链格孢菌对空心莲子草致病性的研究

为探讨链格孢菌对空心莲子草的防治潜力,采用离体叶片法检测了链格孢菌不同极性代谢产物、菌丝体及分生孢子对空心莲子草的致病性.结果表明,链格孢菌乙酸乙酯相代谢产物对空心莲子草离体叶片具有较强的致病性,在最高浓度2 000 μg/mL时,石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相及水相导致叶片的病斑直径分别是对照的2.05倍、16.00倍、4.79倍和2.23倍.链格孢菌菌丝体和分生孢子同样对空心莲子草离体叶片具有较强的致病性,且随着浓度的增加致病性增强,在最高浓度9.88×106片段/mL和8.76×106个孢子/mL时,菌丝体和分生孢子所导致的叶片病情指数分别为最低浓度0.62×106片段/mL和0.55×106个孢子/mL时的2.78倍和3.41倍.链格孢菌具有开发为空心莲子草生防菌的潜力.     

链格孢菌毒素细交链孢菌酮酸对空心莲子草的致病性

以空心莲子草离体叶片和植株为材料,采用离体叶片针刺法及离体植株培养法研究链格孢菌毒素细交链孢菌酮酸对空心莲子草的致病性。结果表明,细交链孢菌酮酸对空心莲子草叶片具有较强的致病性。在31.25 ～ 500.00 μg/mL浓度范围内,随着毒素浓度的升高,空心莲子草叶片的病斑直径增大,500.00 μg/mL时为2.41 mm;浓度为20.00 μg/mL时,毒素对空心莲子草植株不同部位叶片的致病性存在差异,对幼嫩的顶部叶片致病性较强;细交链孢菌酮酸对空心莲子草植株的生长产生抑制作用,抑制强度随浓度的升高而增强,与对照相比,当浓度达到125.00 μg/mL时,毒素对植株生长的长度、鲜重及平均根长的抑制作用达到显著水平,浓度达到250.00 μg/mL时,植株的生根数也受到显著抑制,在最高浓度500.00 μg/mL时,植株处于零生长,生长长度和生根数均为0,鲜重为负增长,达－0.77 g。本研究表明细交链孢菌酮酸具有开发为防除空心莲子草生物源除草剂的潜力。     

链格孢菌苹果致病型的ATMT转化体系的建立

【目的】链格孢菌（Alternaria alternate）苹果致病型是苹果上的重要致病菌,可以侵染苹果叶片和果实。论文旨在建立农杆菌介导的链格孢菌苹果致病型高效稳定的分子转化体系,为在分子水平上研究链格孢苹果致病型病菌的致病机制提供技术支持。【方法】质粒pKO1-HPH是以pCAMBIA1300骨架为基础构建的穿梭质粒,含有潮霉素抗性基因,并在其多克隆位点上插入了绿色荧光蛋白基因,这个质粒在大肠杆菌和农杆菌细胞中都能够稳定地复制繁殖。将质粒pKO1-HPH采用冻融法转化到农杆菌菌株AGL1中,然后与链格孢苹果致病型菌株XP-1的分生孢子在诱导培养基上共培养进行基因转化,转化子在含有潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上进行筛选;在含有50 μg·mL^-1潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上检测转化子细胞中抗性基因在转化子中的表达情况;用荧光显微镜检测绿色荧光蛋白基因在转化子细胞中的表达情况。在初步确认可以将绿色荧光蛋白和潮霉素B磷酸转移酶基因转入链格孢苹果致病型菌株中后,对菌落培养时间、转化前分生孢子的预处理方法对转化效率的影响进一步优化。转化子的稳定性采用分生孢子5次继代培养后,能否在含有潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上稳定生长来检测;采用PCR方法检测绿色荧光蛋白外源基因和潮霉素B磷酸转移酶基因是否存在于转化子基因组中;用Southern杂交检测外源基因在转化子基因组中插入的拷贝数;在苹果果实和叶片上接种检测转化子致病性的变化。【结果】将100 μL孢子悬浮液（含10⁵孢子）涂布于马铃薯-胡萝卜-琼脂平板上菌落培养36-48 h后,链格孢苹果致病型菌株XP-1可以产生足量的孢子用于农杆菌介导的分子转化。将分生孢子用无菌水洗下,在4℃处理6 h,再与含质粒pKO1-HPH的农杆菌进行诱导共培养,转化子在含有50 μg·mL^-1潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上进行筛选,转化效率较好,10⁷个分生孢子转化可获得约200个转化子。转化子经过5次继代培养,对潮霉素B的抗性没有改变。特异性引物PCR检测表明外源基因能够成功地整合到供试菌株的基因组中;Southern杂交表明外源基因多以单拷贝形式随机插入到链格孢苹果致病型菌株XP-1细胞的基因组中;转化子的菌丝和分生孢子在荧光显微镜下可以观察到明显的绿色荧光,说明荧光蛋白基因在菌丝及孢子中均能够成功表达。通过部分转化子的致病性试验,筛选获得数个在苹果果实和叶片上致病性都显著降低的菌株。【结论】建立了农杆菌介导的链格孢菌苹果致病型稳定高效的分子转化体系,为进一步开展此病菌与其寄主的分子互作研究打下基础。     

