用小鼠胚胎干细胞培养卵子试验的介绍

福建农林大学罗克教授撰写的“干细胞工程”一文系统地介绍了哺乳动物干细胞的基本概念、特性和功能等问题(包括干细胞能分化成体内200多种细胞的特性)。但用胚胎干细胞(ES)培养生殖细胞的研究还很少见到报道。本文介绍美国的汉斯·休勒和Kain Hubner研究小组在2003年进行的用小鼠胚胎干细胞培养卵子的试验研究。     

小鼠胚胎干细胞培养相关影响因素的研究

本实验主要探讨饲养层、白血病抑制因子(LIF)、水、血清对小鼠胚胎干细胞培养的影响。结果表明:饲养层细胞在小鼠胚胎干细胞的分化抑制过程中有一定作用,而起主导作用的是外源白血病抑制因子;;经亚沸处理的MilliQ水,能显著提高小鼠胚胎干细胞保持未分化状态的能力;;血清的品质对小鼠胚胎干细胞的培养效果影响显著(p<0.05)。     

小鼠胚胎干细胞向骨骼肌细胞分化的研究进展

近年来,胚胎干细胞的应用越来越广泛,在体外将小鼠胚胎干细胞诱导分化为肌肉细胞,并且利用这些分化得来的肌肉细胞治疗肌肉退行性疾病,一直是胚胎干细胞研究领域的热点,而胚胎干细胞的分化机制更是其中的难点。目前,用于诱导小鼠胚胎干细胞分化为骨骼肌细胞的方法很多,但分化的效率并不是很高,所以研究胚胎干细胞向骨骼肌细胞方向分化的机制显得尤为重要。文章仅就最近几年对小鼠胚胎干细胞向骨骼肌细胞方向分化的一些方法及其机制作一综述。     

ICR小鼠胚胎干细胞体外培养体系的优化

为了优化ICR小鼠胚胎干细胞体外培养体系,本实验以ICR小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)为饲养层,以3.5dICR小鼠胚胎为试验材料,探讨了不同胚胎发育阶段、不同胰岛素添加量和不同生长因子对ICR小鼠类胚胎干细胞(mESCs)分离培养的影响。实验结果表明:囊胚期的胚胎贴壁率和内细胞团(inner cell mass,ICM)集落增殖率(82.4%、64.7%)显著高于桑葚胚期(54.2%、41.7%)(P0.05);在添加不同浓度胰岛素时,0、5、10mg/mL组的胚胎贴壁率和ICM集落增殖率差异均不显著(P0.05);添加生长因子组的胚胎贴壁率和ICM集落增殖率显著优于未添加组(P0.05),而添加组中单独添加SCF稍逊于单独添加LIF和2种因子一起添加的效果。     

小鼠胚胎的收集培养和移植

介绍了小鼠胚胎的收集、培养和移植方法．其中包括改进的输卵管、子宫的胚胎收集及改良的胚胎培养液组分；同时对培养板培养胚胎和培养皿微滴胚胎培养进行了比较。     

小鼠胎儿成纤维细胞饲养层的制备

在进行胚胎干细胞、精原干细胞等特殊细胞的研究时,往往需要将这些细胞接种到成纤维细胞的饲养层上,但需要量不大。因此不便于大规模的制备。本实验通过将组织块培养法和酶消化培养法结合起来制备小鼠胎儿成纤维细胞饲养层,在一定程度上解决了这一问题。利用该方法制备成纤维细胞饲养层,既简化了实验操作,又节省了实验费用。将精原干细胞接种到该饲养层后,其可在体外进行生长和增殖。     

小鼠胚胎干细胞培养、克隆、分离、传代研究

对影响小鼠胚胎干细胞（Embryonic stem cells,ES细胞）培养、克隆、分离、传代效果的因素进行了探索研究。应用223枚昆明白小鼠胚胎和20枚129品系小鼠胚胎的研究结果表明，129品系小鼠胚胎比昆明白小鼠胚胎更适合作为ES细胞建系的材料，两者FS出现率差异显著（P＜0．05）；以DMEM＋10％NBS＋10％FCS为基础培养液，分别加入LIF、胰岛素、LIF＋SCF，极显著提高昆明白小鼠胚胎贴壁率，ICM生长率及F1、F2出现率（P＜0．01），而在DMEM＋10％NBS＋10％FCS＋LIF＋SCF为培养液，得到昆明白小鼠胚胎最高贴壁率、ICM生长率及传代率；4dpc胚胎传代情况显著好于3．5dpc胚胎（P＜0．05）。     

