兽用疫苗支原体污染的PCR检测技术的建立及应用

根据支原体的16 S rRNA基因设计特异性引物,以兽用疫苗中常见的支原体DNA为模板进行PCR试验,优化反应体系,建立了兽用疫苗支原体污染的PCR 检测方法,并对市场上的兽用疫苗随机抽查检测,其检出率为24.4%(22/90)。结果表明该方法特异性强,灵敏度高,有望成为兽用疫苗支原体污染的检测方法之一。     

鸭瘟活疫苗外源病毒检验方法（鸡检查法）的修订

对二〇〇五年版《中华人民共和国兽药典》中鸭瘟活疫苗外源病毒检验的鸡检查法进行了修订,确定选用9-12周龄SPF鸡,在原药典规定方法的基础上增加低剂量基础免疫程序,并用该外源病毒检验方法对5批鸭瘟活疫苗进行了验证,结果表明修订后的鸭瘟活疫苗外源病毒检验方法可靠,可操作性强。     

微生物法快速检测食品中维生素B12含量的应用研究

本文建立了微生物法测定食品中维生素B12（VB12）含量的快速方法,通过低温保藏测试菌液、缩小试验体积,以达到缩短检测周期、简化操作步骤,提高结果准确性与重现性的效果。同时,本文对如何保证试验的有效性和结果的准确性进行了探讨,总结了相关技术要点,为VB12测定微生物法在常规实验室的建立和应用推广提供了参考。     

集约化猪场不同毒株猪繁殖与呼吸综合征弱毒活疫苗免疫后血液中持续带毒及抗体消长规律研究

某地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与中国高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(hp-PRRSV)同源性极高,为了筛选适合该地区病情的疫苗,指导养殖户生产,试验选择hp-PRRS弱毒活疫苗(JXA1-R株)和PRRS弱毒活疫苗(VR-2332株)作为疫苗候选株,选取30日龄、健康状况良好、群体差异性小的断奶仔猪30头,随机分成A、B和C组,每组10头,A组注射hp-PRRS弱毒活疫苗(JXA1-R株),B组注射PRRS弱毒活疫苗(VR-2332株),C组注射相同剂量生理盐水作对照,免疫前和免疫后14、28、42、56、70、84 d采集血清,通过淋巴细胞计数、血清病毒核酸检测、血清抗体检测等分析猪体内hp-PRRS弱毒活疫苗(JXA1-R株)和PRRS弱毒活疫苗(VR-2332株)免疫应答情况.试验结果显示,淋巴细胞数量方面,仔猪免疫后,淋巴细胞数量均上升,42 d时A、B组均达到最大值,A组为19.3×10⁹/L,B组为16.7×10⁹/L,C组则一直处于原始水平;抗体阳性方面,14 d时A组为80%,B组为60%,C组为0,42 d时A组为100%,B组为80%,C组为0;病毒核酸阳性率方面,14 d时A组为90%,B组为100%,C组为0,42 d时,A组为40%,B组为70%,C组为0,70 d时,A组为0,B组为20%,C组为0.由此可知,hp-PRRS弱毒活疫苗(JXA1-R株)能快速诱导猪发生免疫应答、产生免疫抗体,抗体持续时间长、效价高、稳定性良好,且疫苗毒在体内存在时间短、减毒时间快、安全性高,对所研究地区猪群免疫具有优越效果.     

乳酸杆菌的肠道调节作用及其在动物生产中应用的研究进展

作者从乳酸杆菌对肠道表面的作用、免疫激活作用、对肠道微生态的平衡作用及对代谢的调节作用4个方面介绍了乳酸杆菌对机体的调节作用,并介绍了其在动物生产中的应用状况。本综述重点阐述了乳酸杆菌的作用机制与应用效果,以期为其应用提供参考。     