链格孢（Alternaria alternata）在枣、梨和苹果果实上的致病性分化研究

链格孢（Alternaria alternata）可侵染多种果树引起产前及产后果实黑斑病,造成严重的经济损失。不同果树来源的链格孢是否能交互传染还不清楚。本文探讨了引起北方枣、梨和苹果果实黑斑病的链格孢在这3种果实上的致病性分化和交互致病性,明确其交互传染特性。从北方不同地区果园采集枣、梨和苹果的黑斑病病果样品,通过组织分离法进行病原菌的分离,然后进行纯化及鉴定。利用离体果实接种法对分离到的各个病菌分别在枣、梨、苹果的果实上进行致病性测定,分析了其致病性的差异。结果显示：从3种病果实上共分离出45株链格孢,其中对枣、梨和苹果表现出强致病性的分别为5、11、7株,表现为弱致病的分别为17、8、20株;对3种果实的致病性均在次强等级以上的有6株,致病性均为弱等级的有3株,而在3种果实上致病性等级表现为次强等级以上的菌株有30株,占到总菌株的66.6%。总之,枣、梨和苹果病果上的链格孢存在致病性分化现象,并在这3种果实上是可以交叉侵染致病,互为侵染源。因此,在病害防治方面,临近的不同果园对黑斑病需联防联治。     

番红花链格孢菌的分离及其生物学特性研究

从番红花球茎中分离到一种新的内生真菌,经形态学和生长特性等研究初步鉴定其为半知菌类链格孢属链格孢Alternaria alternata(Fr.:Fr.)Keissler.该菌能单独引起番红花球茎腐烂,与青霉菌互作时腐烂程度加重.环境和营养因子对该菌的生长繁殖影响较大:①在10～35℃时,菌丝能生长并形成孢子,最适生长繁殖温度为28℃,孢子的致死温度为65℃;②在pH为4.0～7.0时,菌丝生长、孢子形成和萌发均良好,最适pH值为6.0;③当空气相对湿度(RH)高于80%时,菌丝才能生长并形成孢子,RH高于85%,孢子才能萌发;④能直接利用葡萄糖和蔗糖,淀粉和甘油需分解后才能被良好利用;⑤氮源以有机态氮和硝态氮为佳,铵态氮对其生长繁殖有抑制作用.     

