴坦钠以不同配比对产生ESBLs大肠埃希菌的最小抑菌浓度。[结果]诱导15代后,头孢噻呋对诱导菌的MIC值8～10μg/ml,且均检测出ESBLs;头孢噻呋与他唑巴坦钠质量比（1∶1～8∶1）联合使用对产生ESBLs的大肠埃希菌的最小抑菌浓度较头孢噻呋单独使用降低20～22倍。[结论]致病性大肠埃希菌对头孢噻呋产生耐药性的主要机制是产生了ESBLs。     

头孢噻呋混悬剂体外抗菌活性及抗生素后效应研究

【目的】评价头孢噻呋混悬剂对兽医临床常见的3种标准菌株的体外抗菌活性及抗生素后效应。【方法】以试管二倍稀释法对3种标准菌株进行最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的测定;采用菌落计数法绘制3种标准菌株的时间-杀菌曲线(KCs);采用平板计数法测定了头孢噻呋混悬剂对3种标准菌株的抗生素后效应(post-antibiotic effect,PAE)。【结果】头孢噻呋混悬剂对大肠杆菌、放线杆菌及猪兽疫链球菌的MIC值分别为:0.076、0.304、0.00475μg·mL-1;MBC值分别为:0.61、0.304、0.00475μg·mL-1;头孢噻呋混悬剂对放线杆菌的杀菌速率最快,对链球菌次之;头孢噻呋混悬剂对大肠杆菌PAE较短,呈现非浓度依赖性,对放线杆菌的PAE较长,呈明显的浓度依赖性,而对猪兽疫链球菌呈现部分浓度依赖性。【结论】头孢噻呋混悬剂具有强效、速效、持效的杀菌作用,可广泛应用于兽医临床。     

复配头孢噻呋对大肠杆菌的药敏试验

试验用3株大肠杆菌标准株和2株地方分离株,选择氯霉素、乳酸环丙沙星、利福平、磺胺-6-甲氧嘧啶钠、氟苯尼考、头孢噻呋和抗菌增效剂舒巴坦钠、TMP进行药敏试验,比较几种药物单一或与增效剂合用对大肠杆菌的体外抑菌效果。试验结果表明:(1)大肠杆菌对头孢噻呋均无耐药性,其它的药物不同程度耐药;(2)头孢噻呋与舒巴坦或TMP复配体外抑菌效果明显,3﹕1配比抑菌效果最好,表明头孢噻呋与舒巴坦或TMP复配具有增效作用,舒巴坦的增效作用优于TMP。     

河南地区鸡猪源大肠杆菌的耐药性监测

从河南中北部地区多个规模化鸡场和猪场采集病料,经大肠杆菌显色培养基鉴定,共分离保存157株鸡源大肠杆菌和92株猪源大肠杆菌,采用二倍肉汤稀释法对23种抗菌药物进行了药物敏感性测定。耐药性监测结果表明,鸡源大肠杆菌对阿莫西林／克拉维酸、头孢噻呋和阿米卡星相对较为敏感,耐药率分别为40．8％、59．9％和56．7％,对氨苄西林、卡那霉素、四环素、磺胺异恶唑、磺胺甲恶唑、环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、洛美沙星、达氟沙星、多粘菌素E等高度耐药;猪源大肠杆菌对阿米卡星最为敏感,耐药率仅为2．0％,其次是阿莫西林／克拉维酸、头孢噻呋和安普霉素,耐药率分别为56．5％、60．9％和65．2％,对氨苄西林、头孢唑啉、链霉素、卡那霉素、大观霉素、四环素、氯霉素、环丙沙星、达氟沙星等则高度耐药。多数菌株普遍呈多重耐药,以17～23耐药株为主。这些数据为本地区的用药提供了参考,同时也显示本地区鸡、猪源大肠杆菌的耐药性极其严重,有必要对本地区进行细菌耐药性的跟踪监测。     