Evaluation of a Rapid Method for the Determination of Urea in Cow’S Milk

A rapid method for the determination of urea in milk was evaluated. The method employed was a urease/glutamate dehydrogenase procedure where the decrease in absorbante of NADH is monitored spectrophotometrically at 340 nm. The repeatability expressed as a coefficient of variation, was 1.4 % and 0.8 % for whole milk and skim milk, respectively. The accuracy of the method for urea determinations in whole milk was satisfactory (coefficient of variation, 2.6 %). Adding the preservative bronopol (0.02%) to the milk or freezing of the milk samples for one week did not alter urea levels significantly (P > 0.05). The storage of preserved whole milk in a refrigerator for 14 days, however, increased milk urea levels measured by 3.1 % (P < 0.001).It was concluded that the method evaluated is simple, rapid (40–50 samples/h) and yields reliable results also when whole milk is used. Since the determination of milk urea may be useful in assessing the feeding of energy and protein, the method is suitable for integration in the existing milk recording system in Sweden.     

牛奶和羊肉中铅含量测定前处理法的改进与微波消解法的应用

采用微波消解法对牛奶和羊肉样品进行前处理，再用石墨炉原子吸收分光光度法测定其中铅的含量。该法测定的线性范围在0～40ng／mL，相关系数r=0．9997。羊肉和牛奶样品添加回收率为91％～94％。该法不仅准确，可靠，减少了操作带来的误差，而且大大提高了检测效率。     

奶粉及乳制品中双氰胺检测方法研究

用高效液相色谱(HPLC)梯度法(不含盐流动相)和等度法(含盐流动相)测定奶粉及乳制品中双氰胺的含量.通过实验对2种方法进行比较,确立适合奶粉及乳制品中双氰胺的检测方法,并进行方法学验证.结果表明:梯度法测定双氰胺在0.1002～10.0200μg/mL范围内线性良好(r=0.9996);平均回收率92.8％,最低检测限为0.01μg/mL,可用于奶粉及乳制品中双氰胺含量的测定.     

Determination of cardiac output in neonatal foals by ultrasound velocity dilution and its comparison to the lithium dilution method

Objective – To compare cardiac output (CO) measured by use of lithium dilution (LiDCO) and ultrasound velocity dilution (UDCO) in conditions of high, intermediate, and low CO in anesthetized foals.
Design – Original prospective study.
Setting – University teaching hospital.
Animals – Six foals 1–3 days of age (38–45 kg).
Interventions – Neonatal foals were anesthetized and instrumented to measure direct blood pressure, heart rate, arterial blood gases, and CO. The CO was measured by use of LiDCO and UDCO techniques. Measurements were obtained from each foal at baseline and during low, intermediate, and high CO states. Measurements were converted to cardiac index (cardiac index=CO/body weight) values for statistical analysis. Agreement between the 2 methods was determined using Bland and Altman analysis and concordance correlation coefficients.
Measurements and Main Results – LiDCO determinations of CO ranged between 4.0 and 14.0 L/min resulting in cardiac index ranging between 75.5 and 310 mL/kg/min. There was no significant effect of blood pressure variation on bias or relative bias ( P =0.62 and 0.93, respectively). The mean bias and relative bias of UDCO (±SD) compared with LiDCO were −20.1±39.2 mL/kg/min and −7.7±23.4%, respectively. Concordance correlation coefficient between LiDCO and UDCO was 0.833.
Conclusions – When compared with LiDCO, the UDCO technique has acceptable clinical utility for measuring CO in healthy anesthetized newborn foals.     

快速检测蜂胶制品中蜂胶乙醇提取物含量的方法研究

以95%乙醇为溶剂,根据蜂胶提取物溶于乙醇后在一定的浓度范围内溶液的颜色与溶液的浓度成正比,选取291 nm为检测波长,检测各类蜂胶制品中的蜂胶乙醇提取物含量.     

