HPLC测定丛生竹中总黄酮及(异)牡荆苷、(异)荭草苷的含量

以勃氏甜龙竹竹叶为原料,对其中竹叶黄酮的超声提取工艺进行研究,同时采用高效液相色谱法(HPLC)对勃氏甜龙竹、箬竹、浦竹仔及椅子竹中总黄酮及牡荆苷、异牡荆苷、荭草苷、异荭草苷的含量进行测定。结果表明,勃氏甜龙竹超声提取最佳的工艺为:甲醇作为提取溶剂、浓度为70%、料液比为1︰10(w︰v)、超声时间60min、温度40℃。在最佳提取条件下,勃氏甜龙竹中总黄酮得率能达到4.63%。采用高效液相色谱-外标法测定4种丛生竹中总黄酮,含量分别为0.795 2%、1.166 9%、0.092 6%、0.897 2%。勃氏甜龙竹、箬竹和椅子竹中均含有牡荆苷、异牡荆苷、荭草苷及异荭草苷,浦竹仔中仅含有牡荆苷和异牡荆苷。分析方法的建立,为丛生竹化学资源的利用奠定基础。     

鹅毛竹叶酪氨酸酶抑制物提取工艺优化及活性评价

该试验研究鹅毛竹叶酪氨酸酶抑制物的最佳提取工艺及其竹叶特征性成分的含量及活性。采用响应面法优化鹅毛竹叶酪氨酸酶抑制物的提取工艺,在此基础上利用分极法制备酪氨酸酶抑制活性部位(SAE),并采用HPLC法定量分析其中绿原酸、咖啡酸、异荭草苷、荭草苷、对香豆酸、牡荆苷、异牡荆苷、山奈酚和苜蓿素9个竹叶特征性成分;通过DPPH法、ABTS法、FRAP法和酪氨酸酶催化氧化左旋多巴速率法评价SAE及竹叶特征性成分的抗氧化和酪氨酸酶抑制能力。结果显示:鹅毛竹叶酪氨酸酶抑制物的最优工艺参数为乙醇浓度70%,料液比1∶16,提取温度80℃,提取时间1h。以此提取物为原料制备的SAE对酪氨酸酶的抑制IC50为658.46μg/m L,含有绿原酸(0.4285mg/g)、咖啡酸(0.0463mg/g)、异荭草苷(0.2999mg/g)、对香豆酸(0.4593mg/g)、山奈酚(1.7152mg/g)及苜蓿素(2.5513mg/g)6种竹叶特征性成分。其中咖啡酸的抑制酪氨酸酶活性最强,显著高于阳性对照熊果苷,推测为鹅毛竹叶抑制酪氨酸酶的主要活性成分之一。表明鹅毛竹叶是一种来源丰富的酪氨酸酶抑制原料,具有进一步研究和开发的意义。     

HPLC法同时检测刚竹属竹叶中4种黄酮碳苷的含量

建立了HPLC同时检测竹叶中4种黄酮碳苷(异荭草苷、荭草苷、牡荆苷和异牡荆苷)的方法,并测定了这4种常见的黄酮碳苷在24种刚竹属竹叶的含量,以及早园竹4个季度中黄酮碳苷的含量。采用Inertsil ODS-3色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈/0.5%磷酸水溶液(体积比15∶85)为流动相进行等度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长340 nm。实验结果表明:4种黄酮碳苷的质量浓度在1～300 mg/L范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数均在99%以上,加标回收率(n=3)分别为97.14%、100.53%、93.60%和95.66%,RSD值分别为1.11%、1.45%、1.96%和1.43%;24种刚竹属竹叶中黄酮碳苷含量差异显著,4种黄酮碳苷质量分数的总和在286.14～3 838.79 mg/kg之间,毛金竹最高,为3 838.79 mg/kg;早园竹中4种黄酮碳苷的含量随时间变化差异明显,质量分数的总和在1 371.15～4 367.01 mg/kg之间,其中1月份采摘时总质量分数最高,为4 367.01 mg/kg。HPLC法准确度高,适用于竹叶黄酮碳苷的测定。     

