卡那霉素抗噬菌体生产菌株的选育及应用

从染上噬菌体的卡那霉素发酵液中分离纯化出P8噬菌体，并对卡那链霉菌进行诱变、纯化感染噬菌体后得到的再生菌并再进行分离纯化；最后，对再生菌进行抗噬菌体性能测定及生产卡那霉素效价测定，检测结果说明各项指标都达到要求，效价在1000u/ml以上。把抗噬菌体菌株应用在发酵生产中，连续一年多，生产近千批产品没有染上噬菌体，经济效益极为显著。     

猪传染性胸膜肺炎的诊治

如皋市搬经镇一养猪户任某到镇兽医站求诊，经询问得知：半月前，该养猪户从外县不同的农户家中购买了一批苗猪，共计158头。买回后的第三天就发现有的猪不食，有的猪喘气，第五天死亡了两头。先后使用了庆大霉菌、卡那霉菌等治疗，效果不明显，至接诊日累计死亡猪27头。     

5株抗常见动物病原菌的优良拮抗放线菌的分类鉴定

为寻找新的抗菌微生物,本研究从西北部分地区盐渍土中分离到5株具有拮抗作用的放线菌1202、02-F-17、66J03、3501及3010,其代谢产物对引起鸡大肠杆菌病的大肠埃希氏杆菌(Escherichia coli)和引起牛隐性乳房炎的无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)等多种动物病原菌均有较强的抑菌作用.通过对其进行形态学特征、生理生化特性、细胞壁化学组分以及16S rDNA序列等多相分类研究,初步确定其分类地位分别为:5株菌均属链霉菌,其中1202与戈壁三素链霉菌(Streptomyces gobitricini)最接近,02-F-17与晶体链霉菌(Streptomyces cavis-cables)相近,66J03与易变链霉菌(Streptomyces mumbilis)相近,3501最接近红淡紫灰链霉菌(Streptomycesrubrolavendulae),3010与比基尼链霉菌(Streptomyces bikiniensi)相近.     

天然鼠源噬菌体单链抗体库的构建

噬菌体展示技术是一项利用丝状噬菌体体外表达外源基因的新技术。它模拟动物体内抗体的形成过程，将抗体片段呈现在噬菌体表面，建成噬菌体抗体库，用与亲和层析相类似的原理，从抗体库中筛选出特异性噬菌体抗体，为制备人和动物用抗体提供了极为有效的手段。单链抗体是利用基因工程技术，由一个DNA片段(Linker)将抗体重链、     

奇异根串珠霉菌拮抗放线菌的筛选与鉴定

本实验以奇异根串珠霉菌（Thielaviopsis paradoxa）为目标菌,通过平板梯度稀释法从槟榔根系土壤中分离获得放线菌,利用平板对峙法筛选对奇异根串珠霉菌具有抑菌活性的菌株,并通过发酵液复筛出4株抑制效果达90%以上的菌株,编号为D2-3、G1-12、D2-9和G9-4。通过培养特征、形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析对抑制率99.76%的菌株D2-3进行分类鉴定,初步鉴定该菌株为一株链霉菌,与桑树链霉菌（Streptomyces samsunensis）16S rDNA序列相似性为99.41 %。     

家蚕丝素固定化链霉菌的生物化学特性

脱胶蚕丝经不同处理制得多孔碱化丝素和丝素粉末 ,采用吸附和戊二醛交联法将链霉菌 (StreptomycesflavovirensA8)固定 ,制得不同的固定化链霉菌 (Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ )。实验结果表明 :其固定化链霉菌Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的米氏常数分别为Km1=2 4 0 73× 10 -2 mol/L ,Km2 =2 5 36× 10 -2 mol/L ,Km3 =2 772 3× 10 -2 mol/L ,而游离链霉菌的Kmf 为2 3715× 10 -2 mol/L ;固定化链霉菌Ⅰ的酶活力半衰期在 6 4d以上 ,固定化链霉菌Ⅱ和Ⅲ的半衰期最长达 6 8d ;固定化链霉菌对尿素有较强的抵抗能力 ;Co2 + 、Mg2 + 对链霉菌葡萄糖异构酶有激活作用 ,而Fe3 + 和Ca2 + 是葡萄糖异构酶的抑制剂。     