链格孢菌产细交链孢菌酮酸条件的优化研究

鉴于链格孢霉毒素细交链孢菌酮酸（TeA）对防治月季长管蚜有明显效果,为了进一步开发利用TeA,对1株链格孢菌（编号5390）产TeA的条件进行研究,通过单因素试验的方法,研究了不同培养基、不同培养温度、不同培养时间及不同光照条件对TeA含量的影响,在此基础上用响应面对链格孢菌产毒条件进行优化。结果表明产TeA的最佳条件为：理查培养基,黑暗培养,温度30 ℃,培养时间29 d。在此条件下进行试验验证,TeA含量为14.99 μg/g,与模型预测接近。对链格孢属真菌产TeA的培养条件进行筛选,探索真菌培养方式获得链格孢菌毒素TeA的方法,将有利于TeA的进一步开发利用。     

高粱链格孢叶斑病病原菌鉴定

对高粱叶片上的1种叶斑病进行了病原菌鉴定。病原菌在PDA平板上生长迅速,菌丝边缘白色、中央灰绿色;分生孢子串联成链状,褐色,单个呈近圆柱状或倒棍棒状,有横隔膜2~7个,纵隔膜0~4个,鉴定为链格孢属(Alternaria)真菌。     

链格孢菌毒素细交链孢菌酮酸在土壤中的降解研究

细交链孢菌酮酸是病原真菌链格孢菌（A lternaria sp．）产生的主要毒素之一,在霉变的粮食、感病的植物和腐烂的水果中都能检测到,其具有较强的动物毒性,给食品安全带来一定的隐患。分别在实验室和大田条件下对链格孢菌毒素细交链孢菌酮酸在土壤中的降解动态进行了观察。结果表明,在实验室条件下,微生物对细交链孢菌酮酸在土壤中的降解影响较大,光照的影响较弱,不灭菌条件下,其半衰期小于10d,加药10d时,其降解率就大于50％;灭菌条件下,其半衰期大于30d,加药40d时,其降解率才超过50％。土壤含水量的增加和土壤温度在一定范围内的升高可促进其降解,土壤含水量为12．5％-50％,其半衰期为11．38-5．14d,加药10d时其降解率为38．98％-62．14％,温度为20—40℃时,其半衰期为14．26-5．11d,加药10d时其降解率为36．94％-62．45％。田间研究表明．细交链孢菌酮酸在自然条件下降解的半衰期约为3．22d,20d后就可完全降解。可认为细交链孢菌酮酸属于易降解类物质。     

采自紫茎泽兰的5个链格孢菌菌株致病性和若干特征的比较

链格孢菌是紫茎泽兰的1种致病真菌。利用植物病理学方法和RAPD技术，比较研究了采自紫茎泽兰上的5个链格孢菌菌株的形态、遗传多样性、生长状况、致病性和产毒素能力。结果表明，5个菌株在上述5个方面均存在差异，其中，菌株501具生长速度快、致病性强和产毒素能力高等特点，PCR谱带也存在明显特征，被确定为最具潜力的菌株。此外，致病性与生长速度和产毒素能力存在一定的正相关性。     

银杏内生链格孢菌GI009生物学特性研究

对银杏内生链格孢菌（Alternaria alternatavar．GI009）进行了生物学特性的研究。结果表明，温度、pH值、光照对其生长和产孢有一定的影响。链格孢菌最适宜的温度为25℃，4℃和37℃几乎不能生长。最适宜pH值为5．0-9．0。产孢量以25℃连续黑暗培养最多。10种供试碳源均能明显促进链格孢菌的生长，但对不同碳源利用上有一定差异。在10种供试氮源中，除L-谷氨酸外，9种氮源均能明显促进链格孢菌生长。硝酸钠组菌落生长直径最大，醋酸钠组菌落生长较差，对不同碳源利用有较大差异。     

苹果斑点落叶病菌的生物学特性

苹果斑点落叶病菌是ＡｌｔｅｒｎａｒｉａｍａｉｌＲｏｂｅｒｔｓ的强毒株系，该菌生长发育温度范围是５～３５°Ｃ，最适温度为２８℃。在ｐＨ３～９之间的培养基上生长良好，但以４．５～６．０为最佳。各光照处理对菌落的形成差异较明显，以黑暗与日光灯交替处理病原茵生长最快。该茵在ＰＳＡ、ＰＤＡ培养基上生长速度快，且产孢呈大。病原菌能有效地利用碳源，以萄葡糖最佳，蔗糖次之。氮源以牛肉胨最好，尿素最差，分生孢子萌发温度范围在５～３５℃，最适萌发温度为２５℃。在湿度试验中，当相对湿度高于８５％时，孢子萌发率逐渐提高。该菌孢子致死温度为５５℃。     