毛竹叶黄酮碳苷C-糖基化途径及C-糖基转移酶的分析

【目的】毛竹叶中含有大量具有很强生物活性的黄酮碳苷,C-糖基转移酶(CGT)是黄酮碳苷生物合成代谢途径中C-糖基化的关键酶。本研究从毛竹叶中分离纯化CGT,研究毛竹叶黄酮碳苷的C-糖基化途径以及CGT的酶学性质和一级结构氨基酸序列特征,为后续深入研究毛竹叶中的CGT奠定良好的基础。【方法】通过硫酸铵分层沉淀、透析、葡聚糖凝胶过滤、阴离子交换层析、超滤脱盐等方法纯化CGT,使用SDS-PAGE进行检测。分别用圣草素查尔酮、圣草素、木犀草素作为底物,根据已建立的CGT催化的C-糖基化反应体系,进行可能的C-糖基化途径验证。运用Q-TOF检测分析和数据库搜索比对等方法,确认毛竹CGT的基因序列和一级结构氨基酸序列。【结果】毛竹叶黄酮碳苷CGT的分子量大约是50 kDa,酶反应体系最佳的反应时间是40 min,最佳反应温度是28℃,缓冲盐的最佳pH8.1,底物木犀草素的最佳浓度是31.76μmol·L~(-1)。底物为木犀草素的反应体系在CGT催化下大量转化生成了异荭草苷,底物为圣草素查尔酮和圣草素的反应体系在CGT催化下大量转化生成了未知产物,只有少量转化生成异荭草苷。根据蛋白质质谱裂解规律和蛋白质碎片离子,解析出4个CGT肽段,并均可与毛竹基因(PH01000603G0510)编码的蛋白质氨基酸序列匹配,经数据搜索匹配,毛竹基因(PH01000603G0510)与水稻CGT基因(FM179712)匹配率为81%。【结论】通过对毛竹叶黄酮碳苷C-糖基转移酶提取、分离纯化及质谱鉴定得到可能的毛竹叶黄酮碳苷CGT基因序列(PH01000603G0510)。确定毛竹叶黄酮碳苷C-糖基化途径,主要途径是CGT催化木犀草素和UDP-葡萄糖直接合成异荭草苷,次要途径是CGT催化圣草素查尔酮和UDP-葡萄糖,或圣草素和UDP-葡萄糖间接合成异荭草苷。毛竹叶CGT极易催化生成C-6黄酮苷(异荭草苷),而极少催化生成C-8黄酮苷(荭草苷)。     

HPLC法测定乌韭的荭草苷和牡荆素含量

建立乌韭地上部分荭草苷和牡荆素含量的测定方法,检测不同产地乌韭中两种黄酮苷的含量,对乌韭资源进行评价.用超声波提取法提取,反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定,GeminiC18色谱柱,乙腈/1%磷酸溶液(体积比15∶85)为流动相,流速1 mL/min,检测波长340nm.荭草苷在0.025～0.148μg范围内有良好的线性关系,加样回收率为100.61%,相对标准偏差(RSD)2.18%;牡荆素在0.035～0.207 μg范围内有良好的线性关系,加样回收率为99.77%,RSD 2.37%.云南丘北所产乌韭的荭草苷和牡荆素质量分数都是最高,分别达到0.116 6%和0.145 7%,移栽到南京地区1年后荭草苷含量下降,牡荆素含量增高.以荭草苷和牡荆素含量为指标,云南丘北所产乌韭是较好的种源.     

簕竹属竹叶中黄酮类成分分析及其抗氧化活性

为探索簕竹属主要竹种竹叶提取物中黄酮类成分的开发利用,以簕竹属10个竹种的竹叶为原料,提取、分离和纯化后得到竹叶提取物,建立了测定竹叶提取物中5种黄酮类成分的HPLC方法,采用DPPH法和ABTS法对竹叶提取物的抗氧化活性进行评价。竹叶中5种黄酮类成分异荭草苷、荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷和木犀草苷的HPLC方法为：采用YMC-Pack ODS-A色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),以0.5%乙酸/水溶液(A)和乙腈(B)为流动相,14%B等梯度洗脱40 min,进样量10μL,流速1 mL/min,柱温30℃,检测波长340 nm。此条件下,5种黄酮类成分在40 min内实现完全分离,分离度均大于1.2,其质量浓度与峰面积具有良好的线性相关性,相关系数R²>0.999,加标回收率在94.36%～105.37%之间,相对标准偏差(RSD)在0.98%～3.48%之间,表明该方法稳定可靠。测得的10种簕竹属竹叶提取物中5种黄酮类成分的总量为62.30～223.24 mg/g,其中凤尾竹竹叶提取物中的质量分数最高,为223.24 mg/g。10种簕竹属竹...     