螺旋霉素高产菌株的选育

以螺旋霉素链霉菌(Streptomyces spiramyceticus)SPM-14078菌株作为出发菌株,利用常压室温等离子体(ARTP)诱变、紫外线(UV)诱变和亚硝基胍(NTG)诱变的方法对菌株进行诱变处理,比较3种方法的诱变效果,通过诱变筛选出1株遗传稳定性好且具有Co~(2+)和豆油耐受性、噬菌体抗性的菌株SPMAR-1603,其发酵效价比出发菌株提高了294.9%,此结果对螺旋霉素高效生产、品质提升具有重要意义。     

链霉菌Streptomyces candidus粗提物促进白血病细胞株K562凋亡的研究

观察链霉菌Streptomyces candidus发酵产物对白血病细胞株K562的抑制作用。采用MTT法和流式细胞术(Annexin V-FITC双染法)分别检测链霉菌粗提物(0.5 mg/mL、1.0 mg/mL、1.5 mg/mL、2.0 mg/mL及4.0 mg/mL)处理K562细胞从24 h,48 h及72 h 3个时间段所发生的凋亡。结果发现,链霉菌粗提物可促进K562细胞凋亡。随着链霉菌粗提物可作用浓度的升高,K562细胞的凋亡率逐渐升高;随着链霉菌粗提物可作用时间的延长,K562细胞的存活率也逐渐降低。表明链霉菌粗提物可显著促进白血病细胞株K562细胞凋亡。     

鼠源性抗雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体库的构建

利用雄鼠脾细胞免疫6~7周龄C57BL/6雌鼠,加强免疫后取脾细胞,TRIZOL法提取细胞总RNA,并逆转录合成cDNA第一条链。以其为模板,利用特异性Ig基因的引物PCR扩增出重链Fd片段和κ链基因,并将扩增出基因重组到噬质粒载体pComb3中,重组噬质粒转化大肠杆菌XL1-Blue中,分别构建κ链基因库和抗体Fab段基因库。分别经蓝白斑筛选,计算转化效率,通过PCR反应和双酶切反应鉴定抗体库的重组率,轻链、重链Fd段基因的重组率均为80%。抗体Fab段基因库经过辅助噬菌体VCSM13超感染,成功构建了鼠源性噬菌体Fab抗体库,并测定噬菌体抗体库的库容和滴度,结果分别为1.5×107,3.2×1011pfu/mL。对噬菌体抗体库的18个克隆进行ELISA分析,结果显示以雄鼠脾细胞作为抗原时,有9个克隆含有雄性特异性的噬菌体抗体,而以雄鼠睾丸细胞作为抗原时,有8个克隆与睾丸细胞呈现结合活性。噬菌体抗体库的构建为雄性特异性抗原的鼠源性噬菌体抗体Fab片段的筛选及其应用、雄性特异性抗原和抗体功能性分子基础的研究奠定了坚实基础。     

大肠杆菌vpr基因突变株的构建及其特性鉴定

将重组自杀性质粒PYYVPR转化到含全VPR基因的E.coliMC1061感受态细胞中，利用卡那霉素抗性筛选到6个菌落，经PCR和Southern blot进一步验证，得到一个可靠的vpr同源基因突变株，即MC1061△vpr。该突变株与亲本MC1061具有相似的生长特征。噬菌体裂解试验表明，突变株对VT2噬菌体C43b不敏感，而MC1061敏感，可见大量的蚀菌斑。噬菌体溶原试验表明，MC1061和突变株MC1061△vpr对噬菌体的敏感性无差别。所有这些表明,vpr基因与VT2噬菌体的裂解性有关，可能是编码VT2噬菌体受体蛋白的基因。     