PEDV、TGEV、PoRV和PKV多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用

为快速鉴别诊断猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪嵴病毒(PKV),根据PEDV的M基因、TGEV的N基因、PoRV的VP6基因和PKV的3D基因序列设计4对特异性引物,通过PCR扩增目的片段并构建重组质粒,建立了一种可同时检测4种病毒的RT-PCR诊断方法,该方法可特异性扩增这4种病毒的相应片段,而对猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)均无扩增,最低检出量分别为1.33×10^4、1.33×10^3、1.33×10^4、1.33×10^5copies/μL。应用该方法对临床55份猪腹泻样品进行检测,结果检测出14份PEDV、1份PoRV和27份PKV,未检出TGEV,其中PEDV和PKV混合感染9份。上述结果表明,建立的多重RT-PCR检测方法快速、特异、敏感,可用于以上4种腹泻病毒的临床检测和流行病学调查。     

我国与美国在兽用细菌类活疫苗安全检验方法上的比较

对美国联邦法规第9篇（CFR9）及《中华人民共和国兽药典（二○○五年版三部）》中细菌类活疫苗安全检验方法及判定标准的异同进行了比较分析,并对我国细菌类活疫苗安全检验方法提出了修改建议。     

利用细菌转座子构建适于家蚕的Bac-to-Bac快速基因表达系统

为了较好地解决家蚕杆状病毒基因表达系统(BmNPV expression system)在重组病毒构建和纯化过程中存在的重组率低、空斑分析技术繁琐、花费时间长等缺点,借鉴国外AcNPV Bac-to-Bac快速基因表达系统工作原理,对家蚕BmNPV基因组进行了改造。通过同源重组的方法,将含有单拷贝数细菌F复制子、插入有细菌转座子整合靶位点、编码LacZα肽的部分DNA片段和抗性选择标记基因的基因片段重组入家蚕BmNPV基因组,替换多角体蛋白基因,获得了家蚕BmNPV病毒穿梭载体BmBacm id;并利用供体质粒上的表达盒和细菌转座子以及细菌转座子的基因定位转移作用,在细菌体内实现外源目的基因向家蚕BmNPV基因组上的转移整合,快速完成重组BmN-PV病毒的构建。     

牛羊猪肉组织中伊维菌素残留量检测HPLC法的改进

对牛、羊、猪肉组织中伊维菌素残留的检测方法进行了改进，样品用乙腈提取，用正己烷脱脂并于50℃减压蒸干。残留物用乙酸乙酯溶解，过C18SPE柱，用乙酸乙酯-甲醇（1：1）溶液洗脱；收集流出液和洗脱液，合并蒸干后于（50±3）℃减压干燥20min；残留物用N-甲基咪唑溶解并与三氟乙酸酐-乙腈（1：2）溶液于（67±2）℃衍生1h。用配荧光检测器的高效液相色谱仪检测。本方法平均回收率为（102．0±6．6）％，批内RSD〈10％，伊维菌素浓度在5～400ng／mL时，呈线性关系，r=0．9997。检测限为2μg／kg。     

鳗菌宁1号中盐酸氟哌酸及盐酸林可霉素含量的测定

利用盐酸林可霉素在紫外区域无吸收峰这一特点，直接用紫外分光光度法在２７３±１ｎｍ波长处测定盐酸氟哌酸的含量；用甲醇分离两组分后，用微生物测定法测定盐酸林可霉素的效价。实验结果，盐酸氟哌酸的回收率为１００．２１％，ＣＶ＝０．３８％；盐酸林可霉素的回收率为９９．２％，ＣＶ＝０．１８％。     

应用图象处理技术估测牧草地上生物量的初步研究

本试验利用计算机对牧草彩色照片提取特征值的图象处理技术得到了牧草的有效面积，叶表层高度，同时使用光度计测定草丛内部光照强度的垂直变化情况，获取有关牧草性状的信息。通过图象处理手段得到的信息与牧草性状之间的关系，建立模型以测定牧草地上部分的现存量，为放牧管理制度提供实施依据。     

现行《动物检疫管理办法》在实际应用中存在的问题及建议分析

做好动物检疫工作,不仅可促进当地家畜及畜产品的流通和贸易,提高畜牧业的经济效益,而且对加强动物疫病防控,保障动物及动物产品安全都具有十分重要的经济效益和社会效益。原中华人民共和国农业部制定的《动物检疫管理办法》,自2010年3月执行以来,时至今日,已有7~8年的历程了,笔者作为一名基层检疫人员,就本办法执行以来存在的问题及建议分析如下。