竹叶黄酮和香豆素类内酯的提取及含量比较

以淡竹叶中总黄酮和香豆素类内酯为研究对象,通过单因素考察,优化得到了较佳提取工艺条件:粒径80目,乙醇浓度70%(v/v),提取温度80℃,提取时间1h,料液比30∶1(mL/g),提取2次。该工艺条件下,淡竹叶总黄酮和香豆素类内酯得率分别为19.61mg/g和9.38mg/g。此外,对淡竹、毛竹、孝顺竹、箬竹和早竹叶中的黄酮与内酯含量进行了测定与比较,结果表明,淡竹叶中两者含量相对较高。     

低共熔溶剂提高积雪草有效成分提取效率的研究

本研究采用低共熔溶剂法提取积雪草中有效成分,通过气相色谱法分析馏出液中β-石竹烯的浓度;采用高效液相色谱法分析水提取液中羟基积雪草苷和积雪草苷的浓度,并计算得率;检测积雪草提取前后纤维素、半纤维素和木质素的含量,并且采用扫描电镜进行组织结构形态观察。结果显示：(1)低共熔溶剂法馏出液中β-石竹烯的浓度为6.58μL·mL^-1,较水蒸气蒸馏法提高6.15倍;(2)低共熔溶剂法提取羟基积雪草苷和积雪草苷得率分别为1.03%和0.89%,分别较水提取法提高1.40倍和3.68倍;(3)低共熔溶剂提取后的积雪草渣中纤维素、半纤维素和木质素含量分别较原料下降61.39%、59.19%和59.33%,而水蒸气蒸馏法仅下降31.29%、12.43%和2.30%;(4)低共熔溶剂提取后的积雪草渣中的组织结构破坏程度较水提取更严重。由此可知,低共熔溶剂可显著提高积雪草中有效成分的得率,其作用机制是通过溶解植物体的纤维素、半纤维素和木质素,破坏植物组织结构,从而促进有效成分溶出。研究成果为高效提取积雪草工艺提供了研究基础。     

HPLC法测定木豆中牡荆苷和异牡荆苷含量

建立了测定木豆叶、茎、根中牡荆苷和异牡荆苷含量的高效液相色谱分析方法.色谱柱为HIQ Sil C18V(250 mm × 4.6 mm,5 μm);流动相为甲醇-水-甲酸(体积比35:64.74:0.26); 检测波长330 nm;流速1 mL/min;进样量10 μL; 柱温30 ℃.在2～200 mg/L 牡荆苷、异牡荆苷质量浓度与色谱峰面积线性关系良好; 牡荆苷峰面积精密度的相对标准偏差(RSD)最大为2.93 %,重复性RSD为2.91 %,加样回收率为97.38 %; 异牡荆苷峰面积精密度的RSD最大为2.69 %,重复性RSD为3.37 %,加样回收率为98.63 %.木豆叶、茎、根中牡荆苷、异牡荆苷的质量分数分别为0.768、 0.066、 0.183 mg/g 和0.799、 0.139、 0.013 mg/g.叶中牡荆苷和异牡荆苷含量明显高于茎、根中的含量,可以作为大规模获得牡荆苷、异牡荆苷的资源.     

粉单竹竹叶黄酮提取工艺的初步研究

比较了几种溶剂对粉单竹竹叶黄酮的提取效果,研究了温度、溶剂浓度、提取时间、料液比等因素对黄酮提取的影响。试验表明粉单竹竹叶黄酮的最佳提取工艺为:丙酮浓度40%,时间2 h,料液比1∶20,温度60℃。影响竹叶黄酮提取的各种因素的大小依次为:丙酮浓度时间料液比温度。索氏抽提法得到的黄酮提取率高于浸提法。自然干燥的竹叶的提取率高于冷冻干燥得到的竹叶的提取率。     