骆驼天然单域重链抗体库的构建与鉴定

构建骆驼非免疫噬菌体抗体库,完成抗体库的鉴定。从未经免疫的健康骆驼的外周血淋巴细胞中提取总RNA后,特异性扩增骆驼重链抗体可变区(VHH)片段,将其与噬菌粒载体pCANTAB5E连接获得重组子,多次电转感受态大肠埃希菌TG1后获得VHH抗体基因库,并分析其库容量及多样性。结果表明,经过吸附-洗脱的淘选过程筛选出能够与莱克多巴胺人工抗原特异性结合的噬菌体展示纳米抗体。构建的骆驼天然重链单域抗体库的库容量为107,多样性良好,独立克隆所占比例为90%,筛选出针对莱克多巴胺人工抗原的噬菌体颗粒。已成功构建骆驼天然噬菌体重链抗体库,并筛选出抗莱克多巴胺的噬菌体颗粒,为抗莱克多巴胺纳米抗体的表达和莱克多巴胺的免疫学检测奠定基础,并为后续淘选针对特定抗原的单域重链抗体奠定了基础。     

酸奶变质的污染菌群分析及控制研究

导致酸奶变质的最主要原因是污染了酵母菌、霉菌及其它杂菌，其主要表现为酵母菌和霉菌。通过市场随机取样，分析归类鉴定，这两类微生物都普遍存在于各类酸奶中，这充分说明酸奶较适合这些微生物生长繁殖，但生产厂家只要加强生产工艺环节的卫生控制，可以有效地抑制这些微生物在酸奶中的生长繁殖。一、材料与方法１．材料从市场上随机抽取４种品牌１６瓶酸奶。２．内容与方法（１）酸奶中主要污染菌将酸奶无菌条件下处理，分离培养，根据菌落形态特征分类计数。酵母菌培养，样品在链霉菌麦芽汁琼脂培养基上培养（２８℃５天）。霉菌培养：…     

山羊链丝菌病的防治

山羊链丝菌病是一种皮肤病，亦称嗜皮菌病、结毛病wool—rot)，是一种霉菌性皮炎。其特征是带有渗出液的增生性皮炎，浅表皮肤坏死有痂块形成。笔者诊治过35个病例，现将该病的临床症状和防治措施报告如下，以供参考。     

弗氏链霉菌双拷贝串联基因tylF、tylE和tylCV工程菌的构建

为提高弗氏链霉菌对泰乐菌素的产素能力,构建了弗氏链霉菌双拷贝串联基因tylF、tylE和tylCV基因工程菌。本研究以弗氏链霉菌作为出发菌株,并以其全基因组DNA为模板分别扩增tylF和tylE以及tylCV基因、以质粒pSET152为模板扩增强启动子基因permE,采用重叠延伸PCR技术和EcoRV、XbaI双酶切结合的连接方法,构建弗氏链霉菌表达载体pSET152-permE-tylF-tylE-tylCV,并转化至大肠杆菌ET12567,利用大肠-链霉菌属间接合转移技术获得工程菌株。研究结果表明,工程菌株摇瓶效价(14580 u/mL)比出发菌株(11318 u/mL)提高了29%;液相色谱结果显示,工程菌株的泰乐菌素A和泰乐菌素C相对峰面积显著(P≤0.05)高于出发菌株。增加弗氏链霉菌tylF、tylE和tylCV的拷贝数可有效提高泰乐菌素的产量,以及优化组分,为泰乐菌素生产菌的遗传改造提供参考。     

锌元素对微生物合成卡那霉素A水平的影响

主要采用单因子方法设计试验方案,通过对单因素Zn2+的不同加量考查对卡那霉素链霉菌生物合成能力的影响,寻求最适的Zn2+加量。试验最终结果显示,硫酸锌加量在0.04%时,卡那霉素链霉菌生物合成能力达到最佳。     