40%月菌胺原药对苹果斑点落叶病菌的室内活性测定

在室内采用菌丝生长速率法测定了40%月菌胺原药对苹果斑点落叶病病原菌的抑制效果。结果表明:40%月菌胺原药对苹果斑点落叶病病原菌的EC50为7.58μg/mL,具有显著的抑制作用,是一种具有生产应用前景的杀菌剂品种。     

基于Eaxent生态位模型预测苹果斑点落叶病菌在云南省的潜在分布

[目的]了解苹果斑点落叶病菌(Alternaria mali Roberts)在云南省的适生区范围。[方法]利用苹果斑点落叶病菌在云南省的分布点数据和环境数据建立了Maxent生态位模型,并通过将其投影到地理空间预测了该病菌在云南省的潜在分布范围。[结果]苹果斑点落叶病菌在云南的潜在分布区为云南省中部和北部的大部分地区。最冷月份最低温对该病原菌的预测分布有重要影响,最冷季度平均温度次之。经ROC曲线分析法验证得出AUC值为0.998,表明预测结果是可靠的。[结论]为防止苹果斑点落叶病菌的传播和科学评估其危害提供了参考。     

我国苹果斑点落叶病菌携带dsRNA分析及一种dsRNA病毒的鉴定

【目的】苹果斑点落叶病在我国各苹果主产区均有发生,给苹果产业造成了严重的经济损失。苹果斑点落叶病是由链格孢苹果专化型（Alternaria alternata f. sp. mali）侵染引起的一种气传病害。本研究旨在探明我国苹果斑点落叶病菌携带dsRNA的情况,为田间防治斑点落叶病提供新的生防资源,并为病毒的多样性以及进化研究提供新的认识。【方法】从全国8个省份采集有典型症状的组织样本,通过组织分离和单孢分离法获得纯培养;通过dsRNA的提取及凝胶电泳明确我国苹果斑点落叶病菌携带dsRNA的情况;通过菌株培养特性、菌丝生长速率、在果实及叶片上的致病力测定揭示携带dsRNA病原菌的生物学性状;通过高通量测序技术、分子克隆技术对QY-2菌株携带的dsRNA病毒进行全基因组序列、基因组结构和系统进化分析。【结果】自我国苹果产区获得102株苹果斑点落叶病菌菌株的纯培养,通过dsRNA的提取及凝胶电泳明确了5个菌株带有明显的dsRNA条带,携带的dsRNA分为4种类型,类型I（菌株YT-3-7）dsRNA在8、2.5和1.5 kb左右;类型II（菌株SJZ-4）dsRNA在8 kb左右;类型III（菌株QY-2）dsRNA在3和0.8 kb左右;类型IV（菌株CL-2-6和SQ-1-1）dsRNA在2.5和1.5 kb左右。含有dsRNA的菌株培养性状多样,菌落特征、生长速率与dsRNA携带与否及类型没有明显的关系,含有dsRNA的菌株大多属于弱致病力菌株。QY-2在叶片和果实上的致病力均最弱,确定其携带的dsRNA病毒基因组包括5个dsRNA片段,分别为dsRNA1—dsRNA5,片段大小依次为3 665、3 054、2 824、2 819、831 nt,提交至GenBank,登录号分别为MK672910、MK672913、MK672912、MK672911、MK836314。编码蛋白的分子量依次为124、83、84、83、13 kD。经系统进化关系分析,与Alternaria alternata chrysovirus 1遗传关系最近,确定其为产黄青霉病毒科（Chrysoviridae）、β产黄青霉病毒属（Betachrysovirus）的Alternaria alternata chrysovirus,暂定命名为Alternaria alternata chrysovirus 2（AaCV2）。【结论】我国苹果斑点落叶病菌携带dsRNA群体多样,dsRNA的有无及类型与寄主病原菌培养性状没有明显相关性,携带dsRNA的菌株多为弱致病力菌株,致病力最低的QY-2菌株携带AaCV2。该菌株的弱致病力可能具有潜在的应用价值,可为苹果斑点落叶病提供新的生防资源。     