AlCl3促进毛竹低共熔体系预处理效率的研究

研究了一种AlCl₃辅助的低共熔溶剂（DES）预处理毛竹的方法。合成了以氯化胆碱和AlCl₃为氢受体，愈创木酚为氢供体的低共熔溶剂，考察了低共熔溶剂中AlCl₃用量对毛竹原料的化学组成、物料得率和后续酶水解效率的影响，结果表明：随着AlCl₃用量的增加，预处理物料木聚糖和木质素含量逐渐降低，葡聚糖含量升高，葡聚糖酶水解得率显著提高。当AlCl₃用量为1.32%（摩尔分数）,氯化胆碱、愈创木酚和AlCl₃物质的量比为25∶50∶1)时，预处理效果达到最佳，预处理物料得率为57.16%,葡聚糖和木聚糖回收率分别为95.95%和12.84%,木质素脱除率为74.88%,葡聚糖酶水解得率由未添加AlCl₃时的11.16%提高到96.20%,表明AlCl₃可以有效促进DES体系对毛竹中木聚糖和木质素的溶解。通过XRD、SEM和FT-IR分析对预处理后物料进行表征。XRD分析结果表明预处理物料的结晶度随着AlCl_3...     

油茶枯饼中黄酮类化合物的提取及抗氧化活性研究

研究油茶枯饼中黄酮类化合物的提取工艺,采用L9(34)正交试验设计考察提取时间、乙醇体积分数、液料比和提取温度对产品得率的影响,并采用DPPH法和FTC法考察其抗氧化活性。结果表明,黄酮类化合物的较佳提取工艺为:提取时间2 h,乙醇体积分数60%(v/v),液料比30:1(mL:g),提取温度90℃。在此条件下黄酮苷1和黄酮苷2得率分别为12.56%和13.03%,提取物具有明显的抗氧化活性。     

蒸汽爆破预处理对杜仲皮活性成分和杜仲胶提取的影响

对杜仲皮先进行蒸汽爆破预处理,然后利用纤维素酶对预处理杜仲皮进行水解提取活性成分及杜仲胶。考察了蒸汽爆破预处理条件对杜仲皮中活性成分及杜仲胶得率和杜仲胶相对分子质量的影响。研究结果显示:乙醇超声波提取未预处理杜仲皮中活性成分的较优条件为:1 g杜仲皮粉末,以乙醇为溶剂,乙醇体积分数40%,料液比1∶10(g∶mL),超声功率200 W,提取温度40℃,提取40 min。在此条件下,以蒸汽爆破预处理杜仲皮为原料,当预处理蒸汽压力为3.25 MPa、预处理时间为1 min时,乙醇超声波提取黄酮和绿原酸的得率分别为26.83和1.22 mg/g,纤维素酶水解提取黄酮和绿原酸的得率分别为19.17和0.93 mg/g。预处理后的杜仲皮经酶解后固体残渣可用于提取杜仲胶,当预处理压力为0.52 MPa、预处理时间为15 min时,杜仲胶得率可达5.92%,其M_w和M_n分别为28.39×10~4和6.45×10~4。     

响应面法优化超声波辅助乙醇/盐双水相萃取栀子中京尼平苷

采用超声波辅助乙醇/盐双水相萃取技术对栀子中京尼平苷的提取分离效果进行了系统研究,在单因素试验基础上,采用响应曲面试验设计进行优化,进一步比较了该方法与超声波溶剂提取法、热回流提取法等传统方法对京尼平苷的提取效果。结果表明:超声波辅助乙醇/盐双水相萃取的最佳工艺条件为构建10.0 g乙醇/NaH_2PO_4双水相体系,其中加入无水乙醇4 m L(即体系中乙醇质量分数为31.56%),NaH_2PO_4质量分数为15.00%,超声波温度为30℃,超声波时间为30 min,栀子干粉加入量为0.03 g,上相中京尼平苷的得率为51.77 mg/g。该方法提取时间短、提取温度较低,而且得率较高,对栀子中京尼平苷的提取效果明显优于超声波溶剂提取法和热回流提取法等传统方法。     

