抗三种杀菌剂灰霉菌株可溶性蛋白和酯酶的电泳图谱研究

比较研究了对多菌灵、速克灵、乙霉威表现不同抗性的灰霉病菌菌株的可溶性蛋白和酯酶的电泳图谱。结果表明:对多菌灵、速克灵、乙霉威产生抗药性的田间突变菌株,其可溶性蛋白质电泳图谱中谱带数均比敏感菌株明显减少;抗多菌灵、速克灵的灰霉病菌田间突变菌株,其酯酶电泳图谱中酶带数均较敏感菌株减少。而对乙霉威表现抗性的灰霉病菌菌株,其酯酶电泳图谱类型均与其相应的敏感菌株的酯酶电泳图谱类似,两者间差异主要表现为个别酶带强弱的变化,酶带种类及酶带数差异很小;在灰霉病菌对多菌灵、速克灵抗性菌株的酯酶电泳图谱中都存在一些抗性菌株特有的酶带,Rf0.83酯酶带为抗多菌灵灰霉病菌菌株所特有,Rf0.45和Rf0.83两条三级酯酶带为抗速克灵灰霉病菌菌株所特有。这些酯酶带的出现与抗性的产生直接相关。     

黄瓜灰霉病菌对多菌灵、速克灵及乙霉威的抗性检测

为了明确山西省晋中地区黄瓜灰霉病菌对多菌灵、乙霉威及速克灵的抗性水平,运用组织分离法从太谷、祁县和平遥的罹病黄瓜上分离到30个灰霉病菌菌株(Botrytis cinerea Pers.),并用最低抑制浓度法(MIC)和菌落直径生长法分别测定了这30个菌株的抗性频率和抗性水平。结果表明,30个菌株对乙霉威、多菌灵和速克灵的抗性频率分别为70%,80%和90%;3种杀菌剂敏感菌株的平均EC50分别为0.036 9,0.057 4,0.269 2μg/mL;3种杀菌剂抗性菌株的平均抗性倍数分别为66.0倍、421.5倍和55.3倍。表明山西晋中地区黄瓜灰霉病菌对乙霉威和速克灵的抗性达到中抗,对多菌灵的抗性为高抗。建议在该地区生产中停止使用多菌灵,减少使用乙霉威和速克灵或与其他药剂混合使用。     

番茄灰霉菌的多重抗药性研究

从山东3个用药情况不同的保护地番茄上，采集番茄灰霉菌进行了番茄灰霉菌（B.cinerea）对3种不同类型杀菌剂的抗性监测，在用药历史长、水平高的寿光丰城，灰霉病对多菌灵、腐霉利、乙霉威产生多重抗性的菌株出现频率为53．7％，对多菌灵、速克灵产生双抗的菌株出现频率为100％；在泰安良庄，上述菌株出现的频率分别为6．8％和72．7％；在新建棚区新泰龙廷均为敏感菌株。所有的多菌灵抗性菌株均属高抗菌株（EC50＞100mg/L），速克灵抗性菌株均属低抗菌株（1mg/L＜EC50＜10mg/L），乙霉威抗性菌株均属低抗菌株（O．9mg/L＜EC50＜4mg/L）。在无药PDA培养基上连续培养8代后，对多菌灵、腐霉利、乙霉威的抗性程度并未降低。分别在PDA培养基和黄瓜子叶上进行了高体适合度和致病力的测定。     

蔬菜灰霉病菌对速克灵抗药性变异研究

蔬菜灰霉病的灰葡萄孢（Botrytiscinerea）分生孢子经紫外光灯照射,可获得10-4～10－5频率的速克灵抗药性突变体。获得的8个抗性突变体的抗性水平平均EC50值为11．9776μg／ml,EC90值为226．5361μg／ml。抗性突变体的酯酶同工酶港带比其亲本敏感菌株谱带多2～4条,其中Rf＝0．38的谱带是抗性菌株所拥有而敏感菌株所共同缺乏的。抗性菌株对速克灵抗药性能稳定遗传,具有与亲本菌株相同的繁殖能力和致病性。突变体和抗性菌株苗期抗、感测定结果表明,对速克灵、多菌灵杀菌剂表现双重抗性,但对灰霉克、利得杀菌剂不存在交互抗性。     