摩能菌素

摩能菌素(Monensin)是由肉桂淡粉链霉菌产生具有显著特征的酸性抗生物质,1967年由M·E·Haney本等发表。本菌素有良好的抗球虫     

鸡饲料添加新药聚醚类抗生素61477鉴定会在兰州召开

中国农科院于3月3—7日,在兰州召开了抗鸡球虫新药鉴定会,对聚醚类抗生素61477进行了鉴定。鉴定会上,课题研究组公布的抗生素61477产菌素,为白色链霉菌变种,并定名为白色链霉菌疣孢变种(Streptomyces albus var. verrucososporusvar. nov.)。     

天然鼠源噬菌体抗体库的构建及抗鸡堆型艾美耳球虫裂殖子单链抗体的筛选（英文）

从未经主动免疫的BALB/c小鼠脾脏淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR扩增鼠抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,将轻链和重链可变区基因经重叠延伸拼接PCR反应,构建成单链抗体(ScFv)基因。将ScFv基因克隆到噬菌体载体PCANTAB-5E,转化入大肠杆菌TG1中,筛选出阳性克隆,接种于LB培养基,经辅助噬菌体M13KO7拯救,构建天然鼠源噬菌体抗体库,并进行抗体库滴度测定,通过DNA finger printing技术及单链抗体基因序列分析鉴定抗体库的多样性。以堆型艾美耳球虫裂殖子为靶抗原,对构建的噬菌体抗体库进行亲和筛选,将强阳性重组噬菌体克隆感染大肠杆菌HB2151,经IPTG诱导表达可溶性ScFv抗体,并对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot鉴定,用ELISA法鉴定其对堆型艾美耳球虫裂殖子抗原的结合活性。结果表明,天然鼠源噬菌体抗体库成功构建,库容量约为2.50×10~(11) CFU/mol,单链抗体库具有一定的多样性。经过4轮亲和筛选,携带抗鸡堆型艾美耳球虫裂殖子表面抗原的特异性噬菌体抗体得到了富集。特异性ScFv抗体在E.coli中分泌表达,表达产物具有免疫活性。筛选出5个与鸡堆型艾美耳球虫裂殖子抗原结合活性较高的克隆,构建的单链噬菌体抗体库的有效表位具有多样性。本研究为进一步认识鸡球虫的各个发育阶段奠定理论基础,为鸡球虫病免疫控制研究提供参考。     

霉菌与霉菌毒素的危害及防治

人们对霉菌危害的认知往往多限于已经形成的明显病症。例如：禽的曲霉菌病、白色念珠菌病等；另一方面。人们对霉菌滋生和霉菌毒素传播条件的认知，又多限于是高温高湿地区或高温高湿季节。实际上，霉菌及毒素的危害远比人们通常的认知要严重的多，霉菌的扩散与污染也远比人们通常的认知要广泛的多。可能会有人说，我们这个地区从未发生过一例霉菌病或是霉菌毒素中毒症。那只是说明没有出现明显的典型症候或者是出现了而被误指成别的症候了。     

最新杀真菌剂──那他霉素显示威力

Georgia大学的学者们检测了那他霉素（能够抑制酵母菌和霉菌活性但不能抑制细菌活性）的抗真菌活性。从商品禽饲料中分离到霉菌，检测那他霉素对其的抑制性。实验中使用最小抑制浓度５．０８～４０．１mg／L，那他霉素显示了高度的抗真菌活性；能够抑制曲霉菌属的１９１种分离株。而且对产生黄曲霉素的真菌和不能产生黄曲霉毒素的真菌的抑制效果相同。只有在至少１２小时内孢子的浓度达到１２mg／L时，才显示其杀孢子的活性，因此学者们认为，那他霉素对正在生长的真菌的抑制性效果要好于对孢子的抑制性。虽然有人不赞成那他霉素在家禽饲…