牛血铜锌超氧化物岐化酶规模化生产工艺研究

本研究利用红细胞连续分离和热变性、超滤、丙酮沉淀、离子交换等技术,建立了一套牛血铜锌超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD)规模化生产的简便易行新工艺。该工艺采用碟式分离机对红细胞进行连续分离,其分离速度可达1000kg牛血/h以上;采用添加Cu2 、Zn2 的一次热变性方法除去血红蛋白,可以代替传统方法中的氯仿和乙醇,并且在超滤技术浓缩提取液后,沉淀过程中丙酮的用量减少了90%;减轻了这些有机溶剂对环境造成的压力。在规模化生产条件下,利用新工艺,投料14批,共570.5kg红细胞,得到SOD冻干粉36069.35 mg,平均比活达到6164.19U/mg.pro,平均收率为34.41万U/kg红细胞,并且主要化学试剂成本降低93.0%。此外试验结果还表明,冷冻红细胞热变性后,酶的平均总活力一般稳定在72.86万U/kg红细胞;与新鲜红细胞制备的SOD在收率、纯度、比活等方面无明显差别,即可以以冷冻红细胞为原料制备SOD,从而解决了原料长期保存问题。     

多赛特羊与蒙古羊微量元素、超氧化物岐化酶和氧自由基的比较

通过测定无角多赛特肉羊和蒙古羊血清、被毛中微量元素铜、锌、锰,血清中超氧化物岐化酶(SOD)和氧自由基(O-.)含量,发现2个品种羊春、秋季节血清、被毛中铜、锌、锰含量差异显著(P0.05);春、秋季节血清中T-SOD、CuZn-SOD、Mn-SOD、O-.含量差异显着(P0.05)。2个品种绵羊血清中Cu、Zn含量与CuZn-SOD含量呈正相关,T-SOD与O-.之间存在一定的相关性。该研究对引进肉用羊的饲养、育种及疾病防治等方面具有重要意义。     

牦牛铜锌超氧化物歧化酶基因cDNA克隆测序及其分子进化研究

对牦牛Cu／Zn—SODcDNA进行克隆测序。所扩增片段长度为842bp,编码区长度为459bp。扩增片段与奶牛Cu／Zn-SODcDNA序列比较发现有16个碱基存在差异。通过与已知Cu／Zn-SODcDNA序列的7个物种：人、猪、鼠、大鼠、奶牛以及马的cDNA序列的比较构建了分子进化系统树。对所得序列的ORF分析发现,牦牛Cu／Zn—SOD由152个氨基酸组成,并对氨基酸序列进行了比对分析。     

牦牛铜锌超氧化物歧化酶基因cDNA克隆测序及其分子进化研究

对牦牛Cu/Zn-SOD cDNA进行克隆测序。所扩增片段长度为842bp,编码区长度为459bp。扩增片段与奶牛Cu/Zn-SOD cDNA序列比较发现有16个碱基存在差异。通过与已知Cu/Zn-SOD cDNA序列的7个物种:人、猪、鼠、大鼠、奶牛以及马的cDNA序列的比较构建了分子进化系统树。对所得序列的ORF分析发现,牦牛Cu/Zn-SOD由152个氨基酸组成,并对氨基酸序列进行了比对分析。     

两种形式的硒对奶牛红细胞内几种抗氧化酶活力影响的研究

实验通过在缺硒地区奶牛血中不同形态有机硒 (C6H12 N2 O4Se2 )及无机硒 (Na2 SeO3 )测定红细胞内几种抗氧化酶的活力变化来说明有机硒与无机硒的不同生物学效应。实验表明 ,有机硒与无机硒均可使红细胞内抗氧化酶酶活有所改变 ,其中谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH -PX)与超氧化物岐化酶 (SOD)差异性显著 (P <0 .0 5 ) ,且有机硒的生物学效应明显高于无机硒     

大通牦牛的培育——不同类型牦牛抗氧化酶活性测定及其与牦牛强抗逆性关系的研究

研究了半血野牦牛,横交一世代牦牛及家牦牛血液红细胞中铜锌超氧化物歧化酶(简称Cu Zn-SOD)、过氧化氢酶(简称CAT)二种抗氧化酶的活性.统计分析结果表明半血野牦牛、横交一世代牦牛两种酶的活性均显著或极显薯高于家牦牛,半血野牦牛和横交一世代牦牛之间、同一类型不同性别牦牛之间均无显著差异.并对抗氧化酶活性与牦牛抗逆性之间的关系作了初步探讨.     

锌对小鼠机体抗氧化酶活性及NO、MDA含量的影响

选用50只8周龄健康昆明系小鼠为试验动物,随机分成5组,每组10只,通过分别给小鼠灌喂生理盐水(0.5mL)、CuSO4 (3 mg/kg)和不同剂量的ZnSO4 (15mg/kg、30 mg/kg、60mg/kg),研究锌对小鼠免疫器官指数、血液谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),脾脏和胸腺组织中超氧化物岐化酶(SOD)、一氧化氮(NO)水平和丙二醛(MDA)含量的影响.结果显示,锌能提高小鼠血液中谷胱甘肽水平以及脾脏和胸腺指数,降低脾脏和胸腺组织中丙二醛及一氧化氮含量,提高CuZn-SOD水平.该结果表明锌对动物机体有显著的免疫调节作用,且通过调节机体内抗氧化水平而影响免疫系统的功能.     