四川省不同地区猪源大肠杆菌耐药性调查

[目的]了解四川省不同地区猪源大肠杆菌的耐药性。[方法]采用CLSI推荐的微量肉汤稀释法,对分离自四川各地不同养猪场的232株大肠杆菌对32种抗菌药物的耐药性进行调查。[结果]232株大肠杆菌除对头孢噻呋、头孢唑啉、头孢曲松和阿米卡星较敏感（耐药率≤15.52%）外,对其余28种药物均表现出不同程度的耐药性（耐药率范围42%～97%）;98.7%的菌株表现出多重耐药性;对部分药物,分离自规模化养殖场菌株的耐药性比分离自散养户的菌株严重。[结论]分离菌株对大部分抗菌药物均表现出耐药性。     

兔源大肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性检测研究

对河南省部分地区的兔源大肠杆菌做了分离鉴定,并进行兽医临床常用抗菌药物的敏感性检测。从郑州、济源、登封、武陟4个地区的兔场分离鉴定出27株大肠杆菌,进行了11种药物的敏感性检测,结果表明:27株大肠杆菌对多粘菌素的敏感率(96.3%)最高,对头孢噻呋/舒巴坦、头孢噻呋、阿米卡星的敏感率依次为:59.3%、59.3%、55.6%,对兽用常见抗生素头孢噻呋、阿米卡星、氟苯尼考等均有不同程度的耐药现象。     

甘草查尔酮A增强头孢噻呋钠对鸡源大肠杆菌作用的研究

研究甘草查尔酮A能否增强头孢噻呋钠对鸡源大肠杆菌的抗菌活性。采用微量肉汤稀释法筛选出对头孢噻呋钠耐药的菌株,用棋盘法、药敏纸片扩散法和生长曲线来测定甘草查尔酮A对头孢噻呋钠抗菌活性的影响。筛选出7株对头孢噻呋钠耐药的菌株,分别对7株耐药菌的分级抑菌浓度(FIC)进行测定,结果均为协同或相加作用。药敏纸片扩散法结果显示,与单独头孢噻呋钠相比,头孢噻呋钠联合16、32、64、128μg/mL甘草查尔酮A时,抑菌圈直径增加。生长曲线测定结果显示,64μg/mL甘草查尔酮A与128μg/mL头孢噻呋钠联合使用时,在15 h的试验时间内,未见明显生长。甘草查尔酮A可增强头孢噻呋钠对鸡源大肠杆菌的抗菌活性。     

他唑巴坦钠与头孢噻呋联用对ESBLs阳性菌的体外抑菌试验

[目的]为克服产生ESBLs细菌的耐药性,指导临床合理用药,控制兽医临床的感染性疾病。[方法]用试管二倍稀释法测定了他唑巴坦钠以1∶8、1∶7、1∶6、1∶5、1∶4、1∶3、1∶2、1∶1与头孢噻呋联合对产生ESBLs细菌的最小抑菌浓度值。[结果]他唑巴坦钠以1∶8与头孢噻呋联合对产生ESBLs细菌的最小抑菌浓度值较头孢噻呋单药降低了16倍。[结论]应该进行兽用他唑巴坦复方制剂的研究。     

不同年代大肠杆菌耐药性监测分析

对分离自不同年代患病畜禽的196株大肠杆菌采用纸片扩散法对20种抗菌药物(氨苄西林、阿莫西林、头孢氨苄、头孢呋辛钠、头孢曲松、四环素、多西环素、链霉素、庆大霉素、卡那霉素、氯霉素、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、土霉素、头孢噻呋、磺胺异恶唑、安普霉素、氟本尼考和甲氧苄啶)的耐药性进行了监测。结果表明:分离菌株除对头孢氨苄、头孢呋辛钠、头孢曲松、安普霉素全部敏感外,对其余抗菌药物均显示出不同程度的耐药性。不同年代分离菌株对多数抗菌药物的耐药性呈现逐渐增强的变化趋势,菌株的多重耐药率也明显增加。不同年代菌株显示出不尽相同的耐药谱,且耐药谱呈现出不断增宽的趋势。     