白菜黑斑病菌（Alternaria brassicae）菌丝生长和毒素产生条件的研究

对白菜黑斑病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｂｒａｓｓｉｃａｅ）不同菌株的营养生长和产毒条件的研究结果表明，白帮菌系（ＡＢＷ）与青帮菌系（ＡＢＧ）的生物学特性有一定的差异，同一菌系菌株间差异不显著，其中ＡＢＷ菌丝生长的最佳条件是２０～２２℃、ｐＨ４、光照１２ｈ／ｄ、间歇振荡和以蔗糖（浓度为３％）为Ｃ源；而毒素产生的最佳条件是１３～１５℃、ｐＨ６、黑暗、静止和以葡萄糖（浓度为１０％）为Ｃ源。ＡＢＧ菌丝生长的最佳条件是１３～１５℃、ｐＨ４、光照１２ｈ／ｄ、全天振荡和以蔗糖（浓度为３％）为Ｃ源；而毒素产生的最佳条件是１３～１５℃、ｐＨ４、黑暗、静止和以葡萄糖（浓度为５％）为Ｃ源。研究还发现，相同条件下ＡＢＧ的菌丝生长速度均大于ＡＢＷ，而产毒量却较为复杂。青帮品种比白帮品种白菜更易感染白菜黑斑病菌。此外，白菜黑斑病菌生长后的改良Ｆｒｉｅｓ培养基ｐＨ值均有变小的趋势，而且随着菌丝生长量的增加变化幅度逐渐增大。     

苹果斑点落叶病菌的分离及其对杀菌剂的敏感性

为明确苹果斑点落叶病菌的抗药性现状,采用组织分离法从罹病苹果叶片分离出病原菌,并测定了其对四种杀菌剂的敏感性。结果表明:苹果斑点落叶病菌对扑海因、速克灵和乙磷铝相对较敏感,其平均EC50值分别为0 2885μg·mL-1、1 2483μg·mL-1和5 9912μg·mL-1;而对代森锰锌相对不敏感,平均EC50达40 4997μg·mL-1。     

生长季苹果园冠层空气中斑点落叶病分生孢子飞散动态

通过对生长季苹果园冠层空气中苹果斑点落叶病菌分生孢子逐日和逐小时的捕捉，同时记载空气温度，相对湿度和降雨等气象数据，分析发现，6至7月份为整个生长季中孢子飞散的高峰期，影响孢子飞散的主要气象要素为降雨和风，一天中孢子飞散的动态是昼多夜少，9：00-22：00孢子飞散量占全天的87.2%，孢子飞散的最高峰为15：00-16：00，各小时孢子飞散与相对湿度呈显著负相关，而与温度呈显著正相关。     

沤肥浸渍液对苹果斑点落叶病的防治研究

:1995～ 1996年利用沤肥浸渍液对苹果斑点落叶病进行先期预防 ,取得了较好的效果 ,与清水对照相比 ,所用沤肥浸渍液的防效均在 80 %以上 ,且效果优于同期处理的多菌灵、高美施。采用悬滴法对苹果斑点落叶病孢子在各类沤肥浸渍液中的萌发率进行测定 ,与清水对照相比 ,各浸渍液对孢子萌发的抑制率均在 70 %以上 ,最高达 84 .5%。     

苹果感染斑点落叶病菌后几种酶活性的变化

研究了苹果品种秦冠(高抗)和富士(高感)接种斑点落叶病菌(A lternaria a lternata f.sp.m a li)后叶片内5种酶活性的变化。结果表明,苹果接种斑点落叶病菌后超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和多酚氧化酶(PPO)变化趋势相似,都是先升高后降低;苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)活性变化差别较大,秦冠的POD活性峰值是富士的182%,PAL活性峰值是富士的478%,均达到极显著差异。初步认为PAL和POD在抗斑点落叶病中有很大的作用。