灰霉病原菌对速克灵的抗性监测

经从山西晋中、晋南、晋东南、晋北4地区22个市县采集分离到的188个灰霉病菌菌株[BotrytiscinereaPers.]对速克灵的抗性鉴定,得到速克灵敏感菌株76个,抗性菌株112个;并对4地区的抗性频率进行了测定。毒力测定结果显示:敏感菌株的平均EC50值为0 2307μg·mL-1,EC90值为3 1898μg·mL-1;抗性菌株的平均EC50值为2 7921μg·mL-1,EC90值为16 7015μg·mL-1,抗性倍数为12 10倍。结果表明,灰霉病菌对速克灵的抗性表现为低水平抗性。且MIC的室内测定表明,速克灵抗性菌的MIC值均小于25μg·mL-1,这与生产中灰霉病菌对速克灵的低水平抗性是一致的。     

番茄灰霉病菌对速克灵的抗性检测

对来自安徽省合肥、蚌埠、六安、和县的 5 4个番茄灰霉病菌株进行了对速克灵的抗性测定 ,并分析了番茄灰霉病菌生长特性与抗药性、致病力的相关性。结果表明 ,4个菌株为速克灵高抗型 ,占 7.4% ;无中抗型 ;5 0个菌株为敏感型 ,占 92 .6%。各菌株间生长速度、菌核干重差异较小 ,产孢量差异较大。产孢量与菌核干重相关极显著 ,其余性状间相关皆不显著     

灰霉病菌对多菌灵和乙霉威抗性研究

从１９９６年３～４月辽宁省主要蔬菜种植区采集的番茄、黄瓜灰霉病果上,分离得到２８２个灰葡萄孢霉（ＢｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａＰｅｒｓ．）菌株,测定了其对多菌灵和乙霉威的敏感性。结果表明,８７．２％的菌株为抗性菌株（ＢｅｎＲ）,１２．８％的菌株为敏感菌株（ＢｅｎＳ）。中抗（ＢｅｎＩＲ）和低抗（ＢｅｎＷＲ）菌株为优势菌株。抗性菌株与敏感菌株在生长速率、产孢能力及致病力等方面无明显差异。作为苯并咪唑杀菌剂负交互抗性药剂而开发的Ｎ－苯基氨基甲酸酯杀菌剂乙霉威,对ＢｅｎＨＲ菌株具有优良的抑制作用,但对ＢｅｎＷＲ,ＢｅｎＩＲ和ＢｅｎＳ菌株的抑制作用很小。由多菌灵和乙霉威复配而成的多菌灵可有效控制ＢｅｎＨＲ和ＢｅｎＳ菌株对黄瓜子叶的侵染,但不能控制ＢｅｎＷＲ和ＢｅｎＩＲ菌株的侵染。     

番茄灰霉病菌对几种杀菌剂的抗药性测定

采用生长速率法分别测定了采自兰州市和凉州区2个地方的9个灰霉病菌株对农利灵、速克灵、扑海因、施佳乐4种杀菌剂的抗性表现,结果表明,9个灰霉病菌株共有8种抗性类型,分别是RlrIlrPlrDs、RlrIsPsDlr、RlrIlrPlrDlr、RlrIlrPsDlr、RsIsPsDlr、RmrIlrPlrDlr、RlrIsPlrDlr、RlrIsPsDs,对农利灵、扑海因、施佳乐、速克灵具有抗性的菌株分别占试验总菌株数的89%、44%、44%、78%。     

灰霉克防治大棚蔬菜灰霉病试验

２８％灰霉克ＷＰ系山东省农科院植保所和烟台万润精细化工有限公司共同研制的对蔬菜灰霉病菌有特效的低毒、低残留新型复配杀菌剂,经室内毒力测定,其ＥＣ５０值为００８６０ｍｇｋｇ,共毒系数为３２５０３。苗期盆栽人工接种抗性菌株９５－２试验,灰霉克４００倍、６００倍、８００倍的防效分别为８５４％、７６３１％和６７２％,极显著优于５０％速克灵６００倍的防效（２８３４％）。田间试验表明,灰霉克４００倍、５００倍、６００倍、８００倍对大棚番茄灰霉病的防效分别为９５７７％、９５５１％、８３７２％、７５８％,优于５０％速克灵６００倍的平均防效（６３１０％）。灰霉克５００倍对大棚黄瓜、辣椒、芸豆灰霉病的防效分别为９６８３％、８４６５％、９０８６％。     