遵义市规模养猪场大肠杆菌的耐药性检测

[目的]掌握遵义市规模养猪场大肠杆菌的耐药情况,为贵州省动物源性细菌监测提供数据。[方法]采集遵义市规模养猪场猪肛门拭子和总排污池新鲜粪便(或污水棉拭子)样品335份,分离出阳性大肠杆菌。采用微量肉汤稀释法对分离的大肠杆菌进行耐药性检测。[结果]分离并鉴定到334株阳性大肠杆菌,分离的大肠杆菌对7种抗菌药物的耐药率依次为:磺胺间甲氧嘧啶钠土霉素恩诺沙星头孢噻呋氟苯尼考环丙沙星庆大霉素,多重耐药性主要集中在4耐、5耐、6耐和7耐。[结论]遵义市规模养猪场大肠杆菌的耐药性严重及多重耐药性正在恶化,且猪场总排污池大肠杆菌对各药物的耐药性皆高于猪肛门拭子。     

小檗碱体外抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性的研究

目的 研究小檗碱体外抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）活性。方法 运用琼脂扩散法、液体稀释法测定并分析小檗碱对MRSA的抑菌环大小、最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）;运用96孔酶标板结晶紫法测定并分析小檗碱对MRSA的最小生物膜清除浓度（MBEC）。结果 与DMSO比较,小檗碱与氯霉素（阳性对照药物）可显著增加MRSA的抑菌环半径（P<0.01）,小檗碱对MRSA的MIC为0.2 mg/mL,MBC为0.4 mg/mL;小檗碱对MRSA的MBEC为0.2 mg/mL。结论 小檗碱对MRSA有比较明显的抗菌、抑菌作用,其效应机制可能与其抑制细菌生物膜的形成有关。     

五味子对禽源大肠杆菌临床分离株抗生素敏感性的影响

研究五味子水煎液的体外抗菌活性及与临床常用6种抗生素联合对临床分离6株耐药大肠杆菌(E.coil)的作用效果.采用微量肉汤稀释法测定南五味子水煎液(SRD)、北五味子水煎液(SCD)以及6种抗生素对临床分离禽源E coli的最低抑菌浓度(MICs);微量棋盘法测定SCD与6种抗生素联合对E.coil的分级抑菌浓度指数(FICI);平板计数法测定SCD以及SCD与CEF联合对E coli ATCC25922生长的影响.结果 显示:SCD对6株耐药菌的MIC均为64 mg·mL-1,SRD对其中5株的MIC为128mg.mL-1,对另一株的MIC＞ 128 mg·mL-1;SCD与头孢噻呋(CEF)联用时对5株菌的FIC≤0.5,呈协同作用;与恩诺沙星(ENR)联用时对6株菌的FIC＞2,呈拮抗作用;与卡那霉素(KAN)、链霉素(STR)、氨苄西林(AMP)和多西环素(DOX)联合时主要呈相加作用;SCD能抑制E.coli生长速度,使其生长量明显降低,且相较于单独处理.1/4MIC SCD与I/4MIC CEF联合处理的抑菌效果更明显.综上,SCD的抗菌活性强于SRD,且能明显增强禽源临床分离耐药Ecoli对CEF的敏感性而呈现协同抑菌作用.     

禽大肠杆菌毒力岛主要摄铁基因及生物膜的检测

以临床病禽分离17株E.coli为研究对象,分别检测分离菌株的毒力岛中irp2、irp3、irp4、irp5和生物膜形成能力。先用irp2 PCR扩增检出7株致病性大肠杆菌,并对其进行ERIC-PCR分型,结果分为2个类型。又对分离株进行irp3、irp4和irp5基因检测,结果分离株中irp2、irp3、irp4和irp5的阳性检出率分别为41.2%、64.7%、29.4%和35.3%;最后对分离株进行生物膜形成能力的检测,结果携带irp2的阳性菌株都有较强的生物膜形成能力。结果提示,禽致病性大肠杆菌的HPI中irp2与生物膜的形成有一定的关联。     