昆明小白鼠胚胎干细胞分离培养的影响因素

为了研究影响胚胎干细胞(ESC)体外分离克隆的因素,试验采用3~5日龄大鼠心肌细胞制成心肌细胞条件培养基(RH-CM),比较了4种培养体系对小鼠胚胎干细胞体外培养的影响,并分析比较了不同饲养层对胚胎干细胞分离克隆造成的影响。结果表明:添加重组鼠白血病抑制因子和心肌细胞条件培养基在胚胎贴壁率、内细胞团(ICM)形成率和原代胚胎干细胞集落形成率以及抑制分化的过程中起到的作用显著优于未添加任何诱导成分的培养基;作为饲养层,小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)分离培养胚胎干细胞的效果优于小鼠睾丸支持细胞(MS)。     

2i/LIF对维持小鼠胚胎干细胞多能性的研究

为了研究小分子化合物对维持小鼠胚胎干细胞(Embryo Stem Cell,ES细胞)体外培养的影响,试验使用2i/LIF培养基,包括基础培养基N2B27(Knockout DMEM/F12+N2+Neurobasal+B27+20%SR)添加1μmol/L PD0325901(FGF-MAPK通路抑制剂)和3μmol/L CHIR99021(GSK通路抑制剂)两个小分子化合物以及10 ng/m L小鼠白血病抑制因子(m LIF),以丝裂霉素C处理过的小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)为饲养层培养小鼠胚胎干细胞,进而探讨该培养基对维持ES细胞多能性的影响,并进行PCR和免疫荧光检测以及体内外分化试验,为应用该培养基到大家畜多能干细胞体外培养奠定基础。结果表明:该培养条件能有效维持ES细胞的多能性。细胞具有典型小鼠胚胎干细胞的形态特征,呈碱性磷酸酶阳性,表达OCT4、KLF4、NANOG、SOX2、REX1、DNMT3B、DAPP4和CDH1多能性干细胞标志基因,表达多能性相关蛋白OCT4、SOX2、NANOG、TRA-1-60、E-cadherin和表面特异性抗原SSEA-1,具有分化成3个胚层的能力。说明已经建立了利用2i/LIF培养基维持多能干细胞体外培养的实验平台。     

类ES细胞自然分化为跳动的类心肌细胞的观察

胚胎干细胞简称ES细胞，是一种存在于尚未着床的早期胚胎中来分化的原始细胞，从早期胚胎中培养胚胎干细胞，首先必须分离培养出胚胎的内细胞团（即ICM团)。自1981年Evans、Kaufman及Martin等成功地培养出小鼠ES细胞以来．以胎鼠成纤维细胞(MEF)制作饲养层，培养早期胚胎．分离ICM团，进而在抑制分化的条件下，不断地进行     

昆明系小鼠饲养层细胞制备条件的优化

通过分离不同胚龄的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF),对MEF进行连续传代培养,并对MEF不同的消化时间进行探讨,研究影响小鼠胚胎成纤维细胞分离与培养的因素.结果表明,分离小鼠胚胎成纤维细胞的最适胚龄是12.5 d～14.5 d;37℃条件下,用2.5 g/L胰蛋白酶作用PMEF,作用时间不应超过15min;离散贴壁的成纤维细胞,作用时间以2 min～3 min为宜;MEF在第2代～第5代增殖旺盛,7代以后细胞出现急剧下降.所以选择第3代MEF是制做饲养层的最佳时机.MEF分离方法简单,来源方便,增殖迅速,是用于胚胎干细胞分离培养的有效培养体系.     

小鼠胚胎早期发育过程中OCT4作用的研究进展

OCT4属于POU转录因子。目前对于OCT4基因的研究认为在鼠和人体内,OCT4主要表达于胚胎干细胞及生殖细胞中,对于维持胚胎干细胞的多能性和自我更新有十分重要的作用,对于胚胎早期发育具有重大意义。但是目前OCT4在小鼠早期胚胎中的结合位点还不清晰,应进一步深入研究OCT4基因构建OCT4在小鼠早期胚胎发育过程中的调控网络,为揭开胚胎早期发育调控机制的面纱提供重要参考。     

昆明小鼠胚胎干细胞培养体系的优化

为了更高效地分离昆明小鼠胚胎干细胞,本研究从饲养层、胚胎发育阶段和培养液方面进行优化。将3代以内的小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)用丝裂霉素C处理后,分别按1×104、1×105、1×106·mL-1密度接种,以H-DMEM+15%KSR+LIF为培养液,观察不同密度饲养层对昆明小鼠胚胎干细胞(ES细胞)生长的影响,并研究胚胎发育阶段和培养液中分别添加干细胞生长因子(SCF)、SCF+胰岛素对昆明小鼠ES细胞分离克隆的影响。结果显示,胚胎在密度为1×105·mL-1的饲养层上,F1代和F2代ES细胞克隆形成率均显著高于其他2组(P<0.05)。囊胚的F2代ES细胞克隆形成率显著高于桑椹胚(P<0.05),培养液中添加SCF显著提高昆明小鼠胚胎贴壁率(P<0.05),同时添加SCF和胰岛素得到昆明小鼠最高胚胎贴壁率及F1、F2代ES细胞克隆形成率。所分离的ES细胞显示AKP染色强阳性,Oct-4、SSEA-1的免疫荧光检测阳性,具有ES细胞的特点。由此认为,发育至囊胚的胚胎在MEF密度为1×105·mL-1上,培养液中同时添加SCF和胰岛素更适合昆明小鼠ES细胞的分离培养。     