草莓灰霉病菌对速克灵的抗性研究

速克灵对草莓灰霉病具有很好的防治效果,但长期、单一使用很容易使草莓灰霉病菌产生抗药性。为合理使用这类杀菌剂,延缓或防止抗药性的产生,笔者通过UV-C诱变草莓灰霉病菌敏感菌株CF1获得了对速克灵具有高抗性的突变株CF1-1和CF1-2,并对抗性突变株的生长量、产孢量和致病力进行了研究,结果表明:CF1-1与CF1-2对速克灵抗性程度高,抗性水平与敏感菌株相比分别增加了484.6倍和911.0倍。抗性菌株在无速克灵的培养基上菌丝生长较敏感菌株弱,产孢量也明显少于敏感菌株;但其引起草莓离体叶片发病较敏感菌株重,病斑大且边缘颜色深;薄片黄瓜测定结果也表明,在无速克灵的情况下,敏感菌株CF1引起发病较重;而在有药条件下CF1受到一定抑制,但抗性菌株仍能致黄瓜片发病。将抗性菌株连续培养7代后对速克灵的抗性仍是相对稳定的。     

番茄叶霉病菌对氟硅唑抗药性的初步研究

2002—2003年，从辽宁省不同地区番茄保护地采集番茄叶霉病病叶，经单孢分离共获得叶霉病菌51株。采用菌丝生长速率法测定了各菌株对氟硅唑的敏感性。结果表明：在测定的番茄叶霉病菌中，中抗菌株占15．69％，高抗菌株占11．76％。在对不同抗性菌株生物学特性比较中发现，高抗菌株和敏感菌株在菌丝生长速率、菌丝鲜重及渗透敏感性方面均达到显差异水平，说明高抗菌株的适合度下降。氟硅唑与速克灵、嘧菌酯无交互抗药性，但与腈菌唑、三唑酮有交互抗药性。     

对多菌灵、速克灵具多重抗性的灰霉病菌菌株性质的研究

从江苏常州草莓上分离到的 Botrytis cineren 菌株 B205对多菌灵、速克灵均表现高度抗性。多重抗性菌株在含多菌灵或速克灵的 PSA 培养基上菌丝生长很少受抑制,在无药的 PSA 培养基上菌丝连续培养8代后,抗性程度并不下降,只表现生长速率有所降低;对扑海因呈交互抗药性,但对福美双、克菌丹、百菌清、退菌特、粉锈宁等杀菌剂的反应与敏感菌相似;该多重抗性菌的产孢能力明显低于敏感菌。     

小麦赤霉病的生物防治研究 Ⅰ.拮抗芽孢杆菌的分离、筛选、鉴定和防病效果

从小麦叶片和穗部分离、筛选出对小麦赤霉病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）有很强拮抗作用的芽孢杆菌菌株Ｂ４、Ｂ６,经室内离体叶、穗防效测定和田间小区防效试验,二菌株对小麦赤霉病有较好防效,与清水对照相比,相对防效达６８４％、６８９％,接近多菌灵的防效（７０４％）。对Ｂ４、Ｂ６菌株进行形态和生理生化特征的分类鉴定,二菌株均为枯草芽孢菌（Ｂａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）     

灰葡萄孢对速克灵抗性的研究

从江苏各地采集番茄等15种蔬菜灰霉病标本,经分离获灰葡萄孢(Botrytis cinerea Pers.)127株。以速克灵有效成分5μg·mL~(-1)为标准,检测灰葡萄孢对速克灵的抗性。结果表明:病菌抗速克灵菌株频率平均为11.0％。抗性菌株中,85.7％属低抗水平,EC_(50)值在2.21～6.67μg·mL~(-1)之间。但菌株D_(1-3)抗药性水平极高,EC_(50)和EC_(95)分别达263.78和6000μg·mL~(-1)以上,EC_(95)值约是敏感菌株的1400倍。抗性菌株转管培养15和30代后,抗性水平仍较稳定。抗性菌株在菌丝生长速度、分生孢子与菌核形成以及对番茄致病力等方面无明显规律性,但高抗菌株D_(1-3)具有很强的生长、繁殖能力和致病力。     