牛源大肠杆菌对喹诺酮类抗生素耐药相关基因的筛选及鉴定

为在大肠杆菌全基因组范围内筛选和鉴定与喹诺酮类抗生素耐药性相关的基因,通过对临床分离的13株大肠杆菌进行药敏试验,选择耐药谱较广泛的菌株作为研究对象,利用Mariner转座子对其基因组进行随机突变,获得转座子突变株文库,并以亲本菌株为对照筛选文库中对喹诺酮类抗生素敏感的突变体,通过套式PCR、核苷酸测序及序列比对确定突变株中转座子的插入位点及其破坏的基因。结果表明:从突变株文库中筛选得到22株分别对诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、萘啶酸敏感的突变株,其中7株对4种抗生素都敏感;插入位点分析发现,抗生素敏感突变株中被转座子破坏的基因包括ecs4206(磷酸核酮糖激酶)、ecs3959(β-D-半乳糖苷酶β亚基)、ecs3946(假定蛋白)和ecs1857(DNA结合转录调控因子)。筛选出的基因可被开发为控制或扭转大肠杆菌耐药性的作用靶点。     

超高压对单增李斯特菌生物被膜形成的影响

为探究超高压处理对单增李斯特菌被膜形成能力的影响。以2株4b血清型的单增李斯特菌(Wa X12、ATCC13932)为研究对象进行超高压处理(100~500 MPa,15 min,20℃),通过24孔板结晶紫染色方法对2株菌生物被膜形成能力进行检测,结合荧光显微镜和扫描电镜来观察生物被膜形成情况。Wa X12比ATCC13932形成被膜的能力强。100 MPa压力处理显著增强Wa X12的被膜形成能力(P0.05),200 MPa压力处理使ATCC13932被膜形成量显著增多(P0.05),而大于300 MPa的超高压处理使2株菌的被膜形成量均显著减少(P0.05)。荧光显微镜和扫描电镜观察结果与结晶紫染色结果相符,超高压处理对2株单增李斯特菌被膜形成能力均有影响。小于200 MPa压力处理后单增李斯特菌被膜形成能力增强,并在48 h后被膜形成量达到最大值。     

响应面优化大肠杆菌生物膜的培养条件

利用响应面法对大肠杆菌生物膜的培养条件进行优化。在单因素试验基础上,以细菌浓度、pH和培养时间为自变量,生物膜形成量为响应值,根据中心组合(Box-Benhnken)试验设计原理,研究各自变量及其交互作用对生物膜形成的影响,依据回归分析确定各培养条件的最优值,并通过激光共聚焦显微镜观察大肠杆菌生物膜的形成。结果表明,大肠杆菌生物膜的最佳培养条件为:LB培养基pH7.5,细菌接种量为1.2×10~7 cfu/mL,培养时间11.5 h。在该优化条件下,大肠杆菌生物膜的形成量OD_(600nm)可达0.60左右;通过激光共聚焦显微镜观察可见,此时形成大量的细菌聚集体,80%的视野已经被细菌覆盖,细菌活性很高,生物膜形成量达到高峰。     

乳酸链球菌素与大黄联合作用对牛源致病性Escherichia coli O78的抑菌作用

为研究乳酸链球菌素(nisin)和大黄联合药效对牛源致病性大肠杆菌的抑菌作用,通过二倍稀释法测定nisin、大黄、抗生素及联合用药的最小抑菌浓度(MIC);微板法测定各药物MIC剂量下致病性大肠秆菌的生长曲线、碱性磷酸酶(AKP)以及总蛋白含量。结果表明:1)nisin单独使用对Escherichia coli O_(78)无抑菌效果;大黄单独使用时MIC为62.5mg/mL,抗生素的MIC为0.016mg/mL,nisin和大黄联合使用MIC分别为0.333和10.417mg/mL。2)大黄和nisin联合药效,能够有效抑制E.coli O_(78)的生长,缩短对数期,效果优于大黄组(P0.05),仅次于抗生素组(P0.05)。3)nisin和大黄联合使用对E.coli O_(78)的细胞壁和细胞膜有很强的破坏性,导致AKP和菌体总蛋白指数的升高,效果显著优于抗生素、大黄(P0.05)。由此可见,大黄和nisin联合作用E.coli O_(78)时,杀菌效果高于抗生素、大黄,抑菌效果高于大黄,但低于抗生素。     