丝裂霉素C对ICR小鼠胚胎成纤维细胞饲养层制备的影响

<正>目的:探索不同浓度的丝裂霉素C(MMC)处理对ICR小鼠胚胎成纤维细胞饲养层制备的影响,用于分离和培养干细胞。方法:取13.5d胎龄ICR鼠胚分离原代成纤维细胞,利用不同浓度MMC处理胚胎成纤维细胞制备饲养层,比较观察MMC对细胞增殖的抑制作用,制作细胞生长曲线;取妊娠3.5d的ICR小鼠胚胎在不同浓度     

小鼠8-细胞期胚胎和囊胚制备嵌合体的比较

嵌合体是指由2个或2个以上具有全能性或多能性的细胞系发育而成的复合体。随着发育生物学理论和胚胎干细胞技术的发展,将胚胎干细胞导入小鼠植入前胚胎制备嵌合体逐渐成为研究细胞分化机制的有效工具[1]。经基因修饰胚胎干细胞来源的可遗传的嵌合个体,也成为基因功能研究的重要实     

类ES细胞持续培养的上清液对小鼠囊胚ICM团形成的影响

胚胎干细胞是一种存在于动物早期胚胎中、具有分化全能性的细胞。维持这种细胞的分化全能性与不断扩增的前提条件是：培养环境中必须存在抑制其分化、促进其生长的因子。因此，寻找胚胎干细胞促生长与抑分化因子，是胚胎干细胞研究的重要内容之一。1988年Williams等人发现了能诱导髓样白血病细胞向正常分化的LIF，也能抑制胚胎干     

丝裂霉素C对ICR小鼠胚胎成纤维细胞饲养层制备的影响

<正>目的:探索不同浓度的丝裂霉素C(MMC)处理对ICR小鼠胚胎成纤维细胞饲养层制备的影响,用于分离和培养干细胞。方法:取13.5d胎龄ICR鼠胚分离原代成纤维细胞,利用不同浓度MMC处理胚胎成纤维细胞制备饲养层,比较观察MMC对细胞增殖的抑制作用,制作细胞生长曲线;取妊娠3.5d的ICR小鼠胚胎在不同浓度MMC处理的饲养层上培养,观察胚胎贴壁和增殖情况。结果与结论:胎儿成纤维细胞贴壁生长,增殖迅速,6代后细胞逐渐衰老;     

科技消息

科学家首次用克隆技术获得人类胚胎干细胞美国《科学》杂志2月11日宣布,韩国和美国科学家成功克隆出了人类早期胚胎,并从中提取出胚胎干细胞。这是科学家首次利用克隆技术获得人类胚胎干细胞。汉城国立大学和美国密歇根州立大学等机构的科学家参与了这项研究。16名健康妇女为这项研究志愿捐献了242个卵细胞以及被称为卵丘细胞的体细胞。科学家们采用化学手段刺激卵细胞分裂,有30个克隆细胞经7天至胚囊的早期胚胎阶段,并从这些胚囊中分离出20个内层细胞团,在此基础上最终获得一个人类胚胎干细胞系。新型冠状病毒可引起SARS相关性病毒性肝炎…     

哺乳动物胚胎干细胞应用研究进展

胚胎干细胞是从哺乳动物着床前胚胎的内细胞团体外分离培养而建立的克隆细胞系 ,具有在体外不分化的无限增殖能力。利用胚胎干细胞建立体外分化模型 ,并建立各种基因改变的胚胎干细胞系 ,以求发现某些基因或因子在胚胎发育早期对不同类型细胞或组织分化形成的作用。本文就胚胎干细胞的研究进展做一综述。1　胚胎干细胞的分离、培养与鉴定关于胚胎干细胞的建系 ,最早由Ｅｖａｎｓ等 ( 1 981 )报道。小鼠受精后 2 5天切除卵巢 ,使囊胚延缓着床 ,收集并体外培养这种囊胚 ,4天后滋养层细胞贴壁生长 ,挑出内细胞团 ,胰蛋白酶处理使细胞分散 ,小…     

韩科学家利用冷冻胚胎培育出干细胞

韩国玛利亚生命科学研究所博士朴世弼领导的研究小组将流产后冷冻5年、原准备丢弃的11个人体胚胎解冻,用这些胚胎培育出了7个胚胎干细胞,其成功率为63.6%,明显高于此前世界上公布的10%至36%的成功率。朴世弼领导的研究小组已将用冷冻胚胎培育干细胞的技术向美国、澳大利亚等108个国家和地区申请了国际专利。这一研究成果将在英国学术刊物《人类生殖》第三期上发表。韩科学家利用冷冻胚胎培育出干细胞@木子