锌对小鼠机体抗氧化酶活性及NO、MDA含量的影响

选用50只8周龄健康昆明系小鼠为试验动物,随机分成5组,每组10只,通过分别给小鼠灌喂生理盐水(0.5mL)、CuSO4(3 mg/kg)和不同剂量的ZnSO4(15mg/kg、30 mg/kg、60mg/kg),研究锌对小鼠免疫器官指数、血液谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),脾脏和胸腺组织中超氧化物岐化酶(SOD)、一氧化氮(NO)水平和丙二醛(MDA)含量的影响。结果显示,锌能提高小鼠血液中谷胱甘肽水平以及脾脏和胸腺指数,降低脾脏和胸腺组织中丙二醛及一氧化氮含量,提高CuZn-SOD水平。该结果表明锌对动物机体有显著的免疫调节作用,且通过调节机体内抗氧化水平而影响免疫系统的功能。     

构建铜锌超氧化物歧化酶毕赤酵母转化子及其高表达分析

设计铜锌超氧化物歧化酶酵母偏爱密码子并化学合成,与pPIC9K连接,构建酵母偏爱密码子的铜锌超氧化物歧化酶基因真核表达载体;通过电转化和持续加压筛选毕赤酵母GS115高拷贝转化子,获得重组高表达酵母菌株建立主种子批。经Southern blot鉴定,高拷贝基因比低拷贝高2～8倍,表达活性高2～4倍。重组菌的目的基因拷贝数与表达产物呈正相关;表达产物为二聚体,相对分子质量为40 000左右,低糖基化,均为分泌表达。West-ern blot法分析,对Cu,Zn-SOD抗体具有特异性反应。转化子在培养16h后进入对数生长期,24h后进入生长稳定期;转化子培养20h左右进行诱导表达最为合适。Cu,Zn-SOD转化子用正交试验筛选摇瓶的诱导表达条件,经诱导表达,Cu,Zn-SOD表达上清最高活性大于600U/mL。确立最适摇瓶培养条件为pH6.0,30℃,1.5%甲醇诱导浓度诱导72h上清的目的蛋白表达最好。高拷贝的3株重组菌经50次传代后插入的目的基因保持稳定。本研究为中试工艺研究奠定了基础。     

荷斯坦奶牛酮病对抗氧化系统影响的研究

为了探讨酮病对抗氧化系统的影响 ,以荷斯坦奶牛为实验动物 ,应用酮粉法和改良式水杨醛比色法随机检测结果 ,一组为 1 0头阳性牛 ,另一组为 1 0头对照牛。应用DTNB显色法测定血清中GSH Px活力 ,应用黄嘌呤氧化法测定血清中T SOD活力 ,应用硫代巴比妥酸法测定血清中MDA含量。结果表明 ,酮病奶牛血清中GSH Px活力极显著降低 (P <0 .0 1 )、T SOD活力显著降低 (P<0 .0 5) ,血清中MDA含量显著增高 (P <0 .0 5)。因此酮病影响奶牛抗氧化系统 ,这一结论对揭示奶牛酮病的发生机理具有重要的意义     

铜伴侣蛋白CCS介导铜锌-超氧化物歧化酶激活的过程

CCS是细胞质中铜锌-超氧化物歧化酶(SODl)的铜伴侣蛋白.本文综述了CCS介导SOD1激活的过程.CCS与SOD1通过蛋白-蛋白相互作用的方式将铜离子插入到不含铜离子的SODl( apoSOD1)中,并促进二硫键的形成而激活SOD1.影响CCS活性的因素包括:X连锁的细胞凋亡抑制蛋白(XIAP)、神经接头蛋白X11...     

柞蚕铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆与表达分析

超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内的重要保护性酶类。采用RT-PCR方法克隆了柞蚕(Antheraea pernyi)铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)基因的ORF序列。生物信息学分析表明,该序列共编码154个氨基酸,具有Cu/Zn-SOD的保守性结构特征,与家蚕(Bombyxmori)、美国白蛾(Hyphantria cunea)、野桑蚕(Bombyx mandarina)以及果蝇(Drosophila melanogaster)Cu/Zn-SOD基因的同源性分别是81.5%、81.7%、81.5%、66.7%。柞蚕蛹经紫外线照射处理后用半定量PCR方法检测,发现照射不同时间脂肪体内Cu/Zn-SOD基因的转录水平存在差异,在照射5 min后开始增加,至10 min时为转录高峰,15 min时又呈下降趋势。     