黄瓜灰霉病菌（BotrytiscinereaPers.）田间抗药性的测定

经过室内毒力测定，９种杀菌剂中的双灵、束灵和扑海因对Ｂ．ｃｉｎｅｒｅａ的毒最高，ＥＣ５０依次为０．８２μｇ／ｍＬ、０．８６μｇ／ｍＬ和１．１０μｇ／ｍＬ。多菌灵对该菌的毒力最差，ＥＣ５０高达４７８．８５μｇ／ｍＬ。     

紫外光诱导核盘菌产生的抗速克灵突变菌株特性研究

核盘菌 (Sclerotiniasclerotiorum)经紫外光诱导照射容易产生对速克灵的抗性突变体。抗性突变体Wr- 4- 2在含速克灵 10 0 0mg/kg的PDA平板上 ,菌丝生长很少受到抑制 ,且气生菌丝茂密 ,形成菌核大而饱满 ;在无药PDA平板上其生长速率明显低于敏感菌株 ,菌核形成晚且少 ,但菌核大而饱满。接种黄瓜薄片测定其致病力 ,在无药情况下其致病力也明显低于敏感菌株 ,接种敏感菌株的黄瓜薄片 48h完全腐烂 ,接种突变菌株的黄瓜片病斑直径仅为 18 5mm。在 10 0 0mg/kg速克灵浸泡的黄瓜片上 ,敏感菌株受到完全抑制 ,突变菌株则基本不受抑制。Wr-4- 2对扑海因有高度交互抗性 ,但对福美双、百菌清、多菌灵的反应与敏感菌株相似。Wr- 4- 2在无药PDA平板上菌丝转移连续培养 2 0代后 ,其抗性不丧失     

稻瘟病菌无性重组研究

在离体条件下 ,将包含了 3个小种 (ＺＡ49,ＺＤ1,ＺＦ1)的 4个稻瘟病菌 (Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅｇｒｉｓｅａ)菌株分别对稻瘟灵和对多菌灵进行抗药性诱变 ,经筛选获得了抗性在单孢无性系后代可稳定遗传的抗稻瘟灵突变株 (ＩＰＴｒ)和抗多菌灵突变株 (ＭＢＣｒ)。将营养体亲和的携带抗稻瘟灵对多菌灵敏感(ＭＢＣｓＩＰＴｒ)标记的单分生孢子株与携带抗多菌灵对稻瘟灵敏感 (ＭＢＣｒＩＰＴｓ)标记的单分生孢子株在白米玫瑰红培养基上 ,2 5℃黑暗中对峙培养 1 8ｄ ,配对菌株菌落交界处出现肉眼可见的菌丝融合带。 4个小种间营养体可亲和菌株配…     

核盘菌对多菌灵抗药性及其发展

测定了核盘菌（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）不同菌株对多菌灵的抗性水平ＥＣ５０，观察了其中一个菌株的抗药性发展变化情况，以了解药剂本身对抗药性的发展是否具有诱导作用。结果表明：所测不同菌株对多菌灵的抗性水平相似，同属于敏感型；经多代的多菌灵处理以后，其抗药性有所提高，表现为ＥＣ５０的提高和在含多菌灵培养基上生长能力的增强。     

番茄灰霉病菌的生物学特性研究

番茄灰霉病菌（Ｂａｔｒｙｌｉｓｃｉｎｅｒｅａ）￣［１，２，３］菌丝生长发育适温２０～２５℃。病菌对碳源的利用以果糖、木糖最佳。氮源利用以蛋白胨和牛肉胨最佳。菌丝生长对光照要求不强。病菌的分生孢子萌发最适宜温度为２５℃，适宜ｐＨ值为５．２９～６．４１。在不同的营养液里以牛肉胨、麦芽糖、木糖、蔗糖液中孢子萌发最好。孢子萌发对光照选择性不强，各光照处理均能萌发。孢子萌发对湿度要求较高。根据室内药效测定以速克灵和扑海因抑菌作用最强。     

紫外线对非致病尖孢镰刀菌的诱变作用

以紫外线照射非致病尖孢镰刀菌３１６菌系，随着照射时间的增加，分生孢子的存活数逐渐减少，照射时间与存活菌株对农抗１２０和速克灵的变频率间没有一定的相关性。对农抗１２０抗性增加的菌株仍保持３１６定殖西瓜幼苗导管的能力，对瓜苗的促生作用以及非致病性。在药板上和紫外线重复照射存活菌株后，获得的菌株对两种农药的变异频率均有提高，对农抗１２０的抗性有所下降，对速克灵的抗性显著提高。