微波辅助提取竹叶内酯的工艺研究

探索了微波辅助提取竹叶内酯的工艺。在单因素实验的基础上,利用响应面分析法对工艺参数进行优化,并将该工艺条件和乙醇加热回流提取法进行比较。结果表明:微波辅助提取法是一种快速有效提取竹叶内酯的方法,其较佳工艺条件为:辐射时间6.2min,微波功率620W,乙醇浓度55%,液料比30mL/g。在此提取工艺条件下,竹叶内酯的提取率可达到7.56mg/g。与乙醇加热回流法比较,微波辅助提取竹叶内酯的提取率高出10%,溶剂用量减少50%,提取时间大大缩短。     

水竹叶总黄酮的提取及纯化工艺研究

以水竹叶为原料，采用水浴和超声波两种提取方法，通过单因素与正交试验确定了水竹叶总黄酮提取的最佳条件，并筛选了不同树脂对总黄酮的吸附和解吸附特性。实验结果表明：水浴提取最佳条件为：温度50℃，提取时间2．0h，乙醇体积分数60％，固液比1：20（g：mL，下同）；总黄酮得率1.65％。影响得率的因素为：固液比〉乙醇体积分数〉提取温度〉提取时间。超声波提取最佳条件为：2．0g水竹叶，超声波作用时间30min，乙醇体积分数60％，固液比1：15；总黄酮得率为1．27％。影响得率的因素为：超声波作用时间〉乙醇体积分数〉固液比。AB-8树脂对总黄酮纯化具有较好效果，体积分数为70％的乙醇是较好的解吸剂。     

竹叶制备糊状叶绿素的工艺研究

在单因素试验的基础上,利用L9(34)正交试验法研究了竹叶中叶绿素的提取工艺.结果表明,以乙醇为溶剂,竹叶叶绿素的最佳提取条件为:乙醇体积分数80％、液固比25∶ 1.5(mL∶g)、提取温度60℃、提取时间3.5h,叶绿素的得率0.49％.制备的糊状叶绿素,检验结果符合化工产品企业标准.     

正交设计优化鸡毛竹叶子抗氧化物的提取工艺

探索一条高效的鸡毛竹叶子抗氧化物的提取工艺.以提取物清除DPPH自由基的半抑制浓度IC50为指标,在单因素试验的基础上采用L9(34)正交试验法对鸡毛竹叶子抗氧化物质的提取工艺进行优化.结果表明提取温度、料液比、乙醇浓度和提取时间对竹叶抗氧化物提取均具有显著影响,优化的鸡毛竹叶子抗氧化物的提取条件为:提取温度80℃,料液比1∶20,乙醇浓度90％,提取时间80 min,提取物清除DPPH自由基IC50为0.3098 mg/mL,提取物中含有总酚3.34％,总萜2.89％.为鸡毛竹叶的开发利用提供理论依据.     

超声波提取刺五加主要酚苷及苷元的工艺优化

采用超声波提取的方法从刺五加根茎中提取紫丁香苷、刺五加苷E和异秦皮啶等有效成分,考察超声波提取时间、乙醇体积分数、料液比和超声波功率等因素对提取的影响.应用Box-Behnken中心组合进行3因素3水平的试验设计,分别以3种目标产物的得率与纯度作为响应值进行工艺优化.响应面法优化后提取工艺条件为:乙醇体积分数59.66%、刺五加与乙醇的料液比1:6(g:mL)、提取时间44.9 min、超声波功率150 W.最佳条件下浸膏中刺五加主要酚苷及苷元的质量分数为2.923%,其中含紫丁香苷1.3%,刺五加苷E 1.53%,异秦皮啶0.093%;浸膏得率为6.77%.     

水竹叶总黄酮的提取及纯化工艺研究

以水竹叶为原料,采用水浴和超声波两种提取方法,通过单因素与正交试验确定了水竹叶总黄酮提取的最佳条件,并筛选了不同树脂对总黄酮的吸附和解吸附特性.实验结果表明:水浴提取最佳条件为:温度50 ℃,提取时间2.0 h,乙醇体积分数60%,固液比1:20(g:mL,下同);总黄酮得率1.65%.影响得率的因素为:固液比＞乙醇体积分数＞提取温度＞提取时间.超声波提取最佳条件为:2.0 g水竹叶,超声波作用时间30 min,乙醇体积分数60 %,固液比1:15;总黄酮得率为1.27%.影响得率的因素为:超声波作用时间＞乙醇体积分数＞固液比.AB-8树脂对总黄酮纯化具有较好效果,体积分数为70%的乙醇是较好的解吸剂.