野桑蚕铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆分析与原核表达

超氧化物歧化酶是野桑蚕保护酶体系的重要酶类。利用RT-PCR方法克隆出野桑蚕铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)cDNA(EMB I登陆号:AM410997),其开放阅读框ORF长465 bp,编码154个氨基酸。同源性及系统进化分析表明,推导出的氨基酸序列与3种果蝇的同源性平均为69.3%,与线虫为57%,各物种中与Cu/Zn结合的残基高度保守。利用ExPASy的ScanProsite以及PSort和TMpred对此编码的蛋白质结构和功能域分析,预测出其具有2段Cu/Zn-SOD特异序列,且该蛋白不存在信号肽以及跨膜区。将Cu/Zn-SOD cDNA克隆到pET-28 a(+)表达载体,测序鉴定后以IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳鉴定其表达的融合蛋白质分子量为19.4 kD。     

中华蜜蜂铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆、序列分析及表达特征

本试验旨在克隆中华蜜蜂铜锌超氧化物歧化酶(SOD1)基因,探究中华蜜蜂SOD1基因的表达特性.利用巢式PCR技术扩增、克隆及分析中华蜜蜂SOD1基因,采用实时定量PCR检测不同发育时期(3和6日龄幼虫、l和4日龄蛹以及1和7日龄成蜂)、不同部位(成蜂的头、胸和腹)SOD1基因的表达量,探究中华蜜蜂SOD1基因的表达特性.结果显示:克隆获得中华蜜蜂SOD1基因的cDNA全长序列,其cDNA全长631bp(GenBank登录号JN700517),编码152个氨基酸,预测蛋白质分子质量为15.65 ku,等电点为6.21,经氨基酸序列比对,与意大利蜜蜂有99％的相似性,与其他典型的昆虫(如果蝇、冈比亚按蚊、斜纹夜蛾,家蚕、熊蜂)也有67％ ～85％的相似性;中华蜜蜂SOD1基因在不同发育时期和部位中均有表达特异性,在6日龄幼虫表达量达到峰值,而在4日龄蛹中最低;头部与腹部表达量显著高于胸部(P＜0.05).本研究成功克隆获得中华蜜蜂SOD1基因,其cDNA全长631 bp,编码152个氨基酸.该基因在中华蜜蜂整个发育时期均有表达,而且不同发育时期以及不同部位的表达量不同.     

半定量RT-PCR法分析猪肝脏中铜锌超氧化物歧化酶mRNA表达水平

细胞内铜锌超氧化物歧化酶（CuZnSOD）是动物体内一种重要的抗氧化酶。本实验室构建了优化的半定量RT-PCR法，以18S rRNA为内标，研究猪肝脏组织中CuZnSOD基因mRNA表达水平。提取猪肝脏组织总RNA，经反转录后进行扩增，先寻求PCR线性扩增范围，确定RT．PCR的最佳循环数和Mg^2＋浓度。扩增后用VDS摄像系统扫描PCR扩增产物的电泳条带灰度。通过CuZnSOD PCR产物的灰度与18S rRNA PCR产物的灰度之比，即可计算出CuZnSOD mRNA的相对含量。     

维生素C对中华蜜蜂死亡率及其铜锌超氧化物歧化酶基因表达的影响

本研究以中华蜜蜂(Apis cerana cerana)为试验材料,通过笼养的方法饲养刚出房的中华蜜蜂,并饲喂不同剂量的维生素C(vitamin C,VC),检测其对中华蜜蜂死亡率及铜锌超氧化物歧化酶(Acc-SOD1)mRNA相对表达量的影响。结果表明,随着VC添加剂量的升高,中华蜜蜂的死亡率显著下降(P<0.05),Acc-SOD1相对表达量呈下降趋势,但差异不显著(P>0.05)。     

植物超氧化物歧化酶的研究进展

植物在生长发育的过程中会受到不同程度的生理或非生理胁迫,导致植物细胞内产生大量活性氧,影响植物正常生长代谢,甚至引起植物衰老死亡。大量研究显示,植物中的超氧化物歧化酶能发挥其独特的功能有效地清除多种活性氧,维持植物正常生命活动,并已经在农业、医疗、食品和化工多个领域得到了应用。就抗氧化酶系统中极其重要的成员———超氧化物歧化酶的分布类别、理化性质、生理功能及相关的研究应用情况进行了概述。     

家蚕铜锌超氧化物歧化酶的分离纯化及其部分性质的研究

家蚕体液经热变性、DEAE 琼脂糖柱层析、SephacrylS 2 0 0凝胶过滤和等电点聚焦电泳纯化 ,获得达到均一程度的高活性的铜锌超氧化物歧化酶 (Cu .Zn SOD)。活性回收率为 35 % ,纯化倍数为 1911倍。测得该酶的分子量约为 32 0 0 0D ,亚基分子量约为 16 0 0 0D。该酶在紫外光区与可见光区的吸收峰分别为 2 70nm和 6 76nm。测得该酶的等电点为pH 7.15。     

超氧化物歧化酶（SOD）在蚕业上的研究进展

本文介绍了近年来桑和蚕ＳＯＤ研究的结果,阐明了它的生理作用。