鸽源大肠杆菌O157：非H7菌株的致病性和耐药性分析

为查明南京市某赛鸽公棚赛鸽出现腹泻、死亡的致病病原,本研究对采集的病料进行病原分离鉴定,分析致病菌的血清型、生物被膜表型、毒力基因、耐药菌谱,并对分离菌株进行了人工感染试验。研究表明:1)从患病鸽组织、拭子和粪便中分离出的细菌初步诊断为大肠杆菌O157;分离菌株在NA平板上长出白色、光滑的圆形菌落,在CT-SMAC平板上长出紫红色菌落。2)分离菌株的16S rRNA基因序列与大肠杆菌的相似性达98%~99%,命名为E.c.86246。3)血清学试验表明分离菌株为大肠杆菌O157:非H7菌株,动力试验进一步证实其为动力株。4)分离菌株携带tccp1014、eaeA和hly毒力基因,可导致雏鸡胃肠道出现不同程度的功能损伤,甚至导致死亡;其半数致死量为2.0×10⁵ CFU/mL,具有较强的致病性。5)分离菌株携带tetA、tetM、sul2、aadA1和bla_TEM 5种耐药基因,具有较弱的生物被膜形成能力,对四环素、氨基糖苷类等抗菌药物严重耐药,对阿莫西林、氧氟沙星和诺氟沙星敏感。综上,本研究分离的鸽源大肠杆菌O157:非H7菌株,具有动力性,有较强的致病性和一定的耐药性,为大肠杆菌O157的流行病学调查、致病机理分析和抗菌药物的精准施治提供理论依据和数据参考。     

甘肃部分地区致羔羊腹泻大肠埃希菌的分离鉴定及耐药性分析

为调查甘肃地区大肠埃希菌对新生羔羊腹泻的致病性及其耐药性,从甘肃省8个养殖场采集新生腹泻羔羊粪便92份。采用16S rDNA扩增结合微生物鉴别培养技术对病料中的致病性大肠埃希菌进行鉴定,随机选取分离的6株菌株进行致病性试验,并采用Kirby-Bauer纸片琼脂扩散法对分离得到的菌株进行耐药性分析。结果表明,从92份病料中分离得到21株致病性大肠埃希菌,选取的6株菌均有一定的致病性,耐药性分析结果显示该地的大肠埃希菌对羊场常用的多种抗生素耐药。表明大肠埃希菌仍是引起甘肃地区新生羔羊腹泻的主要病原菌,而且耐药性严重。     

鸡源致病性大肠杆菌对四环素类抗生素耐药性及耐药基因检测

为更好地了解鸡源致病性大肠杆菌对四环素类抗生素的耐药性及耐药基因分布,从陕西省部分规模化养鸡场的病、死鸡中经分离鉴定得到158株致病性大肠杆菌。采用K-B药敏纸片法检测致病性大肠杆菌分离株对4种四环素类药物的药敏性,PCR方法检测3种四环素类耐药基因,用DNAStar软件对获得的耐药基因序列与GenBank中的相关序列进行比对。结果显示,鸡源致病性E.coli分离株对四环素、金霉素、土霉素以及多西环素的耐药率分别为88.6%、77.2%、87.3%、50.6%,3重以上耐药菌株占78.5%。四环素类耐药基因tetA、tetB的检出率分别为81.4%、20.7%,未检测到tetC基因。结果表明,鸡源致病性E.coli对四环素类抗生素普遍具有耐药性,且以多重耐药为主;耐药基因tetA的检出率与其耐药性呈正相关。